潤眾（恩替卡韋分散片）研究報告

潤眾（恩替卡韋分散片）

研究報告

主要內(nèi)容一、潤眾的生產(chǎn)工藝二、潤眾的藥學研究三、潤眾的生物等效性原料藥輔料制?；靹蛘８稍飰浩?、包衣、內(nèi)包裝、外包裝原料藥工藝設(shè)備連云港潤眾制藥廠恩替卡韋的化學結(jié)構(gòu)化學名：2-氨基-9-[(1S,3R,4S)-4-羥基-3-羥甲基-2-亞甲戊基]-1,9-二氫-6H-嘌呤-6-酮-水合物分子式：C12H15N5O3?H2O

分子量：295.3手性（Chirality）

在自然界中廣泛存在氨基酸自然界中為L型核苷酸中的糖自然界中為D型手性碳原子ABCDDABC

R-構(gòu)型

S-構(gòu)型左手（手性藥物）左手套（生物大分子）不匹配匹配左手套（生物大分子）右手（手性藥物）互為對映體手性藥物作用模式均為雜質(zhì)恩替卡韋手性藥物的工藝難點及解決方法

難點1合成如何解決手性的問題，在合成過程中制備出我們真正想要的空間構(gòu)像，是手性合成工藝中的重點和難點。難點2純化手性藥物純化過程中將其他構(gòu)像的雜質(zhì)含量降到最低，是手性純化工藝中的難點。一、恩替卡韋原料合成工藝合成工藝1：施貴寶目前工藝路線1.合成工藝2：施貴寶專利路線2.合成工藝3：正大天晴專利工藝路線3..條條大路通羅馬！專利號：WO9809964

專利號：WO2004052310專利號：ZL200610088464.8三條工藝路線的比較工藝1：路線較短，但直接使用鳥嘌呤開環(huán)反應產(chǎn)率低，產(chǎn)物為立體異構(gòu)體混合物，需用多次硅膠層析法進行分離純化，后處理繁瑣。工藝2：路線較短，也使用鳥嘌呤開環(huán)反應，同時由于使用了硅烷作為OH的前體，脫硅烷基時，需要非常強烈的條件，影響純度和產(chǎn)率，需要用樹脂層析，生產(chǎn)成本高，不具有工業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)勢，只是為專利保護而設(shè)計。施貴寶正大天晴工藝：避開了專利保護，雖然路線較長，但是關(guān)鍵中間體均為固體，后處理簡便，質(zhì)量更易控制。潤眾原料研究：結(jié)構(gòu)確證正大天晴對恩替卡韋成品進行了紅外（IR），紫外（UV），核磁（1H-NMR、13C-NMR、HMQC、HMBC），高分辨質(zhì)譜（HRMS），差熱分析（DSC）和X-射線粉末衍射等一系列測定，解析結(jié)果與恩替卡韋化學結(jié)構(gòu)完全相符，元素分析結(jié)果符合化學結(jié)構(gòu)中各元素的理論值，熱重分析（TG）證實本品為一分子水合物。在結(jié)構(gòu)確證研究中，正大天晴還使用了單晶X射線衍射：目前確定化學分子結(jié)構(gòu)、尤其是對手性化合物中手性碳原子絕對構(gòu)型以及晶型公認最為有效的測試方法，測試結(jié)果顯示正大天晴恩替卡韋分子中的五元環(huán)的C1、C3和C4位置構(gòu)型為S、R和S（見下圖），三個手性碳原子的構(gòu)型與原研公司上市產(chǎn)品完全一致，晶型為一水合物晶體，也與原研公司產(chǎn)品一致。恩替卡韋單晶X射線衍射圖-----福州大學測試中心二、恩替卡韋原料藥的純化手性色譜柱分離：通過手性固定相與手性分子特異結(jié)合，從而將不同構(gòu)型的手性分子分離，得到有效構(gòu)型恩替卡韋作用靶點作用靶點AAAABBBBCCCC潤眾的質(zhì)量標準天晴標準檢測出的雜質(zhì)個數(shù)及總量均明顯高于進口標準，天晴的質(zhì)量控制標準更高正大天晴通過對雜質(zhì)檢測方法的控制（HPLC測定條件的調(diào)控），得出更為靈敏的檢測方法（RZJC）；對于同一批號的制劑，分別用天晴檢測方法與進口檢測方法檢測，數(shù)據(jù)如下：比較內(nèi)容最大單雜（%）總雜（%）雜質(zhì)數(shù)（個）最后一個雜質(zhì)洗出時間（分鐘）系統(tǒng)適用性試驗恩替卡韋和雜質(zhì)分離度和非對映體2和非對映體3進口標準0.180.901221.52.883.11天晴標準0.221.402724.31.813.74潤眾制劑純度結(jié)果顯示：潤眾的純度顯著高于進口制劑樣品批號081212090101090201090202090203090204進口制劑有關(guān)物質(zhì)（％）單一雜質(zhì)0.060.060.030.090.090.070.13總雜質(zhì)0.330.350.300.690.680.320.82用同一種測定方法分別對潤眾與進口制劑的有關(guān)物質(zhì)（雜質(zhì)）進行測定，結(jié)果如下：潤眾制劑研究：等量遞增法混勻制劑含量均勻度測定值（A+1.8S）均控制在5.0以下（限度為15）多批次驗證，均符合規(guī)定。等量遞增法反復摸索工藝參數(shù)0.5mg/片極低規(guī)格制劑關(guān)鍵技術(shù)：混勻存在難題解決辦法實驗結(jié)果等量遞增法：潤眾制劑通過對幾種輔料及有效成份的等量條件的反復摸索，最終得出含量均勻度測定值低于5.0，國家藥典標準為15以內(nèi)研發(fā)團隊：正大天晴的藥物研究院經(jīng)過多年的發(fā)展

已經(jīng)形成了500多人的專業(yè)研發(fā)隊伍，

其中碩士230人，博士70人。研發(fā)平臺：與國內(nèi)的上海醫(yī)工院、中國藥科大學

等七家單位建立合作關(guān)系；與國外的美國華生、英國國家醫(yī)學研究

院等八家單位合作研發(fā)研發(fā)實力首批首家認證生產(chǎn)車間為國內(nèi)首批首家通過新版GMP認證的車間

先進設(shè)備固體制劑車間車間主要設(shè)備有濕法制粒及流化床系統(tǒng)（德國GEA），高速壓片機（德國菲特）、高速膠囊充填機（德國博世）、高效薄膜包衣機（德國OYSTAR）、高速鋁鋁泡罩包裝線（德國烏爾曼）。達到全自動電腦監(jiān)控混粉、缺陷產(chǎn)品全自動剔除包裝。德國GEA配制設(shè)備固體制劑車間：德國菲特壓片機固體制劑車間：德國格拉特配制設(shè)備德國烏爾曼高速鋁-鋁泡罩裝盒機檢驗中心：進口檢測設(shè)備二、潤眾藥學研究1、溶出度溶出度(Dissolutionrate)也稱溶出速率，是指在規(guī)定的溶劑和條件下，藥物從片劑、膠囊劑、顆粒劑等固體制劑中溶出的速度和程度。測定固體制劑溶出度的過程稱為溶出度試驗(Dissolutiontest)，它是一種模擬口服固體制劑在胃腸道中的崩解和溶出的體外試驗方法。取本品，照溶出度測定法（中國藥典2005年版二部附錄XC第二法），以pH6.8的磷酸鹽緩沖液1000ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50r/min，依法操作，經(jīng)30min時，取溶液適量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。計算每片的溶出量。限度為標示量的80％，應符合規(guī)定結(jié)果：均符合規(guī)定

溶出度試驗含量均勻度（Contentuniformity）是指小劑量口服固體制劑、粉霧劑或注射用無菌粉末中的每片（個）含量偏離標示量的程度。取供試片10片，分別測定每片以標示量為100%的相對含量X，求其平均和標準差S以及標示量與均值之間的絕對值A(chǔ)=|100-|2、含量均勻度取本品10片，分別置于50ml量瓶中，加流動相適量，充分振搖使在溶液中分散，照含量測定項下的方法，依法測定，計算含量，應符合規(guī)定（中國藥典2005年版二部附錄XE）結(jié)果：均符合規(guī)定含量均勻度試驗影響因素試驗加速試驗室溫長期試驗結(jié)果本品經(jīng)4500Lx光照；室溫25℃,92.5%放置10天；高溫40℃、RH75%放置6個月和長期試驗12個月。在外觀色澤、有關(guān)物質(zhì)、含量及溶出度等各項指標及色譜圖與0天比較均無明顯變化。表明：本品穩(wěn)定性良好3、穩(wěn)定性試驗高溫高濕試驗130308301批潤眾含量（%）溶出度（%）有關(guān)物質(zhì)（%）最大單雜總雜初始檢測101.91010.070.3325℃、RH92.5%，24h99.91000.080.2840℃、RH75%，24h100.11010.080.2925℃、RH92.5%，48h100.41000.080.2840℃、RH75%，48h100.51010.080.28結(jié)果顯示：潤眾在高溫高濕條件，藥品的含量，溶出度及純度都無顯著影響負責單位：北京大學第一醫(yī)院參加單位：復旦大學附屬華山醫(yī)院上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院四川大學華西醫(yī)院重慶醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院第三軍醫(yī)大學附屬第一醫(yī)院華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院正大天晴恩替卡韋臨床研究3348周數(shù)據(jù)已被2012亞太肝病年會收載3496周數(shù)據(jù)已被2012美國肝病年會接收小結(jié)恩替卡韋分散片經(jīng)溶出度、含量均勻度和穩(wěn)定性試驗考察，結(jié)果表明符合國家藥品標準要求。與市售品比較，經(jīng)統(tǒng)計分析無顯著差異。國際認可三、潤眾恩替卡韋分散片

健康人體相對生物利用度及生物等效性研究生物利用度（bioavailability）是指藥物被機體吸收進入循環(huán)的相對量和速率F=（A/D）×100%,A為進入體循環(huán)的量，D為口服劑量。生物利用度是藥物制劑質(zhì)量的一個重要指標。相對生物利用度：兩種制劑生物利用度的比較：Tmax、Cmax、AUC。試驗設(shè)計單次給藥多次給藥受試劑（潤眾）參比劑（進口恩替卡韋）相對生物利用度受試劑（潤眾）參比劑（進口恩替卡韋）09天潤眾平均相對生物利用度

是進口恩替卡韋的107.5±24.7%(單次給藥）潤眾平均相對生物利用度

是進口恩替卡韋的110.5±36.4%（多次給藥）小結(jié)潤眾恩替卡韋分散片化學結(jié)構(gòu)與進口恩替卡韋一致受試制劑潤眾恩替卡韋分散片經(jīng)溶出度、含量均勻度和穩(wěn)定性試驗考察，符合國家藥品標準要求受試制劑潤眾恩替卡韋分散片與參比制劑進口恩替卡韋藥代動力學數(shù)據(jù)相似，生物等效正大天晴恩替卡韋臨床研究

144周結(jié)果匯報參加研究單位負責單位：北京大學第一醫(yī)院參加單位：復旦大學附屬華山醫(yī)院上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院四川大學華西醫(yī)院重慶醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院第三軍醫(yī)大學附屬第一醫(yī)院華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院4448周數(shù)據(jù)已被2012亞太肝病年會收載4596周數(shù)據(jù)已被2012美國肝病年會接收研究方法

采用隨機雙盲、陽性藥物（美國施貴寶公司生產(chǎn)的恩替卡韋平行對照、多中心的臨床試驗。完成48周恩替卡韋治療后申報注冊，本研究繼續(xù)進行至240周。

HBeAg(+)慢性乙肝HBeAg

(-)慢性乙肝A組（0.5mg，QD）B組（0.5mg，QD）正大天晴恩替卡韋組(0.5mg，QD）A組（0.5mg，QD）B組（0.5mg，QD）正大天晴恩替卡韋組（0.5mg，QD）基線24周48周揭盲研究設(shè)計

馬來酸恩替卡組(0.5mg，QD）正大天晴恩替卡韋組

(0.5mg，QD）馬來酸恩替卡韋組正大天晴恩替卡韋組

（0.5mg，QD）96周

5年采用隨機、雙盲、陽性對照、多中心臨床試驗法組別說明48周二次揭盲，A組為進口恩替卡韋，

B組為正大天晴ETV48-144周延續(xù)A組為進口恩替卡韋→正大天晴ETV組

B組為正大天晴ETV組病例數(shù)變化情況（0-48-96-144w）入組279例HBeAg（+）220例A組111例A組110例A組106例A組104例A組85例B組109例B組108例B組105例B組98例B組87例HBeAg（-）59例A組28例A組26例A組25例A組23例A組23例B組31例B組31例B組31例B組31例B組30例入組基線48周96周144周檢測方法HBVDNA檢測：羅氏二代CobasTaqman實時(real-time)定量PCR法測定，最低檢測下限值為20IU/ml；HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe檢測：雅培微粒子酶免疫熒光法測定；耐藥檢測：提取HBVDNA，P區(qū)PCR擴增直接測序。以上檢測，統(tǒng)一收集標本，由中心實驗室(北京大學第一醫(yī)院病毒研究室)專人統(tǒng)一檢測。ALT由各研究協(xié)作單位檢驗科檢測。肝組織學檢測：用KnodellHAI計分和Ishak纖維化評分。統(tǒng)一由南京軍區(qū)總醫(yī)院病理科周曉軍專人統(tǒng)一檢測。療效判定標準(一)主要療效指標：治療后血清HBVDNA水平較基線下降值療效判定標準(二)次要療效指標：1.病毒學應答：

(1)血清HBVDNA低于檢測下限值：HBVDNA<20IU/ml；

(2)血清HBVDNA應答：HBVDNA<52IU/ml（<300copies/ml)；2.HBeAg轉(zhuǎn)陰率；3.HBeAg血清轉(zhuǎn)換率；4.血清ALT復常率；5.組織學改善率；

指標A組(n=136)B組(n=139)組間比較年齡（歲）32.29±9.61(18-62)32.29±10.39(18-63)P=0.9980性別(男)101(74.26%)105(75.54%)P=0.7826病程（年）M±Q5.00±8.006.00±7.00P=0.4571HBVDNA水平(logIU)HBeAg(+)慢性乙肝7.67±0.987.68±0.91P>0.05HBeAg(-)慢性乙肝6.33±1.136.40±1.29P>0.05ALT(IU/ml)147.61±89.97153.48±104.60P>0.05HBV基因型

B型例數(shù)(％)69(51.49)68(48.51)P>0.05C型例數(shù)(％)65(48.51)69(51.49)P>0.05NUC初治例數(shù)(％)128（94）129（93）P>0.05NUC經(jīng)治例數(shù)(％)8（6）10（7）基因型耐藥LVD耐藥(rtL或/和rtM204V/I)12P>0.05ADV耐藥(rtA181T或/和rtN236T)32P>0.05兩組基線人口統(tǒng)計學和疾病基本特征的比較兩組基線人口統(tǒng)計學和疾病基本特征相比無統(tǒng)計學差異，具有可比性。

兩組治療慢性乙型肝炎的療效及比較分層時間點組別n±sMinMaxMQ統(tǒng)計量PHBeAg（＋）120周A組861.240.800.003.591.300.12-0.750.4555B組871.330.760.003.641.300.17144周A組851.270.730.003.691.300.03-0.680.4944B組871.360.810.004.191.300.32HBeAg（-）120周A組230.400.610.001.300.001.30-0.970.3338B組280.560.660.001.450.001.30144周A組230.230.500.001.300.000.00-2.640.0831B組300.690.660.001.301.301.30兩組第三年HBVDNA水平(lgs)的比較兩組間比較采用wilcoxon秩和檢驗，統(tǒng)計量為Z分層時間組別n療前－療后（療前－后）95%CI組內(nèi)前后比較差值的組間比較±s下限上限tPFPHBeAg（+）用藥120周A組866.391.206.146.6549.58<.00010.090.770B組876.341.076.126.5755.52<.0001用藥144周A組856.361.176.106.6149.96<.00010.070.788B組876.311.106.086.5553.35<.0001HBeAg（-）用藥120周A組235.961.185.456.4724.16<.00010.220.639B組285.781.345.266.3022.77<.0001用藥144周A組236.131.055.676.5828.05<.00012.270.139B組305.651.125.236.0727.62<.0001兩組第三年訪視HBVDNA較基線下降值的比較注：組內(nèi)前后比較采取配對t檢驗。兩組間比較用兩因素方差分析，因素一為組別，因素二為中心，下同。

時間分層分組例數(shù)轉(zhuǎn)陰例數(shù)轉(zhuǎn)陰率(%)P用藥120周HBeAg（+）A組865867.440.7489B組875664.37HBeAg（-）A組2323100.001.0000B組28

27

96.43用藥144周HBeAg（+）A組856070.590.6242B組875866.67HBeAg（-）A組2323100.001.0000B組3030100.00兩組HBVDNA低于檢測限(<20IU/mL)比例時間分層分組例數(shù)轉(zhuǎn)陰例數(shù)轉(zhuǎn)陰率(%)P用藥120周HBeAg（+）A組867283.720.8412B組877181.61HBeAg（-）A組2323100.001.0000B組2828100.00用藥144周HBeAg（+）A組857385.880.3028B組877080.46HBeAg（-）A組2323100.001.0000B組3030100.00兩組HBVDNA低于檢測限(<52IU/mL)比例轉(zhuǎn)陰率的組間比較采用精確概率法時間點分組可評價病例轉(zhuǎn)陰例數(shù)陰轉(zhuǎn)率(%)組間比較P用藥120周A組853035.290.6247B組852630.59用藥144周A組853743.530.7574B組873540.23第三年治療后HBeAg轉(zhuǎn)陰率時間點分組可評價病例數(shù)轉(zhuǎn)換例數(shù)陰轉(zhuǎn)率(%)組間比較P用藥120周A組791215.190.6769B組831518.07用藥144周A組791721.521.0000B組851821.18兩組治療后HBeAg血清轉(zhuǎn)換時間點分層分組療前陽性例數(shù)復常例數(shù)復常率(%)組間比較P用藥120周HBeAg（+）A組827793.900.2801B組857588.24HBeAg（-）A組212095.240.3756B組282485.71用藥132周HBeAg（+）A組797088.610.4926B組816883.95HBeAg（-）A組211990.481.0000B組282589.29用藥144周HBeAg（+）A組827085.370.6764B組857082.35HBeAg（-）A組211990.480.6830B組272385.19兩組第三年治療后ALT復常情況復常率的組間比較采用精確概率法48周組織學結(jié)果--Knodell評分組別例數(shù)改善（%）未改善