氨基甲酸酯柱后衍生檢測(cè)方案書介紹

氨基甲酸酯TW-PCD柱后衍生設(shè)備檢測(cè)方案書介紹農(nóng)殘檢測(cè)辦法重要有液相色譜法、光譜法、氣質(zhì)聯(lián)用等，其中柱后衍生的高效液相法辦法簡(jiǎn)樸、可靠、敏捷度高。泰特儀器衍生系統(tǒng)引進(jìn)國(guó)外先進(jìn)的溫度控制技術(shù)和核心的控制元器件，各項(xiàng)性能均能達(dá)成國(guó)外同類型儀器的指標(biāo)，完全能夠滿足農(nóng)業(yè)部有關(guān)原則的規(guī)定。且性能價(jià)格比遠(yuǎn)優(yōu)于進(jìn)口產(chǎn)品。柱后衍生原理背景氨基甲酸酯類農(nóng)藥由于高效、經(jīng)濟(jì)而被廣泛應(yīng)用于蔬菜水果種植過程，但會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重污染，并引發(fā)中毒。年公布的我國(guó)農(nóng)業(yè)原則NY/T761中，柱分離后在線水解生成的甲胺進(jìn)行熒光衍生的檢測(cè)辦法作為蔬菜和水果中氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測(cè)辦法被采納。N-氨基甲酸酯類化合物經(jīng)反相色譜法分離，柱后在堿的條件下水分解生成甲胺。生成的甲胺與一級(jí)胺的熒光衍生化試劑O-苯二甲醛（OPA）反映，進(jìn)行較高敏捷度的熒光檢測(cè)。氨基甲酸酯的普通構(gòu)造是N-甲基取代氨基甲酸酯，有不同的成酯基團(tuán)。構(gòu)造分子式如圖圖中的10種氨基甲酸酯的分離可用5μmC18柱溫恒定、以水/甲醇梯度洗脫。其出峰次序根據(jù)其相對(duì)的疏水性。氨基甲酸酯（methiocarb）疏水性最強(qiáng)，最后被洗脫出來。分析過程：氨基甲酸酯首先被NaOH溶液在100℃水解形成醇、碳酸鹽、和甲胺。第二次反映中甲胺與鄰苯二甲醛（OPA）和親和試劑ThiofluorTM試劑反映形成一種高熒光的衍生物。注意：1-萘酚不需要衍生也有熒光，胺甲萘水解后衍生也生成1-萘酚，但是兩者含有不同的保存時(shí)間。這一特點(diǎn)可被用于故障診療。基本樣品制備下面是對(duì)蔬菜和水樣品的制備。更多的細(xì)節(jié)請(qǐng)參看EPA531.2對(duì)飲用水的檢測(cè)，AOAC對(duì)蔬菜的檢測(cè)。對(duì)蔬菜樣品的檢測(cè)用已睛提取氨基甲酸酯，用甲醇重新溶解，用0.45μm濾膜過濾對(duì)水樣品的檢測(cè)采樣原則EPA采用原則1加1.8mLClorAC緩沖液到60mL樣品瓶（井水和河水見注釋）2如果樣品被氯化，每60ml樣品加入5mg硫代硫酸鈉。3將去氯化的樣品加入到樣品瓶中，密封并混勻。410℃儲(chǔ)存，4℃下運(yùn)輸可保存28天。樣品制備用0.45μm濾膜過濾2mL樣品進(jìn)樣量200-400μL對(duì)原則品和空白：將10mLChorAC用色譜純水稀釋至1000mL注釋：井水和河水中含有膠狀鐵離子。如果樣品未過濾便儲(chǔ)存，那么鐵離子只有在反映器碰到NaOH時(shí)才又沉淀出來。因此推薦先用0.45μm濾膜過濾后再用ChlorAC溶液保存。試劑制備氨基甲酸酯的分析需要兩中衍生試劑：水解試劑（NaOH）和鄰苯二醛注意：初次使用前必須對(duì)試劑瓶、管線和泵進(jìn)行清洗，再用甲醇沖洗，以較少熒光背景。試劑1，水解試劑關(guān)掉氣源清洗試劑瓶并用甲醇沖洗，用蘸過甲醇的干凈紙巾擦拭吸取管。水解試劑不需要制備。直接將水解試劑（CatNoCB130）倒入試劑瓶中。蓋上瓶蓋，關(guān)閉進(jìn)氣閥。水解試劑會(huì)始終很溫度注意：不推薦自己配制水解試劑，由于高純度的NaOH很達(dá)成。試劑2：OPA試劑1將945mLOPA稀釋劑（CatNoCB910）倒入試劑瓶，留5mL第五步使用。2蓋上瓶蓋，打開進(jìn)氣閥，啟動(dòng)氣源。使惰性氣體噴射滿全瓶。持續(xù)冒泡10分鐘3將100mgOPA（CatNOO120）溶解于10mL色譜純甲醇中。4關(guān)閉氣源，打開瓶蓋。將OPA溶液倒入已經(jīng)去氧的稀釋液中。5溶解2gThiofluorTM（CatNO3700-）與第一步留下的5mLOPA稀釋液中并倒入試劑瓶。6蓋上瓶蓋，打開氣源，使其噴射幾分鐘后關(guān)閉進(jìn)氣閥。輕輕搖動(dòng)試劑瓶使其完全混勻。注意：不推薦自行配制OPA稀釋液，由于硅酸鈉包含許多重金屬離子和不溶物質(zhì)。它們將會(huì)沉淀在反映器和流通池中。一年的質(zhì)保不涉及此種污染帶來的損壞。OPA試劑對(duì)氧敏感并會(huì)降解。當(dāng)OPA試劑瓶中充滿惰性氣體時(shí)，OPA試劑的活性和保持2周。柱后分析條件屏幕顯示：4位LED實(shí)際溫度顯示(紅色)4位LED設(shè)定溫度顯示(綠色氨基甲酸酯分析推薦的柱后衍生條件，有關(guān)的HPLC條件參見樣品譜圖與梯度洗脫部分。試劑1：CB130,水解試劑（NaOH）試劑2：鄰苯二醛和ThiofluorTM于CB190稀釋液中泵1：流速：0.30ml/min泵2：流速：0.30ml/min反映器1：500μL100℃反映器2：100μL室溫分析過程在最初條件下讓色譜柱平衡約20分鐘注射10μL氨基甲酸酯測(cè)試混合液（或者一定體積的自制原則品），收集第一張譜圖。樣品譜圖與梯度洗脫下列峰名應(yīng)用與本節(jié)的全部譜圖1涕滅威亞砜7殘殺威2涕滅威砜8卡巴呋喃3草氨酰9胺甲萘4甲氨叉威101-萘酚53-羥基卡巴呋喃11氨基甲酸酯6涕滅威12BDMC內(nèi)標(biāo)物氨基甲酸測(cè)試混合物，10μL進(jìn)樣，25cm，C8柱（0840250）氨基甲酸測(cè)試混合物，0.25ppb，10μL進(jìn)樣，25cm，C8柱（0840250）0840250柱（4.0mmID×250MM）用于甲醇溶解樣品HPLC流速：0.8ml/min柱溫37℃氨基甲酸測(cè)試混合物，10μL進(jìn)樣，15cm，C18柱（1846150）1846150柱（4.6mmID×150MM）用于甲醇溶解樣品HPLC流速：1ml/min柱溫42℃氨基甲酸測(cè)試混合物，10μL進(jìn)樣，25cm，C18柱（1846250）1846250柱，（4.6mmID×250MM）用于甲醇溶解樣品HPLC流速：1ml/min柱溫42℃完畢分析之后，執(zhí)行關(guān)閉程序，將氨基甲酸酯分析柱保存于100％甲醇中。注意：保存OPA試劑是應(yīng)保存惰性氣體，關(guān)閉試劑瓶上藍(lán)色的試劑閥避免不使用時(shí)試劑虹吸。氨基甲酸酯分析的注意事項(xiàng)1.配制試劑過程中要始終配帶手套，OPA與ThiofluorTM試劑會(huì)引發(fā)皮膚刺激。OPA試劑為對(duì)氧敏感，不停降解。得到最佳的敏捷度需新制溶液。在惰性氣體的保護(hù)下，OPA試劑能夠保存兩周。ThiofluorTM含有強(qiáng)烈的吸濕性，一定要在密封性好的容器中保存。2.不推薦顧客自制OPA稀釋劑，由于硼酸鈉（任何等級(jí)）包含著大量的重金屬離子污染物和不溶物質(zhì)。這些不純物會(huì)沉淀在反映器和流通池中。由此造成的損壞不在保修范疇之中。3.使用色譜級(jí)的甲醇和水，避免產(chǎn)生基線漂移、鬼峰和基線噪音。4.推薦使用瓶裝的色譜級(jí)純水，特別是在系統(tǒng)剛啟動(dòng)時(shí)。如果使用水凈化系統(tǒng)得到的水，要確保此水凈化系統(tǒng)通過了活性碳去除了有機(jī)物，并且活性碳柱芯必須安裝在離子交換柱芯的背面。（許多離子交換樹脂沒有去除對(duì)OPA有影響的污染物而產(chǎn)生不可接受的熒光背景。）5.試劑瓶中的液體必須每隔3到4天更換一次以避免細(xì)菌的生長(zhǎng)。6.測(cè)試混合物只能作為氨基甲酸酯的定性測(cè)定，不推薦將其作為校正使用。7.全部樣品必須通過0.45μm薄膜過濾。如果存在膠體，則需進(jìn)一步過濾。8.水性樣品溶解于適合的緩沖溶液，具體細(xì)節(jié)參見EPA531.2.9.甲醇溶解樣品，進(jìn)樣10μl。近樣量大降引發(fā)峰的變形。10.小體積水樣進(jìn)樣（<20μl），兩種分析柱均能夠使用。當(dāng)進(jìn)樣體積不不大于300μl，則只能使用25cm的分析柱，并使樣品停留在泵頭一段