項目的意義必要性和依據(jù)近年來大量的研究證實間充質(zhì)干細胞

（一）項目的意義、必要性和根據(jù)近年來大量的研究證明間充質(zhì)干細胞（MSCs）是骨髓微環(huán)境細胞的來源細胞，是來源于發(fā)育早期中胚層和外胚層的一類多能干細胞。MSCs因其含有下列特點而日益受到人們的關(guān)注：(1)多向分化潛能：在體內(nèi)/外特定的誘導條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內(nèi)皮等多個組織細胞；(2)造血支持和促植入：作為造血微環(huán)境重要細胞成分——基質(zhì)細胞系的干細胞，MSCs通過細胞對細胞的直接作用、分泌細胞外基質(zhì)及多個細胞因子，實現(xiàn)對造血的精細調(diào)控，支持造血干細胞的生長，與造血干細胞共同移植可增進造血干細胞的植入；(3)免疫調(diào)控：MSCs體現(xiàn)MHC-I類分子，不體現(xiàn)CD80，CD86，HLA-DR等協(xié)同刺激分子，體外可克制混合淋巴細胞反映，體內(nèi)誘導免疫耐受，對于防止和治療異基因造血細胞移植后引發(fā)的移植物抗宿主病，誘導器官移植免疫耐受有較好的應用前景。(4)自我復制：MSCs作為干細胞能夠自我復制，體外擴增、增殖能力強，能夠作為基因操作的干細胞平臺，在基因治療中有著十分誘人的前景。在造血干細胞移植治療惡性血液病的應用研究增進造血干細胞移植的造血重建：近年來有關(guān)MSCs體內(nèi)、外支持造血，克制免疫功效的報道有諸多，提示MSCs能夠作為造血干細胞移植的共移植手段以及應用于臨床有關(guān)疾病的治療，可提高造血干細胞移植患者的存活率和移植后生存質(zhì)量，從而大大提高移植治療的有效性和適應癥，含有良好的應用前景。MSCs經(jīng)靜脈回輸后廣泛分布于骨髓、肝臟、脾、胃腸道、腎臟、肺臟及肌肉等器官組織，對受體BM-MSCs來源的檢測成果發(fā)現(xiàn)，供體來源的MSCs能夠定植于受體骨髓。Maitra等體外擴增人MSCs，與造血干細胞（HSC）共移植給NOD/SCID小鼠，對照研究成果顯示，當HSC數(shù)量有限時，只有同時予以MSCs輸注才干獲得更為有效的造血植入。黃紹良等進行了自體和異基因MSCs聯(lián)合臍血移植的I期臨床實驗，成果顯示異基因MSCs聯(lián)合UD-UCBT含有明顯增進造血恢復的作用。Lazarus等對MSCs自體輸注進行了I期臨床實驗，從23例造血系統(tǒng)腫瘤涉及急性髓細胞白血病(AML)、急性淋巴細胞白血病（ALL）、多發(fā)性骨髓瘤(MM)、淋巴瘤緩和期患者中分別抽取骨髓10ml-15ml，體外培養(yǎng)擴增MSCs，15例患者經(jīng)2-3次傳代后給與3個劑量組進行回輸，各劑量組均未發(fā)生輸注有關(guān)毒性反映。Koc等對28例晚期乳腺癌患者施行高劑量清髓性化療，然后輸注外周血動員的自體干細胞和經(jīng)體外擴增的自體MSCs；全部患者也均未發(fā)生輸注有關(guān)反映，并且造血功效快速恢復。Lee等聯(lián)合應用HLA半相合的親緣外周血動員干細胞及其體外擴增的MSCs移植對1例高危AML女性患者進行治療后,該患者造血功效快速恢復,急、慢性GVHD均未發(fā)生，隨訪至移植后31個月時仍保持完全緩和。聯(lián)合HSCs和間充質(zhì)干細胞進行移植確實能夠增進移植后造血功效的恢復，其移植成功率明顯高于單純的HSCT。間充質(zhì)干細胞增進HSCs歸巢、定植、增殖并不依賴于對骨髓造血微環(huán)境的修復，而與其產(chǎn)生的多個細胞因子如SDF一1、TGF一81、MIP一1a及MCP一1等有關(guān)。間充質(zhì)干細胞不僅能夠增進造血功效恢復、減少移植后并發(fā)癥的發(fā)生率和死亡率，并且沒有明顯的毒副作用，提示間充質(zhì)干細胞移植是一種安全、可行的辦法。對移植物抗宿主病（GVHD）的防治作用：同種異基因HSCs移植是可能治愈多個惡性血液病的唯一辦法，但是GVHD的發(fā)生卻大大減少了移植的成功率，GVHD是引發(fā)異基因HSCT后患者死亡的重要因素之一。研究表明間充質(zhì)干細胞含有克制T細胞激活、增殖的功效，能夠用以GVHD的防治。研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)生GVHD時患者促炎因子分泌增加，樹突狀細胞、巨噬細胞、NK細胞和細胞毒性T細胞被激活引發(fā)組織損傷。體外實驗表明MSCs能夠和多個免疫細胞互相作用，以變化其免疫功效。MSCs不僅含有免疫逃避能力，并且含有克制排斥反映的功效。MSCs能夠克制幼稚性和記憶性T淋巴細胞，阻抑T淋巴細胞與抗原提呈細胞(APCs)接觸，通過APCs間接的克制T淋巴細胞。盡管MSCs發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功效的機制尚不清晰，但其對GVHD的防治潛能是能夠擬定的。MSCs含有良好的免疫耐受性，能夠逃避受者的免疫識別，對T淋巴細胞的克制作用和其供者來源沒有明顯的關(guān)系。近來Ringden等人應用異基因間充質(zhì)干細胞治療類固醇耐藥的GVHD患者療效明顯。8例病人中有6例急性GVHD完全明顯，并且沒有MSCs治療的急性副反映出現(xiàn)。他們得出結(jié)論認為對于異基因MSCs治療GVHD來說，無論是HLA配型相合，半相合還是完全HLA不匹配供者來源的MSCs都合用，并且能夠較好的修復GVHD所致的腸道上皮損傷。因此能夠選用MHC不相匹配的間充質(zhì)干細胞進行移植以提高移植效率，克制GVHD?？傊?，聯(lián)合間充質(zhì)干細胞和HSCs進行移植能夠提高移植效率，減少GVHD的發(fā)生率，并且是一種安全、無直接和后期毒性的治療辦法。在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的應用研究干細胞含有向神經(jīng)細胞分化的潛能是神經(jīng)科學研究的重要進展，給許多以前認為是不治之癥的神經(jīng)損傷性疾病(如脊髓損傷、腦損傷、外周神經(jīng)損傷等)的治療帶來了新但愿。在脊髓損傷中的研究：脊髓損傷后形成瘢痕組織妨礙神經(jīng)元的再生下行、神經(jīng)纖維的變性壞死以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)克制神經(jīng)元再生的微環(huán)境等因素，妨礙了脊髓損傷的恢復。骨髓MSCs的發(fā)現(xiàn)、分離與成功誘導分化為神經(jīng)細胞，為脊髓損傷的移植治療提供了“種子細胞”，其移植可能成為一種保護和增進損傷的脊髓功效恢復的嶄新治療手段。Ankeny等將MSCs種植脊髓損傷的大鼠模型中，成果發(fā)現(xiàn)，移植組大鼠后腿空中蹬腿動作以及步態(tài)循環(huán)控制能力恢復，MSCs移植物充滿病變腔隙，并隨著有宿主組織和白質(zhì)(髓鞘)的保存，證明含有神經(jīng)保護作用；與對照組相比，移植組能更有效地增進軸索生長；另外，MSCs中的大部分神經(jīng)纖維生長方向與脊髓的長軸索平行，提示其可直接縱向生長。Hofstetter等對動物損傷的脊髓模型進行MSCss脊髓內(nèi)移植，1周后動物步態(tài)明顯改善，移植5周后發(fā)現(xiàn)移植區(qū)和瘢痕組織區(qū)之問可見到新生神經(jīng)纖維束穿過。以上事實闡明，植入MSCs對脊髓損傷引發(fā)的運動功效障礙有明顯的療效。在腦缺血性疾病方面的研究：現(xiàn)在，許多研究發(fā)現(xiàn)將人骨髓MSCs移植給腦缺血動物模型，能有效減少梗死體積、減少神經(jīng)缺點評分，并能明顯改善神經(jīng)功效的恢復。給永久性大腦中動脈栓塞大鼠靜脈輸注人骨髓MSCs，發(fā)現(xiàn)MSCs能進入損傷腦區(qū)，其數(shù)量隨時間增加。在大鼠皮質(zhì)腦缺血后1周把純化的人骨髓MSCs移植到損傷周邊皮質(zhì)區(qū)能明顯改善大鼠的感覺運動功效，組織學分析移植的MSCs體現(xiàn)星形膠質(zhì)細胞標志物(GFAP)、少突膠質(zhì)細胞標志物(GalC)和神經(jīng)元標志物，闡明移植的MSCs能向神經(jīng)元前體細胞或神經(jīng)元樣細胞分化。鼠缺血腦組織的提取物培養(yǎng)能增進人MSCs產(chǎn)生神經(jīng)營養(yǎng)因子和血管源性生長因子，提示腦缺血后的微環(huán)境變化可能與MSCs的治療作用有關(guān)。另外，Chert等還通過靜脈給大腦中動脈栓塞24h后的大鼠注射人MSCs，分析缺血邊沿帶的血管發(fā)生和宿主腦內(nèi)的VEGF及其受體水平，發(fā)現(xiàn)MSCs能增進大鼠腦內(nèi)血管發(fā)生，可能與人MSCs增加了內(nèi)源性VEGF及其受體水平有關(guān)。Crigler等研究發(fā)現(xiàn)人MSCs移植后，其不同的細胞亞型體現(xiàn)不同的神經(jīng)細胞調(diào)控分子，對宿主神經(jīng)細胞的存活和神經(jīng)再生起到了一定的作用。在心血管性疾病方面的應用研究據(jù)統(tǒng)計，我國每年死于血管性疾病的人數(shù)高達300多萬，已占我國每年總死亡人數(shù)的34%-40%。由于溶栓治療、介入治療和外科治療等辦法治療等辦法的開展，死亡率有所下降。但現(xiàn)在的治療辦法并不能逆轉(zhuǎn)已有的心肌病變，特別是大面積心肌梗死后心肌細胞的大量喪失。因此移植外源性細胞有望成為恢復心肌功效的新的方略。MSCs含有向心肌細胞分化的潛能，研究表明自體MSCs動員或冠脈種植對急性心肌梗死，慢性缺血及心臟移植排斥反映等都有明顯改善作用。將MSCs直接移植到小鼠心臟，移植的細胞可體現(xiàn)肌球蛋白重鏈，并向心肌細胞分化。Shake等采用犬LAD結(jié)扎60min的心肌梗死模型，分離自體MSCs，心肌梗死后2周將MSCs注射到心肌梗死區(qū)，發(fā)現(xiàn)在全部治療組動物心肌中都有MSCs存活，在MSCs移植后2周開始體現(xiàn)肌肉特異性蛋白，4周后心臟收縮功效明顯改善，提示MSCs有心肌再生作用。將MSCs直接注射到梗死區(qū)或經(jīng)靜脈注射后，在損傷區(qū)均能見到MSCs定位，分化為心肌細胞，且心功效得到明顯改善并能防止有害的重構(gòu)。細胞移植是一種新型的治療心臟疾病如心肌梗死和心衰的辦法，它的良好療效來源于移植細胞的活性分布、被動性提高心臟的機械功效、誘導血管新生、尚有對心臟生物學方面的其它作用。但移植細胞的療效以及最佳移植部位及移植時機有待進一步研究在骨組織工程中的應用由疾病、創(chuàng)傷所致的骨、軟骨損傷為臨床上常見且難以解決的問題，現(xiàn)在常規(guī)的治療辦法有自體或者異體、異種骨移植，但它們都存在一定的問題和限制，難以完全滿足臨床需要。現(xiàn)在，以組織工程辦法進行軟骨再生的報道諸多，諸如在皮下注射軟骨細胞形成小的軟骨結(jié)節(jié)；運用軟骨膜片將培養(yǎng)分離的軟骨細胞固定在軟骨缺損部位使軟骨再生。因此，修復大面積軟骨缺損的生物載體應是形狀可控制的三維支架構(gòu)造的體內(nèi)植入物，軟骨細胞在這種構(gòu)造中能增殖分化，并且形成含有正常軟骨成分(重要指糖胺聚糖和II型膠原)以及含有對應的生物機械特性的再生軟骨。骨髓MSCs含有強大的自我擴增、自我繁殖及多向分化的能力，它的易擴增性能在很短的時間內(nèi)得到足夠的種子細胞，并且隨著細胞的擴增，細胞的性狀和分化特性并不會變化和喪失。在特定的成軟骨誘導培養(yǎng)條件下，MSCs在體內(nèi)外均可分化為軟骨細胞或構(gòu)建出軟骨組織；Shapiro等用放射自顯影辦法證明當關(guān)節(jié)軟骨損傷穿透軟骨下骨時，損傷周邊的軟骨細胞并不參加組織修復，修復組織重要來源于骨髓MSCs細胞。由于骨髓MSCs細胞獲得方便，MSCs的分離和純化技術(shù)已趨成熟，現(xiàn)在被認為是軟骨組織工程最有發(fā)展?jié)摿Φ姆N子細胞。展望對MSCs進行基因修飾以治療缺點性疾病是現(xiàn)在的研究熱點。MSCs含有體外擴增培養(yǎng)及自我更新的能力，轉(zhuǎn)入外源基因后不影響其特性，因此可成為基因治療抱負的靶細胞。因此，能夠?qū)SCs細胞治療和基因治療結(jié)合起來，通過改造的MSCs對基因缺點、基因突變所致的疾病進行治療。即使運用MSCs進行基因治療的前景樂觀，但是在臨床應用中仍有許多安全性問題需要解決，如MSCs可能定植于腫瘤組織，為腫瘤細胞的生長提供適宜的微環(huán)境；外源基因轉(zhuǎn)染MSCs的效率低下；基因變異可能造成腫瘤的發(fā)生；病毒性載體的生物安全性及基因修飾MSCs在患者體內(nèi)功效的檢測等。現(xiàn)在MSCs的重要來源為成人骨髓，但成人骨髓源MSCs細胞數(shù)量及增殖分化潛能隨年紀的增大而下降，病毒感染率較高，且供者MSCs的采集須行骨髓穿刺術(shù)，抽取大量骨髓（約500毫升），因此來源受到限制。研究發(fā)現(xiàn)，MSCs在人胎兒和生后多個組織廣泛存在，涉及骨膜、脂肪、羊水、真皮、牙、骨骼肌、胎肺、胎肝和臍血等。但是，胎兒的應用又受到道德倫理和傳統(tǒng)觀念的限制。有關(guān)臍血MSCs的報道存在較多爭議，且臍血MSCs的分離會損失臍血中造血干祖細胞，影響臍血干細胞的凍存和使用。因此，尋找新的MSCs的來源成為現(xiàn)在國內(nèi)外研究的熱點。我單位率先在國際上分離并且初步鑒定證明了臍帶MSCs特點，支持造血功效以及其它某些功效。我們研究發(fā)現(xiàn)，臍帶MSCs擁有諸多骨髓MSCss的特點。在神經(jīng)誘導條件下臍帶MSCs比骨髓MSCs更易于向神經(jīng)分化。另外臍帶MSCs細胞因子譜除了體現(xiàn)骨髓MSCs有關(guān)細胞因子外還額外體現(xiàn)GM-CSF和G-CSF.這些研究成果提示臍帶MSCs的開發(fā)和運用品有非常廣闊的前景。在上述研究的基礎(chǔ)上始終進行著后續(xù)研究，現(xiàn)在在促造血重建，免疫調(diào)節(jié)方面以及治療血管性疾病已經(jīng)獲得很大進展，為其此后的臨床應用奠定了堅實的理論基礎(chǔ)和技術(shù)平臺。（二）研究開發(fā)和產(chǎn)業(yè)內(nèi)容及總體目的研究開發(fā)和產(chǎn)業(yè)內(nèi)容1．多個組織間充質(zhì)干細胞的分離，純化和培養(yǎng)，以及生物學特性研究現(xiàn)在MSCs的重要來源為成人骨髓，但成人骨髓源MSCs細胞數(shù)量及增殖分化潛能隨年紀的增大而下降，因此來源受到限制。研究發(fā)現(xiàn)，MSCs在人胎兒和生后多個組織廣泛存在，涉及骨膜、脂肪、羊水、真皮、牙、骨骼肌、胎肺、胎肝和臍血等，因此，尋找新的MSCs的來源成為現(xiàn)在國內(nèi)外研究的熱點。（1）骨髓、胎盤及臍帶MSCs的制備：應用膠原酶和胰酶相結(jié)合的酶直接消化法，通過磁珠篩選，從胎盤和臍帶中獲得大量的MSCs。對比采用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)胎盤及臍帶MSCs，通過檢測MSCs的增殖和分化潛能的差別，建立MSCs的最適培養(yǎng)辦法。（2）骨髓、胎盤及臍帶MSCs的生物學特性、免疫調(diào)節(jié)、支持造血等功效研究：（3）骨髓、胎盤及臍帶MSCs多向誘分化；2．間充質(zhì)干細胞治療重大疾病的研究（1）治療惡性血液病作用的研究（2）治療血管性疾病作用的研究血管性疾病嚴重威脅著人類健康、影響患者生活質(zhì)量，尚缺少有效的治療方案。干細胞移植為這些血管病變和損傷的治療帶來了但愿，因此，充足運用來源豐富、取材方便的間充質(zhì)干細胞的可塑性，開展對血管性疾病防治新辦法的研究含有十分重要的現(xiàn)實意義和社會意義。重要研究內(nèi)容：=1\*GB3①建立內(nèi)皮祖細胞數(shù)量減少及功效缺損的動物模型,檢測該模型動脈的病理學形態(tài)及功效的變化，觀察與否有動脈粥樣硬化的形成。篩選出增加內(nèi)皮祖細胞的數(shù)量、提高其功效的因子及轉(zhuǎn)染后能提高內(nèi)皮祖細胞功效的基因。用這些因子解決內(nèi)皮祖細胞或基因轉(zhuǎn)染內(nèi)皮祖細胞，然后移植到實施內(nèi)膜球囊損傷術(shù)的兔體內(nèi)，觀察內(nèi)膜的修復狀況，明確提高內(nèi)皮祖細胞功效能否防治動脈粥樣硬化的形成。=2\*GB3②間充質(zhì)干細胞局部移植治療肢體缺血性疾?。和庵苎懿∽兡Ｐ徒ⅲ禾悄虿⌒∈笙轮⒀懿∽?，結(jié)扎下肢動脈致嚴重缺血。將MSC局部注射到病變下肢，然后通過下肢活動能力受限評分以及下肢缺血評分來評定功效恢復。PBS做對照，骨髓來源的MSC為陽性對照。運用激光多普勒血流檢測局部血流恢復狀況，血管造影檢測局部側(cè)支循環(huán)的形成。=3\*GB3③間充質(zhì)干細胞作為基因治療的載體，轉(zhuǎn)染PDGF基因后其功效研究：通過PCR將目的基因PDGF擴增，然后酶切，連接以及重組子轉(zhuǎn)化大腸桿菌，篩選陽性克隆，重組腺病毒質(zhì)粒的純化，重組腺病毒的包裝、獲取、鑒定。重組腺病毒的擴增與純化以及病毒梯度的測定。然后感染臍帶MSC，重復感染。含CMV啟動子重組腺病毒感染效率的測定：運用報告基因鑒定。PDGF轉(zhuǎn)染的臍帶MSC的細胞形態(tài)、細胞生長曲線、細胞增殖能力、抗凋亡能力、免疫表型與否變化及基因修飾過的MSC的多向分化能力有無變化。細胞的條件培養(yǎng)基收集后用Elisa辦法檢測分泌的因子PDFG、VEGF，bFGF等有無變化。=4\*GB3④轉(zhuǎn)染PDGF基因的臍帶來源的間充質(zhì)干細胞局部移植防治糖尿病微血管病變：鏈尿菌素誘導的裸鼠，在血糖尿糖增高后1－2個月，持續(xù)觀察其下肢毛細血管密度，小動脈密度和內(nèi)皮細胞凋亡狀況。局部移植PDGF修飾的MSC細胞，觀察肢體功效恢復狀況，下肢血流以及毛細血管密度等。觀察肌肉組織的PDGF等細胞因子的體現(xiàn)。同時研究內(nèi)皮細胞的凋亡狀況。（3）軟骨組織工程中間充質(zhì)干細胞的臨床前應用研究使用臍帶間充質(zhì)干細胞修復關(guān)節(jié)軟骨,探索其體內(nèi)成軟骨的能力,并與骨髓間充質(zhì)干細胞修復軟骨缺損成果做比較性研究,旨在為軟骨修復開辟新的途徑。本實驗用人臍帶間充質(zhì)干細胞為種子細胞,用同種異體骨髓間充質(zhì)干細胞移植作為陽性對照組、缺損不解決作為陰性對照組,以糖胺聚糖和II型膠原或聚乳酸(PLA)為支架,移植修復兔全層關(guān)節(jié)軟骨缺損,通過對體內(nèi)修復組織及滑膜的檢測,擬定臍帶間充質(zhì)干細胞對軟骨缺損的修復作用及免疫反映。重要研究內(nèi)容:=1\*GB3①臍帶MSCs體外定向分化為軟骨細胞及鑒定選擇最佳誘導培養(yǎng)基、誘導因子和增殖因子、誘導培養(yǎng)時間，研究臍帶MSCs向軟骨細胞分化的條件。=2\*GB3②臍帶MSCs和誘導軟骨細胞與支架材料復合培養(yǎng)研究支架材料聚乳酸(PLA)對誘導軟骨細胞增殖能力、粘附能力和免疫學功效等生物特性的研究。=3\*GB3③誘導軟骨細胞增進全層關(guān)節(jié)軟骨缺損修復的動物實驗研究使用臍帶MSCs以及軟骨誘導后的細胞，以糖胺聚糖和II型膠原或聚乳酸(PLA)為支架，移植修復兔全層關(guān)節(jié)軟骨缺損，通過對體內(nèi)修復組織及滑膜的檢測，并與兔骨髓MSCs修復軟骨缺損成果做比較，擬定臍帶MSCs以及軟骨誘導后的細胞對軟骨缺損的修復作用及免疫反映。探索比較它們體內(nèi)修復軟骨的能力。（4）IL-27基因修飾的間充質(zhì)干細胞治療本身免疫病的臨床前研究間充質(zhì)干細胞在細胞治療和基因治療方面含有不可無視的優(yōu)勢，以間充質(zhì)干細胞為載體的基因治療將成為將來研究的熱點。IL-27是近來發(fā)現(xiàn)的最重要的含有克制炎癥免疫作用的細胞因子?；陂g充質(zhì)干細胞和IL-27的抗炎作用在臨床上的廣泛應用前景，我們將兩者結(jié)合起來：建立高體現(xiàn)IL-27的間充質(zhì)干細胞系，盼望其對本身免疫病提供新的治療方略。研究內(nèi)容（1）高體現(xiàn)IL-27的MSC治療膠原誘導的關(guān)節(jié)炎（CIA）：建立小鼠的關(guān)節(jié)炎模型，將MSC或高體現(xiàn)IL-27的MSC注入關(guān)節(jié)炎部位或小鼠腹腔內(nèi)，觀察其治療作用。比較治療組和對照組小鼠關(guān)節(jié)病變處的病理變化，免疫細胞構(gòu)成，以及多個細胞因子的體現(xiàn)狀況。（2））高體現(xiàn)IL-27的MSC治療實驗性本身免疫性腦脊髓炎（EAE）：建立小鼠的EAE模型，將MSC或高體現(xiàn)IL-27的MSC注入小鼠腦內(nèi)的病變部位，觀察小鼠的生存期。腦內(nèi)病變部位的細胞因子的體現(xiàn)，各免疫細胞所占的比例和功效狀態(tài)，腦部組織病理變化狀況。（3）高體現(xiàn)IL-27的MSC治療本身免疫性肝炎：建立本身免疫性肝炎模型。將MSC或高體現(xiàn)IL-27的MSC從尾靜脈注入小鼠體內(nèi)。觀察小鼠的生存期，腸子的病變狀況，病理變化，腸道和脾臟細胞因子的體現(xiàn)狀況和各免疫細胞亞型的構(gòu)成狀況。（4）高體現(xiàn)IL-27的MSC和造血干細胞共移植治療再生障礙性貧血：建立小鼠的再障模型，對其進行allo-BMT的同時，尾靜脈輸注MSC或高體現(xiàn)IL-27的MSC。觀察對再障的治療效果，并觀察小鼠異基因骨髓移植(allo-BMT)后移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生率和生存率的變化。流式細胞儀檢測受鼠各T細胞亞群的差別，檢測細胞因子的分泌狀況和及骨髓的病理學變化。3．間充質(zhì)干細胞應用中安全性研究臍帶間充質(zhì)干細胞臨床應用，屬于同種異體的細胞移植，我們對培養(yǎng)后的間充質(zhì)干細胞進行致瘤性、全身性毒性等方面進行安全性評價。研究內(nèi)容（1）體外致瘤實驗：軟瓊脂培養(yǎng)法是體外檢測轉(zhuǎn)化細胞和腫瘤細胞致瘤性最為慣用的辦法，與細胞的惡性程度有很大的符合率。普通腫瘤細胞在這樣的培養(yǎng)條件下1－3周可見克隆形成，在表層瓊脂內(nèi)成桑椹狀。用光學顯微鏡觀察，可見克隆內(nèi)的細胞呈圓形，透亮，排列成團。普通認為由16個細胞以上構(gòu)成的細胞團為一種克隆，克隆內(nèi)的細胞數(shù)目隨著培養(yǎng)時間增加而增多。如果細胞成顆粒狀，細胞輪廓不清晰，闡明細胞已經(jīng)死亡。如果持續(xù)培養(yǎng)2周仍未見克隆形成，則考慮接種的細胞沒有腫瘤細胞的特性，間接反映這種細胞的移植后無致瘤性。（2）體內(nèi)致瘤性實驗：將細胞制劑接種到動物體上，觀察其成瘤性，由于裸鼠含有下列特點：先天性胸腺缺點，胸腺依賴性免疫功效缺少，T細胞功效靠近于零，但B細胞功效大致正常，異種移植時無排斥反映。因此裸鼠普通作為接種的動物。接種的辦法能夠是局部皮下接種或尾靜脈注射，接種后持續(xù)觀察1個月，根據(jù)肉眼觀察和病理切片觀察與否有腫瘤形成來反映檢測的細胞群體與否含有致瘤性。腫瘤細胞局部接種后約1個月左右（最短在3天）可見注射的局部有腫瘤出現(xiàn)，甚至有轉(zhuǎn)移瘤（普通在肺部）形成。經(jīng)病理組織學檢查能夠擬定腫瘤與否由接種的細胞產(chǎn)生。腫瘤細胞經(jīng)靜脈注射，在移植后1月左右可在不同的組織器官內(nèi)觀察到腫瘤形成。經(jīng)病理組織學檢查能夠擬定腫瘤與否由接種的細胞產(chǎn)生。（3）全身臟器急、慢性毒性實驗研究，重要通過在NOD/SCID小鼠中注射相稱于臨床病人用量100倍的臍帶原始間充質(zhì)干細胞，在急性實驗中持續(xù)觀察一周實驗動物的體重，活動，飲食，與否腹瀉，生存狀況。慢性毒性實驗重要觀察細胞移植6個月后與否對造血，肝腎功效造成慢性損害，觀察指標重要為血常規(guī)，生化指標及處死后各重要臟器的病理學檢查，通過這些指標綜合判斷間充質(zhì)干細胞與否存在嚴重的毒性作用?？傮w目的預期可獲得的成果、知識產(chǎn)權(quán)和人才培養(yǎng)狀況:建立起間充質(zhì)干細胞產(chǎn)品、技術(shù)和資源平臺、臍帶間充質(zhì)干細胞庫，建立完整的生產(chǎn)和質(zhì)量控制體系；明確間充質(zhì)干細胞在治療血液系統(tǒng)惡性疾病、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病以及軟骨組織工程中的作用以及機制；明確間充質(zhì)干細胞治療疾病的安全性；初步制訂上述幾個疾病的臨床實驗方案，向國家食品藥品監(jiān)督管理局申請Ⅰ期臨床研究；申請專利項；發(fā)表SCI文章篇；臍帶間充質(zhì)干細胞獲得SFDA或者衛(wèi)生行政主管部門對應的臨床批文；培養(yǎng)博士后名，博士生名，碩士生名。（三）實施條件優(yōu)秀的學科帶頭人、成熟和完善的系列技術(shù)、國際水平先進的實驗室和配套設(shè)備為支撐：課題的承當單位不僅含有學科優(yōu)勢，有一支年富力強的、構(gòu)造合理的優(yōu)秀研究隊伍，課題負責人在所屬領(lǐng)域的工作均獲得了國外同行的高度評價和承認。并且在細胞信號傳導、細胞移植和基因治療的核心實驗技術(shù)和實驗室及配套的儀器設(shè)備方面也有著明顯的優(yōu)勢，如在活細胞顯微分析、干細胞定向誘導分化和擴增、細胞移植治療以及基因治療等技術(shù)領(lǐng)域已經(jīng)含有國際先進水平的