豬偽狂犬的臨床發(fā)病機制與防治研究分析

豬偽狂犬的臨床發(fā)病機制與防治研究分析學位論文題目：豬偽狂犬的臨床發(fā)病機制與防治研究分析論文選題根據(jù)（涉及國內(nèi)外研究現(xiàn)狀、選題的理論意義或?qū)嵱脙r值、研究的特色及重要參考文獻目錄等）1、國內(nèi)外豬偽狂犬病臨床發(fā)病機制研究現(xiàn)狀1.1豬偽狂犬病臨床發(fā)病機制研究豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引發(fā)的一種可感染多個動物的傳染病，在世界各地都有報道該病的暴發(fā)，是嚴重威脅養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一。PRV的易感宿主種類較多，其中有如豬、牛、羊等經(jīng)濟類動物，犬、貓等寵物、浣熊、水貂、狐等野生動物，也可感染除人外的某些靈長類動物，如恒河猴、狨猴等[1-3],但豬為唯一一種能夠成為潛伏攜帶者的動物[4-5]，也是該病毒的貯存宿主。PRV感染豬和攜帶病毒的鼠類為PR重要的傳染來源[6]。PRV感染造成種豬的生產(chǎn)性能下降，如公豬的不育，妊娠母豬的流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎[7-9]，給養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟損失。PR于1813年初次在美國牛群中發(fā)生，1902年被匈牙利科學家Aujeszky認定為一種獨特的病?，F(xiàn)在，本病呈世界分布。為防控該病，自20世紀90年代以來，北美和許多歐洲國家大規(guī)模使用gE缺失疫苗區(qū)別免疫動物和野毒感染動物并裁減陽性動物消亡了該病[10-11]。然而，對于第三世界國家如中國以及豬群密度高的某些國家或地區(qū)，豬PR仍是動物疫病中最嚴重的疾病之一，如我國以及豬群密度高的某些國家或地區(qū)。在中國，劉永純等在1947年初次分離到PRV，并隨即在牛和豬群中相繼發(fā)現(xiàn)該病毒。到現(xiàn)在為止該病在中國廣泛流行。為了控制PR，我國大規(guī)模推廣使用基因缺失疫苗（Bartha-K61）對豬進行免疫接種，一度使豬群PR得到有效控制。然而，自年年終以來，我國各地暴發(fā)了豬偽狂犬病，其中諸多地區(qū)免疫過Bartha-K61疫苗，疫病影響我國多個省、市、地區(qū)[16-19]，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。也有證據(jù)顯示在我國典型Bartha-K61疫苗對于偽狂犬野毒感染還不能提供完整的保護力。進一步的流行毒株的全基因序列分析揭示，現(xiàn)在分離的流行株與之前分離株涉及Bartha-K61在內(nèi)，其病毒蛋白基因出現(xiàn)了很大的變異，如病毒蛋白堿基的替代、嵌入和缺失，野毒的感染無疑又給我國偽狂犬病的防控增添了現(xiàn)實的困難。PR為皰疹病毒科，皰疹病毒亞科α-皰疹病毒屬組員。從分類學上稱為豬Ⅰ型皰疹病毒（SuidherpesvirusI），由于1902年Aujeszky證明該病由病毒引發(fā)，因此該病又稱Aujeszkydisease，該病毒為甲型皰疹病毒亞科，水痘病毒屬，它含有皰疹病毒所共有的特性。人I型單純皰疹病毒、馬立克氏病病毒（MDV）等同屬于α-皰疹病毒。1.2PR國外研究現(xiàn)狀偽狂犬病最早發(fā)生于1813年美國的牛群中，重要體現(xiàn)為“奇癢”，直到1902年，匈牙利科學家Aujeszky初次報道此病，因此，該病被命名為奧耶斯基?。ˋujeszky’sdisease）。美國、英國、德國、法國、日本等50多個國家和地區(qū)都有該病發(fā)生的報道。聯(lián)邦政府所做的一份血清學調(diào)查表明，在1974-1984年間，PR在美國感染率由0.56%增加到8.78%，發(fā)病率增加了15倍。英國1953年初次報道本病，1971年后來，豬開始出現(xiàn)嚴重臨床癥狀，此后，暴發(fā)的次數(shù)和嚴重程度逐步上升，1983年暴發(fā)的次數(shù)為443次。希臘于1952年首先報道牛的PR，隨即報道發(fā)生于綿羊、山羊和水貂，豬的偽狂犬病于1977年初次報道，1978年被確診，數(shù)據(jù)顯示PR感染范疇不停擴大。丹麥最早在1931年的牛群中報道PR，1964年有報道豬發(fā)生此病。直至20世紀70年代，PR并未造成嚴重的經(jīng)濟損失。只有在在牛群中散發(fā)，豬則只發(fā)生于仔豬，出現(xiàn)臨床癥狀和死亡。然而自1978年后來，PR嚴重暴發(fā)的次數(shù)越來越多。PR早期在法國呈散發(fā)，在1968年以前總共只有19次發(fā)生;1968年后來臨床上PR發(fā)生急劇上升，并且許多地區(qū)均報道發(fā)生PR,1983年整個法國有344次[66]。原民主德國20世紀60年代末期PR開始流行，20世紀70年代早期豬群的發(fā)病率增加了近一倍。但自1966年后采用根除計劃后豬群PR的感染率明顯下降[67]。瑞典1965年初次報道PR[68]，感染病例逐年增加，1965-1990年前15年內(nèi)僅有40例，后10年內(nèi)有160例。1989年的一份年度調(diào)查表明當年的豬群感染率為5%，豬只的陽性率為28%。1977年前西德僅零星出現(xiàn)PR，但之后感染病例數(shù)急劇上升，僅1987年一年的病例多達1968次，該病重要發(fā)生于德國豬群喂養(yǎng)集中的北部和西北部，育肥豬也受到影響1.3PR國內(nèi)研究現(xiàn)狀在中國，PRV感染首先由劉永純等在1947年貓中分離得到，之后再隨即在牛和豬證明有該病毒的存在。在20世紀80年代早期，已擬定有18個地區(qū)（14個省，1個直轄市和3個自治區(qū)的中國）的動物存在PRV感染。即使牛，綿羊，山羊，貓，狗和貂也有感染，但重要發(fā)病動物是豬。自上世紀八十年代后期以來，PR的發(fā)生率上升，并且在全國范疇內(nèi)蔓延，這與中國的養(yǎng)殖量、養(yǎng)殖密度的增加有關。另外，田間的潛伏感染也是豬群高比例感染PRV的重要因素。在發(fā)病期，豬群仔豬發(fā)病率和死亡率為70-100%。為了控制豬偽狂犬病在中國的發(fā)病和流行，中國在1979年引進了Bartha-K61株疫苗，并對其安全性和功效進行評價。自20世紀80年代后期以來，Bartha-K61株疫苗在中國的應用，使得PR得到良好的控制。注射過疫苗的豬場，新生仔的感染率和死亡率都低于10%[75-76]。然而，PR并未完全被凈化根除，在年前后全部的地區(qū)，始終是地方性或零星出現(xiàn)。PR根除戰(zhàn)略的疫苗接種未能完善實施，法規(guī)的疏漏和生物安全方法的不夠嚴格[77-80]，使得PR疫情變得嚴重。更值得注意的是，自年終以來，病毒變異已經(jīng)出現(xiàn)，許多免疫過bartha-k6l疫苗的豬場發(fā)病。根據(jù)近來的一份報告顯示，中國23個地區(qū)的80.1%調(diào)查農(nóng)場遭受感染PRV的變異株的影響。另外，被調(diào)查的213個豬場中有58.2%的豬場PR總體感染率或gE抗體陽性率從很低于20%增加至超出50%，這闡明我國的豬群受到野毒PRV嚴重感染。變異偽狂犬病感染造成的對豬生產(chǎn)造成重大的經(jīng)濟影響。在河南省僅一種豬群，就有2600新生仔豬和200頭母豬死于該變異PRV感染，造成了最少一百萬元人民幣的直接經(jīng)濟損失。綿羊和豬的疫苗接種攻毒實驗表明傳統(tǒng)的狂犬病疫苗對中國現(xiàn)在流行的變異毒株不能提供完整保護?，F(xiàn)在分離的變異株全基因組分析顯示了，病毒基因組出現(xiàn)了變異，涉及替代、插入或刪除發(fā)生在大多數(shù)病毒蛋白。強調(diào)現(xiàn)在在我國野毒感染造成的PR仍繼續(xù)流行和發(fā)生，嚴重影響我國動物生產(chǎn)，特別是生豬生產(chǎn)。2、選題的理論意義及實用價值理論意義：研究通過流行病學提示的有關風險因素：購入種豬無檢疫、消毒不嚴格、無全進全出、未免疫含PR6種以上豬病、沒有驅(qū)鳥、滅鼠方法，提出豬場加強喂養(yǎng)管理，做好生物安全方法，嚴格執(zhí)行常規(guī)免疫，做好重要疫病防控、定時檢測、隔離病豬、裁減陽性種豬的控制PR方略。防控成果顯示本研究的防控方案含有非常實用的價值，為PR的有效防控提供了借鑒。實際意義：即使近年來基因缺失疫苗的廣泛應用和診療技術的不停完善，豬偽狂犬病得到一定的控制。但豬群受其它疾病的干擾、養(yǎng)殖環(huán)境的不停變化、疫苗質(zhì)量的層次不齊等因素的影響，部分豬場經(jīng)常發(fā)生偽狂犬病，給養(yǎng)殖戶帶來嚴重經(jīng)濟損失據(jù)報道近三年來僅在我國河南、湖北等地就繼續(xù)發(fā)生和流行，個別省份較為嚴重，不同省份豬場發(fā)病率較高，損失嚴重。3、研究的特色通過PR病原學的研究，研究PR的分類及其地位，病毒的基本特性，從分子生物學的角度來分析PR的臨床發(fā)病機制。通過對病原的檢測，血清學檢測，進行對PR的診療。參考文獻[1]陳溥言,豬偽狂犬病[M].獸醫(yī)傳染病學（第五版）,:218-220.[2]BoelaertF,DeluykerH,MaesD,eta1.PrevalenceofherdswithyoungSOWSseropositivetopseudorabies(Aujeszky’Sdisease)inNorthernBelgium[J].PreyVetMed,1999,41(4):239-255.[3]孫放,彭麗波.豬偽狂犬病的防控方法[J].養(yǎng)豬技術顧問,,2:144.[4]Mettenleiter,T.C.,.Aujeszky'sdisease(pseudorahies)virus:thevirusandmolecularpathogenesis-stateoftheart[J].June1999.Vet.Res(31)99-115.[5]pomeranz,L.E.,Reynold,s.A.E.,Hengartner,C.J.,.Molecularbiologyofpseudorabiesvirus:impactonneurovirologyandveterinarymedicine.Micrnbinl.Mnl.Rinl.Rev.69.462-500.(controlofswine).[6]倪嬌,周緒斌,張馨玉.近期部分規(guī)?；i場豬偽狂犬病野毒抗體檢測狀況調(diào)查[J].中國畜牧獸醫(yī),,34(09):201-203.[7]Rziha,HJ.,Mettenleiter,T.C.,Ohlinger,V.,Wittmann,G.,1986.Herpesvirus(pseudorahiesvirus)latencyinswine:occurrenceandphysicalstateofviralDNAinneuraltissues.Virology155.600-613[8]Tong,T.Z.,Fan,H.Y.,Tan,Y.D.,Xiao,S.B.,Ling,J.Y.,Chen,H.C.,Guo,A.Z.,.C3denhancedDNAvaccinationinducedhumoralimmuneresponsetoglycoproteinCofpseudorahiesvirus.Biochem.Biophys.Res.Commun.4,845-851.[9]klupp,B.G.,Hengartner,C.J.,Mettenleiter,T.C.,Enquist,L.W.,.Complete,annotatedsequenceofthepseudorahiesvirusgenome.J.Virol.78,424-440.[10]Muller,T，Hahn,E.C.,Tottewitz,F.,kramer,M”,klupp,B.G”Mettenleiter,T.C.Freuling,C.,.pseudorabiesvirusinwildswineaglobalperspective.ArchVirnl.156.1691-1705.[11]OIE,().ManualofDiagnosticTestsandVaccinesforTerrestrialAnimals.7thEdition.[12]pomeranz,L.E.,Reynold,s.A.E.,Hengartner,C.J.,.Molecularbiologyofpseudorabiesvirus:impactonneurovirologyandveterinarymedicine.Micrnbiol.Mol.Biol.Rev.69.462-500.[13]楊漢春.年豬病流行狀況與年流行趨勢及防控對策[J].豬業(yè)科學,,32(2):38-40.[14]郭林.牛偽狂犬病診斷報告(附犬偽狂犬病一例)[J].中國獸醫(yī)雜志,1963,11:005.[15]黃壽森,程由銓.牛偽狂犬病的研究(第一報)牛偽狂犬病病毒的分離及若干生物學特性的研究[J].畜牧獸醫(yī)學報,1966,9(1):21-32.[16]楊慶芳，寧官保，李俊達.豬偽狂犬病毒的分離鑒定田.山西農(nóng)業(yè)科學，.39(8):886一889.[17]胡濤，崔保安，楊明凡，等.偽狂犬病病毒gD,gE基因的克隆及轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建[J].中國防止獸醫(yī)學報，,26(2):149-151.[18]彭金美，安同慶，趙鴻遠，等.豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差別性分析[J].中國防止獸醫(yī)學報，.35[19]全炎銘.我國豬偽狂犬病的最新流行動態(tài)與防控方法[J].北方牧業(yè),(12):24-25.[20]Wu,R.,Bai,C.,Sun,JChang,S.,Zhang,X,.EmergenceofvirulentpseudorahiesvirusinfectioninnorthernChina.J.Vet.Sci.14.363-365.[21]An,T.Q.,peng,J.M.,Tian,Z.J.,.pseudorahiesvirusvariantinBartha-K61-vaccinatedpigs,China,.Emerg.Infect.Dis.19,1749-1755.[22]Yu,X.,Zhou,Z.,Hu,D.,Zhang,q，.Pathogenicpseudorahiesvirus,China,Emerg.Infect.Dis.20,102一104.[23]Wang,C.H.,Yuan,J.,qin,H.,.AnovelgE-deletedpseudorahiesvirus(pRV)providesrapidandcompleteprotectionfromlethalchallengewiththepRVvariantemerginginBartha-K61vaccinatedswinepopulationinChina.Vaccine32,3379-3385.[24]Luo,Y.,Li,N.,Cong,X.,Wang,.pathogenicityandgenomiccharacterizationofapseudorahiesvirusvariantisolatedfromBartha-K61-vaccinatedswinepopulationinChina.Vet.Microhiol.174.107-115.[25]Yu,X.,Zhou,Z.,Hu,D.,Zhang,q，Han,.Pathogenicpseudorahiesvirus,China,Emerg.Infect.Dis.20,102一104.[26]Pellett,P.H.,Davison,AJ.,Hherle,R.,.Herpesvirales.In:Icing,A.M.q，Adams,M.J.,Carstens,H.I3.,Leflkowitz,HJ.(Gds.),Virustaxonomy:NinthReportoftheInternationalCommitteeonTaxononryofViruses.GlsevierAcademicPress,London,UnitedKingdom,pp.99-107.[27]PannwitzG,FreulingC,DenzinN,etal.Along-termserologicalsurveyonAujeszky’sdiseasevirusinfectionsinwildboarinEastGermany[J].Epidemiologyandinfection,,1(1):1-11.[28]楊慶芳,寧官保.豬偽狂犬病的研究進展[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,(7):15-18.[29]李春華,王英,蔣鳳英等.豬偽狂犬病研究進展[J].動物醫(yī)學進展,,29(3):68-72.[30]EkstrandMI,EnquistL,PomeranzLE.Thealpha-herpesviruses:molecularpathfindersinnervoussystemcircuits[J].Trendsinmolecularmedicine,,14(3):134-40.[31]GlorieuxS,FavoreelH,MeesenG,etal.Differentreplicationcharacteristicsofhistoricalpseudorabiesvirusstrainsinporcinerespiratorynasalmucosaexplants[J].Veterinarymicrobiology,,136(3-4):341-6.重要研究內(nèi)容，擬解決的關健問題或技術難點以及預期達成的目的：1、重要研究內(nèi)容對我國-年近十年的豬偽狂犬血清流行性學進行統(tǒng)計匯總及gE基因變異狀況研究，并進行文獻匯總數(shù)據(jù)分析，擬定在中國不同地區(qū)的豬種群豬偽狂犬的的發(fā)病狀況及gE基因的進化分析，為豬偽狂犬病的有效防控提供指導部分地區(qū)PRV野毒陽性豬場的陽性病料進行gE基因擴增、克隆和遺傳進化分析，與國內(nèi)外參考毒株的核苷酸及推導氨基酸序列進行比較，構(gòu)建遺傳進化樹，推測流行毒株的來源及親緣關系，為豬偽狂犬病的防控提供理論指導。2、擬解決的核心問題PR的防控難題重要存在下列幾個方面。第首先，現(xiàn)在對PRV致病機理的研究尚不夠進一步，缺少更進一步的認識。第二方面，全長基因組信息的欠缺，PRV基因組GC含量高達73%，其中gE基因是PRV的一種糖蛋白基因，位于US8區(qū)，G+C含量為75%，有98%的gE基因密碼子的第二位是G或C，這也是gE基因組擴增極其困難的因素。第四方面，疫苗質(zhì)量、豬群免疫力等問題造成的疫苗免疫失敗。最后，遺傳變異因素造成其病毒毒力增強。3、預期達成的目的研究中，我們對我國年-年近十年的豬偽狂犬血清流行性學進行統(tǒng)計匯總及gE基因變異狀況研究，并進行文獻匯總數(shù)據(jù)分析，擬定在中國不同地區(qū)的豬種群豬偽狂犬的的發(fā)病狀況及gE基因的進化分析，核苷酸序列分析,氨基酸序列分析。重要研究辦法（或技術路線，實施方案）：1.血清數(shù)據(jù)檢索在NCBI數(shù)據(jù)庫和中國知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)庫中檢索中、英文出版的年至年，有關豬偽狂犬病血清學流行病學研究的文章。中文文獻的檢索是基于核心詞“豬偽狂犬病”，“血清”，“基因”“PRV”“gE”而搜索NCBI數(shù)據(jù)庫中的文獻時附加詞“中國”。所得的文章被檢測多于十份用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）測定的樣品。選定的文章的參考文獻列表進行進一步篩選，以確保全部有關的研究納入。對收集的豬偽狂犬病毒的血清樣品檢測成果（測試數(shù)目和陽性數(shù)）進行統(tǒng)計。1.2基因進化數(shù)據(jù)檢索豬偽狂犬病毒野毒感染數(shù)據(jù)，隨著時間、地理位置進行分組、全方面展示近十年來豬偽狂犬病毒的野毒感染狀況。在NCBI搜索過去10年在中國獲得的豬偽狂犬病毒gE全基因的進化信息并對其進行系統(tǒng)發(fā)育分析。1.3將從GenBank收錄的66株毒株g