蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)

實驗一

蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)一、目的二、原理在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面形成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆粒可因失去電荷和脫水而沉淀。蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為1．加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識。2．了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實用意義。3．了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。兩類。（1）可逆的沉淀反應(yīng)此時蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來的溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。如大多數(shù)蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇（或丙酮）短時間作用于蛋白質(zhì)。提純蛋白質(zhì)時，常利用此類反應(yīng)。（2）不可逆沉淀反應(yīng)此時蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于原來溶劑中。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固，蛋白質(zhì)與重金屬鹽或某些有機(jī)酸的反應(yīng)都屬于此類。蛋白質(zhì)變性后，有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。三、操作

1．蛋白質(zhì)的鹽析即中性鹽沉淀蛋白質(zhì)：取1個離心管加入5mL蛋白質(zhì)溶液和5mL飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置10min則球蛋白沉淀析出。2000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)入另一離心管，向沉淀中加少量水，觀察沉淀是否溶解，為什么？向另一離心管的上清液添加硫酸銨粉末，邊加邊攪，直至粉末不再溶解達(dá)到飽和為止，此時析出的沉淀為清蛋白。2000r/min離心5min，倒去上清液，向沉淀中加少量水，觀察沉淀是否溶解。

2．重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)：取1支試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液，再加入2滴3%硝酸銀溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成.

3．有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)：取1支試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。

4．有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)：取1支試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液，再加入2mL95%乙醇?；靹颍^察沉淀的生成。

5、乙醇引起的變性與沉淀：取3支試管，編號。依下表順序加入試劑：試劑（mL）試管號123蛋白質(zhì)溶液1.01.01.00.1mol/L氫氧化鈉溶液—1.0—0.1mol/L鹽酸溶液——1.0pH4.7緩沖溶液1.0——95%乙醇2.02.02.0振搖混勻后，觀察各管有何變化。放置片刻，向各管內(nèi)加水4mL，然后在第2，3號管中各加1滴甲基紅，再分別用0.1mol/L醋酸溶液及0.05mol/L碳酸鈉溶液中和之。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。每管再加0.1mol/L鹽酸溶液數(shù)滴，觀察沉淀的再溶解。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。

四、結(jié)果：1.鹽析：球蛋白在半飽和硫酸銨溶液中析出，清蛋白在飽和硫酸銨溶液中析出。(5ml)(5ml)

?管號試劑(mL)123蛋白質(zhì)溶液1.01.01.00.1mol/LNaOH—1.0—0.1mol/LHCl——1.0

pH4.7緩沖液1.0——

95%乙醇1.01.01.0混勻，觀察變化→放置片刻→各加8mLH2O2,3號管內(nèi)加1滴甲基紅，再分別用0.1mol/L醋酸和0.05mol/L碳