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蝗蟲精巢減數(shù)分裂觀察實驗?zāi)康耐ㄟ^對蝗蟲精子形成過程中減數(shù)分裂的觀察,了解動物生殖細胞形成的一般過程以及染色體在這一過程中的動態(tài)變化,從而深刻理解減數(shù)分裂的遺傳學(xué)意義。掌握壓片法制作減數(shù)分裂玻片標(biāo)本的技術(shù)。實驗原理減數(shù)分裂是有性生殖的生物在繁殖過程中的一種特殊的分裂方式。它與有絲分裂具有根本的差異,但又有一定的聯(lián)系,生物體通過有絲分裂使得細胞數(shù)目增多,分裂后的子細胞得到遺傳組分相同的染色體。生物體在繁殖過程中通過減數(shù)分裂使得配子中染色體數(shù)目減為體細胞的一半,乘坐單倍體細胞。這樣再通過雌雄配子的結(jié)合又可以在后代細胞中回復(fù)正常的染色體數(shù)目,從而保持了物種的穩(wěn)定性,而且同源染色體在染色體配對過程中發(fā)生了非姐妹染色體的節(jié)段交換,為后代表現(xiàn)得多樣性提供了遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ),在動物的精巢和卵巢組織中有些細胞經(jīng)過生長和分化成為精母細胞和卵母細胞,它們經(jīng)過減數(shù)分裂分別形成4個精細胞和1個卵細胞。與有絲分裂相比,減數(shù)分裂過程的前期很長,可以劃分為5個時期。其染色體的變化也比較復(fù)雜,要經(jīng)過一個逐步螺旋、折疊和濃縮的過程。特別是在偶線期內(nèi),同源染色體進行聯(lián)會,進而在粗線期發(fā)生非姐妹染色體的節(jié)段交換,因此我們可以在雙線期觀察到許多交叉圖像。我們可以通過對減數(shù)分裂過程中染色體動態(tài)變化的觀察加深對這一分裂過程的認(rèn)識,并且為雜種細胞學(xué)分析、物種間情緣關(guān)系的鑒定等提供可靠地依據(jù)。實驗材料與試劑雄性蝗蟲;顯微鏡、解剖針、解剖剪、Carnoy固定液(乙醇:冰乙酸,體積比為3:1)、載玻片、蓋玻片、改良苯酚品紅染液。實驗步驟蝗蟲的捕捉和固定捕捉雄性蝗蟲,直接投入到Carnoy固定液中固定24小時,然后轉(zhuǎn)到體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中保存。若在4℃冰箱中保存,可以長期使用?;认x的性別區(qū)分非常容易雄性蝗蟲個體較小,雌性蝗蟲較大。同時由于雌性蝗蟲的尾部有產(chǎn)卵瓣,所以從外觀上易于區(qū)別?;认x精巢的剖取解剖蝗蟲時,先將翅膀減去,在翅基部的后方,相當(dāng)于腹部背側(cè)的前端,用解剖剪將其體壁剪開,即可看到在上方兩側(cè)各有一塊黃色的團塊,這邊是蝗蟲的精巢。精巢由許多排列在一起的精小管組成。將取出的精巢放在蒸餾水的培養(yǎng)皿中,用解剖針輕輕剝離精巢,即可看到許多精小管。染色及壓片取1~2根精小管放在干凈的載玻片上,用吸水紙將上面的蒸餾水吸干凈。在精小管位置上滴加一滴改良苯酚品紅染液,使染色液淹沒精小管,在室溫下染色10~15min。蓋上蓋玻片,在蓋玻片上墊1~2層吸水紙,用一只手穩(wěn)住載玻片和蓋玻片以防止滑動,另一只手用一解剖針的針柄敲擊蓋片,看到精小管破碎并均勻散開即可。鏡檢:先用低倍鏡觀察,找到分裂相對較多的視野,然后用高倍鏡觀察。要求能夠?qū)p數(shù)分裂的各個時期分辨清楚,特鄙視對前期的各時期能夠獨立辨認(rèn)。實驗觀察與圖像分析5.1前期Ⅰ、中期Ⅰ、后期Ⅰ、末期Ⅰ由圖像可知,混成一團的染色體,為前期Ⅰ;其中也存在著中期Ⅰ的細胞,只是數(shù)量較少,此照片中為由細胞兩極的方向看去所觀察到的染色體;在右下角的區(qū)域,存在著紡錘絲牽引下向兩極移動的后期Ⅰ的細胞;右下角存在進入末期Ⅰ不久的細胞。5.2減數(shù)第一次分裂相關(guān)的其他圖片從該圖中可以清楚地看出處于減數(shù)第一次分裂時期中期的染色體,可以輕松地數(shù)出蝗蟲成體細胞染色體的對數(shù)為23對;后期Ⅰ時期的細胞在中部格外清晰。5.3前期Ⅱ、中期Ⅱ、后期Ⅱ、末期Ⅱ從該圖片中可以看到:剛剛結(jié)束減數(shù)第一次分裂的前期Ⅱ細胞;在左邊偏下的位置由沿著赤道面觀察的中期Ⅱ細胞,可以看到染色體排列在赤道板附近;左下方的位置有向細胞兩極移動的后期Ⅱ細胞;再下一張的圖片中清晰的有染色單體組成的染色體組,具有處于末期Ⅱ的細胞。也可以通過數(shù)減數(shù)第二次分裂階段的細胞,得出蝗蟲染色體的數(shù)目為23對。5.4蝗蟲復(fù)眼的400倍觀察由圖可知:蝗蟲的復(fù)眼為許許多多的六邊形組成;且其組成的六邊形并不是規(guī)整的六邊形,有一對對邊較長,其它對邊的長度相近。而由第二張圖片可知:六邊形的各邊相近,故可能觀察的角度偏差導(dǎo)致了觀察結(jié)果的差異。實驗討論6.1敘述有絲分裂和減數(shù)分裂的異同。答:相同點:首先,有絲分裂和減數(shù)分裂都是細胞增殖的方式。其次,有絲分裂和減數(shù)第二次分裂過程相同,都是著絲點斷裂,染色單體分開后進入兩個子細胞的過程,在這個過程中,分裂前后細胞中染色體數(shù)目不變,而細胞數(shù)量增加一倍。不同點:有絲分裂是生物體體細胞增殖的方式,在分裂前后細胞中染色體數(shù)目、DNA數(shù)目沒有發(fā)生變化,只是細胞數(shù)量增加。減數(shù)分裂是生殖細胞形成的方式。在分裂過程中,DNA復(fù)制一次,而細胞連續(xù)分裂兩次,使得細胞中的染色體數(shù)目和DNA數(shù)目都減少一半。6.2減數(shù)分裂過程中,染色體數(shù)目的減半發(fā)生在哪個時期?答:染色體數(shù)目減半發(fā)生在減數(shù)第一次分裂末期,形成了細胞膜,一個細胞分成兩個,每個細胞中含有半數(shù)的染色體,但每一條染色體上有兩條染色單體。6.3如何區(qū)分減數(shù)第一次和減數(shù)第二次分裂的細胞?答:根據(jù)細胞中染色單體和染色體來區(qū)分。存在染色單體且染色體數(shù)目未減半則為減數(shù)第一次分裂階段,染色體數(shù)目只有體細胞數(shù)目的一半或沒有染色單體則處于減數(shù)第二次分裂
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