骨碎補(bǔ)燙制品中柚皮苷含量下降的原因分析

骨碎補(bǔ)燙制品中柚皮苷含量下降的原因分析

骨碎補(bǔ)是龍眼骨科植物的rynaliandryndarin（kunze）j.sm的干燥根莖。具有補(bǔ)腎強(qiáng)骨、連續(xù)傷止痛的功效，尤其是黃酮類化合物，如酒精。由于生品骨碎補(bǔ)覆有較多的鱗毛,因此在臨床應(yīng)用時往往采用砂燙法達(dá)到凈制去毛的目的。燙制過的骨碎補(bǔ)膨脹鼓起,質(zhì)地酥脆,利于粉碎和便于有效成分的溶出。有研究表明骨碎補(bǔ)燙制前后所含柚皮苷總量降低約30%,而又有研究表明砂燙骨碎補(bǔ)與生品(去毛)中的柚皮苷含量基本相同。同樣是采用高效液相色譜法測定砂燙骨碎補(bǔ)中柚皮苷的含量,為什么結(jié)果卻有如此之大的差異呢?筆者在試驗研究中也遇到過此種情況,結(jié)合實踐分析,認(rèn)為在手工燙制骨碎補(bǔ)時雖然存在諸多影響因素,但最主要的影響因素應(yīng)是投藥量多少的不同,當(dāng)投藥量過大時,單鍋燙制藥材造成炮制過火導(dǎo)致成品質(zhì)量下降,從而影響了炮制品中柚皮苷含量的差異。茲有實驗數(shù)據(jù)證明如下。1儀器、藥品和試劑液化天然氣灶具(河北紅日);圓底鍋(鍋口直徑36cm,鍋深32cm);水銀溫度計(量程300℃)電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱(上海福馬DGX-9143B-1,溫度范圍1℃-300℃,溫度波動±0.1℃)高效液相色譜儀(SHIMADZULC-10AT);SPD-10A可調(diào)紫外檢測器;MI-CROLITER.IM#702手動進(jìn)樣器;天津-chrom真空泵;AutoscienceAs3120B超聲清洗器;N2000浙大智達(dá)色譜工作站。骨碎補(bǔ)藥材購自河北安國昌達(dá)飲片公司,經(jīng)本系中藥鑒定學(xué)教研室主任崔桂華教授鑒定為水龍骨科植物槲蕨Drymariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根莖。柚皮苷對照品(110722-200709,供含量測定用,購自中國藥品生物制品檢定所)。乙腈(色譜純,天津科密歐化學(xué)試劑廠),水為重蒸餾水,甲醇、磷酸為分析純。2方法和結(jié)果2.1凈河砂的制作取未切制的原藥材,除去個頭較大和較小者。將2.5kg凈河砂置于鍋內(nèi),武火加熱至靈活狀態(tài),投入大小均勻的骨碎補(bǔ),不斷翻埋,至藥材全部膨脹鼓起,用笊籬撈出,放涼。撞去毛。2.2重量測定2.2.1流動相、柱溫度色譜柱為DiammondODSC18反相柱(4.6mm×200mm),粒徑5μm;流動相:乙睛—0.05mol/L磷酸三乙胺溶液(20:80);檢測波長:283nm;柱溫:25℃;流速:0.9ml/min。2.2.5精密度測試精密吸取同一供試品溶液10μl,按上述色譜條件操作,連續(xù)進(jìn)樣5次,分別測定色譜峰面積,測定結(jié)果RSD=0.87%。2.2.6重復(fù)試驗取同一批次六份樣品,分別按上述條件測柚皮苷含量,RSD為0.89%。2.2.7回收率試驗取一樣品粉末,精密稱取5份,分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml,按2.2.3項下方法制備、測定,測得柚皮苷平均回收率為98.11%。2.2.8樣品的重量測量取藥材及燙制品各0.25g,按2.2.3項下方法制得供試品溶液,以上述色譜條件測定,結(jié)果見表1。3討論3.1骨碎補(bǔ)在實驗條件下的化合物測定從表1中的實驗數(shù)據(jù)可以看出,編號為A和B的燙制品中柚皮苷的量與生品相差不多,并且略高于生品,說明骨碎補(bǔ)在該實驗條件下經(jīng)過砂燙后其柚皮苷等黃酮類化合物的含量并沒有受到影響,卻有利于有效成分的溶出,與文獻(xiàn)報道的結(jié)果一致。3.2水果粉中柚皮苷的含量編號為C的燙制品中柚皮苷的量卻明顯低于生品中柚皮苷的量,前者的平均含量較之于后者下降了約24%,與文獻(xiàn)報道的情況較為相似。3.3碎補(bǔ)中柚皮苷的含量對標(biāo)號為C的燙制品進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),一部分骨碎補(bǔ)的斷面為紅棕色或深褐色,這種骨碎補(bǔ)中柚皮苷的含量在0.297～0.303%之間,約占總量的52%。而另一部分?jǐn)嗝嫒詾榈厣墓撬檠a(bǔ)中柚皮苷的含量為0.573%左右,約占總量的48%。兩種不同含量制品的共存使得編號為C的燙制品中柚皮苷的量明顯低于生品和其他燙制品。3.4鍋內(nèi)河砂質(zhì)量柚皮苷含量范圍在0.297%～0.303%之間的燙制品除了斷面顏色加深外,表面焦斑也較多,屬于炮制操作中的“過火”現(xiàn)象。砂燙藥材時,要求河砂的量應(yīng)以能完全掩蓋包埋住藥材為度。由于本實驗中,鍋內(nèi)河砂的量是固定的,所以在燙制藥材時如果投藥量較多(500g),則在翻炒過程中會造成部分藥材沉入鍋底,而鍋底的溫度非常高,很容易使藥材炮制過火。其次,如果單鍋燙制的藥材的量較大,則使鍋內(nèi)藥材全部膨脹鼓起的時間就會較長,而長時間的加熱會使河砂蓄積的熱量過大從而使砂溫過高,也會使藥材出現(xiàn)過火現(xiàn)象。因此,筆者認(rèn)為在相同的操作條件下投藥量過大造成藥材炮制過火是導(dǎo)致成品質(zhì)量下降的主要原因。3.53.6砂燙后膨脹鼓起骨碎補(bǔ)藥材質(zhì)地堅硬,干癟而彎曲,砂燙后立刻膨脹鼓起且比較直,此種變化較之于飲片來說更為明顯,因而在本實驗中采用的是藥材的個子貨而非飲片。3.7工作中不可替代而對于那些不具備自動炒藥機(jī)的醫(yī)療、科研及教學(xué)單位,手工燙制藥物仍是工作中不可替代的操作手段。在手工操作時,河砂的用量,火力的大小,加熱時間的長短,投藥時機(jī)的判斷,投藥量的多少,翻炒的速度和方法,藥物炒至程度的辨別以及出鍋的快慢都會影響到炮制品質(zhì)量的好壞。3.82燙制時間的影響筆者在研究中發(fā)現(xiàn),河砂的溫度范圍在140℃～190℃之間,都會使藥材“膨脹鼓起”,只是燙制的時間不同。燙制品雖然在外觀上較為相似,但內(nèi)在差異往往較大。因此建議藥典對燙制要求的描述進(jìn)行量化。3.92.2.2稀釋液的稀釋精密稱取在110℃干燥至恒重的柚皮苷對照品12mg,置l0ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取lml,置l0ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,再精密量取稀釋液5m1置l0ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。(68.7μg/ml)。2.2.3微孔濾膜將骨碎補(bǔ)生品及燙制品粉碎成粗粉備用,精密稱定0.25g樣品于100ml錐形瓶中,加甲醇30m1,加熱回流3小時,放冷,濾過,濾液置50m1量瓶中,用少量甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌容器,洗液濾入同一量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,過微孔濾膜,即得。2.2.4藥物投加量的影響精密吸取對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10μl注入高效液相色譜儀中,按上述色譜條件進(jìn)行測定,記錄色譜峰面積,以峰面積對藥物質(zhì)量進(jìn)行回歸,得回歸方程為y=1085.82467x-1.