環(huán)境毒理學(xué)魚類毒性試驗(yàn)

環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)1整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)主要內(nèi)容

前言

目的與要求

實(shí)驗(yàn)原理3

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)報(bào)告

注意事項(xiàng)75126

實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)條件42整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)1前言魚類是水生食物鏈的頂級(jí)生物，也是水體中最為重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物。在污染水體中，當(dāng)污染物到達(dá)一定濃度時(shí)，就會(huì)引起魚類各種中毒反響。在人為控制條件下，進(jìn)行各種魚類毒性實(shí)驗(yàn)，不僅用于化學(xué)品毒性強(qiáng)度測(cè)定、水體污染程度、廢水及其處理效果檢查，而且也為制定水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)價(jià)環(huán)境質(zhì)量和管理廢水排放提供科學(xué)依據(jù)。3整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)2目的與要求通過本實(shí)驗(yàn)，熟悉和掌握魚類急性毒性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)、條件、操作步驟，以及試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算、分析和報(bào)告擬寫等全過程。4整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)3實(shí)驗(yàn)原理魚類對(duì)環(huán)境反映靈敏引起中毒污染物濃度到達(dá)一定程度行為異常組織細(xì)胞病變生理功能紊亂死亡5整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)3實(shí)驗(yàn)原理死亡率C1C2C3C4C50h24h48h72h96h確定半數(shù)致死濃度〔24hLC50、48hLC50、72hLC50和96hLC50〕，并記錄無死亡的最大濃度和導(dǎo)致魚類全部死亡的最小實(shí)驗(yàn)濃度。魚類急性毒性試驗(yàn)不僅用于測(cè)定化學(xué)物質(zhì)毒性強(qiáng)度、測(cè)定水體污染程度、檢查廢水處理的有效程度，也為制定水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)價(jià)環(huán)境質(zhì)量和管理廢水排放提供環(huán)境依據(jù)。表3-1不同溶液濃度和不同培養(yǎng)時(shí)間下魚類的死亡率返回6整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)4實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)條件4.1實(shí)驗(yàn)魚的選擇與馴養(yǎng)對(duì)污染物敏感在生態(tài)類群中具有代表性經(jīng)濟(jì)價(jià)值比較高來源豐富、取材方便遺傳穩(wěn)定、生物學(xué)背景資料豐富體積大小適中原那么在室內(nèi)條件下易于飼養(yǎng)和繁殖斑馬魚是國際上通用的魚類急性毒性實(shí)驗(yàn)魚種。本實(shí)驗(yàn)以斑馬魚為實(shí)驗(yàn)魚。建議的實(shí)驗(yàn)溫度21-25℃，建議實(shí)驗(yàn)魚的全長2.0±1.0cm。試驗(yàn)前必須馴養(yǎng)〔健康選擇〕：相同水質(zhì)水溫的水體中至少馴養(yǎng)7d〔＜2個(gè)月〕、每天換水、每天喂食1-2次、試驗(yàn)前一天應(yīng)停止喂食、馴養(yǎng)期間試驗(yàn)魚死亡率不得超過5％。7整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)4實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)條件4.2實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備〔1〕實(shí)驗(yàn)容器實(shí)驗(yàn)容器一般用玻璃或其他化學(xué)惰性材質(zhì)制成的水族箱或水槽。容器的深度必須超過16cm，水體外表積越大越好。同一實(shí)驗(yàn)應(yīng)采用相同規(guī)格和質(zhì)量的容器。為防止魚類跳出容器，可在容器上加上網(wǎng)罩。實(shí)驗(yàn)容器使用后，必須徹底洗凈，以除去所有毒性殘留物?！?〕其他溶解氧測(cè)定儀、溶解氧控制儀、水硬度計(jì)、溫度控制儀、pH計(jì)、分析天平、分光光度計(jì)〔六價(jià)鉻：二苯碳酰二肼分光光度法〕、抄網(wǎng)。8整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)4實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)條件4.3實(shí)驗(yàn)溶液的制備以重鉻酸鉀為實(shí)驗(yàn)毒物，實(shí)驗(yàn)溶液的母液由蒸餾水配制而成。母液最好每日配各1次，比較穩(wěn)定的物質(zhì)也可以兩日配制1次，配好后，最好低溫保存。配制好的母液可以稀釋為進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)的溶液，以等比或等對(duì)數(shù)間距設(shè)置濃度系列，相臨濃度比值不得超過2.2〔母液3L，50g/L重鉻酸鉀〕。9整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)4實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)條件4.4實(shí)驗(yàn)用水〔稀釋水〕高質(zhì)量的自然水標(biāo)準(zhǔn)稀釋水未受污染的清潔水天然湖水、河水或地下水，需要過濾等處理。實(shí)驗(yàn)方法配制10整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)4實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)條件4.4實(shí)驗(yàn)用水〔稀釋水〕溶液中鈣離子和鎂離子的總和是2.5mmol/L。Ca:Mg為4:1，Na:K為10:1。必要時(shí)，用氫氧化鈉溶液或鹽酸調(diào)節(jié)pH，使其穩(wěn)定在7.8±0.2。稀釋用水需經(jīng)曝氣直到氧飽和為止，然后儲(chǔ)存?zhèn)溆茫谑褂们安槐卦倨貧狻?1整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)4實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)條件4.5水質(zhì)條件確保試液溫度控制在23℃±1℃水溫實(shí)驗(yàn)液的pH在6.7～8.5為宜pH至少應(yīng)保持在4mg/L以上，不低于空氣飽和值的60%DO水的總硬度為10～250mg/L硬度以96h為宜（至少24h）周期系統(tǒng)承載量為1.0g魚/L溶液負(fù)荷12-16h/d光照12整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)4實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)條件4.6實(shí)驗(yàn)液更換方式每隔一定時(shí)間更換一次試驗(yàn)藥液。適用于試驗(yàn)濃度在更換試驗(yàn)藥液的時(shí)間內(nèi)保持相對(duì)穩(wěn)定的物質(zhì)。試驗(yàn)期間不需更換試驗(yàn)液，限于測(cè)定那些化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定的物質(zhì)。試驗(yàn)藥液連續(xù)更新，可用于大多數(shù)物質(zhì)，包括水中不穩(wěn)定的物質(zhì)。靜水式換水式流水式13整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)5實(shí)驗(yàn)步驟第六頁設(shè)置跨度較大的濃度范圍每個(gè)濃度下放入5條魚，靜態(tài)實(shí)驗(yàn)每天記錄魚的死亡率，取出死魚24h全死亡濃度Cm96h無死亡濃度C03~6h后觀察魚類活動(dòng)異常行為24h、48h、72h、96h后檢查受試魚的狀況實(shí)驗(yàn)結(jié)束測(cè)pH、DO溫度、受試物濃度無以上結(jié)果，另取濃度范圍重新實(shí)驗(yàn)C0~Cm間設(shè)5個(gè)濃度組每個(gè)濃度3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)每系列一個(gè)空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)開始測(cè)pH、DO溫度、受試物濃度，期間日測(cè)一次pH、DO、t第一階段——預(yù)處理：為正式實(shí)驗(yàn)確定濃度范圍。第二階段——正式實(shí)驗(yàn)：確定不同溶液濃度和不同培養(yǎng)時(shí)間下魚類的死亡率，找出24h、48h、72h、96h時(shí)的LC50值。14整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)6實(shí)驗(yàn)報(bào)告6.1數(shù)據(jù)處理用直線內(nèi)插法或常用統(tǒng)計(jì)程序計(jì)算出24h、48h、72h、96h的半致死濃度〔LC50〕值，并計(jì)算95％的置信限。如果試驗(yàn)數(shù)據(jù)不適于計(jì)算LC50，可用不引起死亡的最高濃度和引起100％死亡的最低死亡濃度估算LC50的近似值，即這兩個(gè)濃度的幾何平均值。15整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)6實(shí)驗(yàn)報(bào)告6.2毒性分級(jí)〔結(jié)果評(píng)價(jià)〕96hLC50mg/L＜11～100100～10001000～10000＞10000毒性分級(jí)劇毒高毒中等毒低毒微毒/無毒96hLC50mg/L≤11～1010～100≥100毒性分級(jí)極高毒高毒中毒低毒表6-11990年國家環(huán)保局?環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)?表6-21994年國家環(huán)保局?新化學(xué)物質(zhì)危害評(píng)估準(zhǔn)那么?16整理課件環(huán)境毒理學(xué)——魚類毒性試驗(yàn)6實(shí)驗(yàn)報(bào)告6.3實(shí)驗(yàn)報(bào)告擬寫在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)包括：試驗(yàn)名稱、目的、試驗(yàn)原理、試驗(yàn)的準(zhǔn)確起止日期，還有如下幾項(xiàng)：試驗(yàn)魚：種名、來源、體重、體長、健康和馴化狀況受試物質(zhì)：名稱、來源物化性質(zhì)和保存方法試驗(yàn)方法及標(biāo)準(zhǔn)稀釋水、儲(chǔ)備液、試驗(yàn)液的配制方法及性質(zhì)條件：水溫、光照、DO、pH、水質(zhì)、容器形式、負(fù)荷率等實(shí)驗(yàn)開始后24h、48h、72h、96h時(shí)的LC50值和95%置信限中毒癥狀、所采用的計(jì)算方