手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

手足口病的診斷一般是通過臨床標(biāo)本進(jìn)行病毒分離和病毒鑒定。也可以通過血清學(xué)試驗(yàn)來檢測(cè)血清中的中和抗體，或直接從臨床標(biāo)本中檢測(cè)病毒的核酸來診斷。能引起手足口病的腸道病毒有很多血清型，不同細(xì)胞系對(duì)不同病毒的敏感性是有所不同的。通常用于腸道病毒分離的細(xì)胞系為RD細(xì)胞（對(duì)CA16和EV71敏感）、HEp-2細(xì)胞（對(duì)某些柯薩奇B組病毒敏感）及Vero細(xì)胞等?？倓t使用血清型特異性的中和抗血清進(jìn)行的中和試驗(yàn)是腸道病毒鑒定的基本方法，如果使用了適當(dāng)?shù)目寡?，?shí)驗(yàn)結(jié)果是比較可靠的。因?yàn)槟c道病毒包括若干個(gè)血清型，通常使用組合抗血清進(jìn)行鑒定。當(dāng)無(wú)法進(jìn)行病毒分離或得不到適用于病毒分離用的標(biāo)本時(shí)，血清學(xué)檢測(cè)可以為腸道病毒的感染提供一個(gè)間接的證據(jù)。一般用急性期血清與恢復(fù)期血清的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，抗體滴度呈四倍或以上增高證明有急性感染。但是，無(wú)癥狀的腸道病毒感染也是常見的，所以對(duì)檢測(cè)結(jié)果的解釋要慎重一些。為了提高檢測(cè)速度，也為了輔助中和實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行毒株鑒定，最近很多實(shí)驗(yàn)室都使用分子生物學(xué)方法。目前，用分子生物學(xué)方法對(duì)腸道病毒進(jìn)行定型還沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，而且要根據(jù)檢測(cè)目的選擇使用適用的方法。一、病原學(xué)

引起手足口病的主要為小RNA病毒科、腸道病毒屬的柯薩奇病毒(Coxasckievirus)A組16、4、5、7、9、10型，B組2、5、13型；?？刹《荆‥CHOviruses）和腸道病毒71型（EV71），其中以EV71及CoxAl6型最為常見。腸道病毒適合在濕、熱的環(huán)境下生存與傳播，對(duì)乙醚、去氯膽酸鹽等不敏感，75%酒精和5%來蘇亦不能將其滅活，但對(duì)紫外線及干燥敏感。各種氧化劑(高錳酸鉀、漂白粉等)、甲醛、碘酒都能滅活病毒。病毒在50℃可被迅速滅活，但1mol濃度二價(jià)陽(yáng)離子環(huán)境可提高病毒對(duì)熱滅活的抵抗力，病毒在4℃可存活1年，在-20℃可長(zhǎng)期保存，在外環(huán)境中病毒可長(zhǎng)期存活。二、實(shí)驗(yàn)室診斷病例根據(jù)手、足、口等部位典型皮疹即可作出HFMD臨床診斷，流行病學(xué)接觸史有助于診斷，臨床診斷病例中符合下列之一，即為實(shí)驗(yàn)室診斷病例：

1．病毒分離自咽拭子或咽喉洗液、糞便或肛拭子、腦脊液或皰疹液、以及腦、肺、脾、淋巴結(jié)等組織標(biāo)本中分離到腸道病毒。2．血清學(xué)檢驗(yàn)病人血清中特異性IgM抗體陽(yáng)性，或急性期與恢復(fù)期血清IgG抗體有4倍以上的升高。3．核酸檢驗(yàn)自病人血清、咽拭子或咽喉洗液、糞便或肛拭子、腦脊液或皰疹液以及腦、肺、脾、淋巴結(jié)組織等的標(biāo)本中檢測(cè)到病毒核酸。三、檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)如果從臨床標(biāo)本中分離到腸道病毒，尤其是分離自腦脊液、皰疹液，那么很可能該病毒就是病因病原。當(dāng)無(wú)法進(jìn)行病毒分離或未分離到病毒時(shí)，血清學(xué)診斷方法可以作為病毒感染的間接證據(jù)。對(duì)于難以分離到的腸道病毒，分子生物學(xué)方法如RT-PCR是很有用的。腸道病毒有時(shí)引起無(wú)癥狀感染，所以實(shí)驗(yàn)結(jié)果的實(shí)際意義應(yīng)結(jié)合臨床過程和流行病學(xué)資料進(jìn)行解釋。四、標(biāo)本采集對(duì)象

出現(xiàn)手足口病暴發(fā)疫情的所在社區(qū)（村）的臨床診斷病例和與之相鄰的無(wú)病例社區(qū)（村）的托幼機(jī)構(gòu)5歲以下兒童的健康對(duì)照人群。標(biāo)本包括糞便、咽拭子和皰疹液，如果患者出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，可以采集腦脊液標(biāo)本。對(duì)于血清學(xué)診斷，需要在急性期和恢復(fù)期采集雙份血清標(biāo)本。臨床標(biāo)