dc-cik細胞治療中晚期惡性腫瘤的臨床療效分析

dc-cik細胞治療中晚期惡性腫瘤的臨床療效分析

腫瘤是中國的常見病和常見病，嚴重威脅著人們的健康和生活。治療的主要方法是手術、放療、化療和生物治療。在生物治療中,DC-CIK細胞,即樹突狀細胞(Dendriticcell,DC)與細胞因子誘導的殺傷(Cytokineinducedkillers,CIK)細胞共培養(yǎng)聯(lián)合治療腫瘤,是療效較好的過繼性免疫細胞治療方法,為預防腫瘤復發(fā)、消除患者體內(nèi)殘留的腫瘤細胞、改善晚期腫瘤患者的生存質(zhì)量提供了新的治療途徑,目前臨床應用愈來愈廣泛。我中心與遼寧三早腫瘤醫(yī)學研究院合作,自2001年12月至2009年12月,采用該方法治療手術及放、化療后的中晚期惡性腫瘤531例,取得了一定療效,現(xiàn)報道如下。1數(shù)據(jù)和方法1.1手術及放療期間ag-nors評分本組531例均經(jīng)影像學、細胞學及病理學等確診為惡性實體瘤,并根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(UICC)分期標準進行臨床分期。其中男性237例,女性294例。年齡35~80歲,平均年齡56.89歲肺癌126例(SCLC89例,NSCLC37例),乳腺癌119例,大腸癌79例,胃癌68例,肝癌41例,胰腺癌22例,腎癌18例,卵巢癌16例,前列腺癌11例,宮頸癌10例,子宮內(nèi)膜癌9例,膀胱癌及鼻咽癌各6例Ⅱ期173例(32.6%),Ⅲ-Ⅳ期358例(67.4%),其中術后312例、化療后426例、放療后289例。Ⅳ期89例中,分別轉(zhuǎn)移至肝、肺、腦、腎上腺、卵巢等臟器KPS評分80分以上62例,60~80分364例,60分以下105例。531例Ag-NORs值均<6%,其中4%~5%之間者129例,5%~6%之間者402例。局部疼痛98例,體重減少187例,胸水56例,腹水33例所有病例于手術及放、化療后1~3個月后來院。所有患者或法定代理人知情并簽署《知情同意書》,通過醫(yī)院倫理委員會同意后接受細胞治療。1.2方法1.2.1細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染DC細胞培養(yǎng)COBESpectra6血細胞分離機分離健康人外周血單個核細胞,分離體積為0.3~0.4倍血容量。經(jīng)Ficoll淋巴細胞分離液從單個核細胞分離淋巴細胞。用RP-MI1640培養(yǎng)液洗滌2次,用BTN無血清培養(yǎng)基混懸于培養(yǎng)瓶中,置37℃5%CO2孵育箱中,2小時后將懸浮細胞移出,加入IL-4(500U/ml),GM-CSF(1000U/ml)繼續(xù)培養(yǎng),每隔2~3天換液1次,第6天加入TNF-α(500U/ml)。CIK細胞培養(yǎng):分離后淋巴細胞加入重組人IFN-γ(1000U/ml)和10%AB型人血清的RPMI1640培養(yǎng)液,24小時后更換成含100ng/ml小鼠抗人CD3單克隆抗體、IL-1α(1000U/ml)和IL-2(1000U/ml)的RPMI1640完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),2天后換含IL-2(1000U/ml)的完全培養(yǎng)液隔日換液維持培養(yǎng)。DC-CIK細胞培養(yǎng):收獲第7天的DC細胞及CIK細胞,經(jīng)活細胞計數(shù)后按1∶5混合培養(yǎng),3天后開始應用。DC-CIK質(zhì)量控制標準:流式細胞術檢測CD3+CD56+NKT≥50%,CD3+CD8+≥30%。細胞存活率≥95%,不含細菌和內(nèi)毒素。1.2.2客觀緩解率or靜脈輸注DC-CIK細胞5×109/次,4次為一個療程,每例至少治療2個療程,一般治療4個療程,最多者治療8個療程。1.2.3.1可測量病灶的客觀緩解率(OR)參照WHO對實體瘤近期療效判定標準,以病人治療前及治療后1個月MRI、CT測量病灶大小(雙徑測量),進行對照比較,分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)無變化(SD)和進展(PD)。以CR+PR統(tǒng)計客觀緩解率(OR)。1.2.3.2臨床受益率(CBR)生活質(zhì)量及體力改善狀況采用國際通用的卡氏評分(Karnofsky)評價,提高≥20分;疼痛程度評估采用數(shù)字分級法,疼痛程度減輕≥50%;胸腹水減少≥50%;體重量增加≥7%。1.2.3.3免疫學評價分別于治療前、治療后15日測定患者外周血T淋巴細胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性—以細胞核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)酸性非組蛋白表達活性檢測值為參考,即對T淋巴細胞銀染染色,通過KL-Ⅱ免疫圖像分析系統(tǒng),計算淋巴細胞AgNORs面積與核面積的比值(IS%),對治療前及治療后的檢測值進行統(tǒng)計學分析。1.2.3.4考察Ⅲ-Ⅳ期病人3年生存率。1.2.3.5安全性評價本組評價標準主要為WHO的抗腫瘤藥急性及亞急性毒性反應分度標準,同時參考加拿大國家癌癥研究所的常見毒性標準(NCIC-CTC)。外周血象:白細胞及血小板治療前及治療后每周復查一次,對治療前及治療后第4周數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。肝功能、腎功能及心電圖治療前及治療后第4周檢查,并對治療前后數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理,考察治療對上述指標是否有影響。觀察患者在治療過程中所出現(xiàn)的不良反應,如有無發(fā)熱、皮疹嘔吐腹瀉等毒副反應1.3統(tǒng)計學學處理本組資料采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件分析,計量資料采用t檢驗,以P<0.05為標準判斷差異有統(tǒng)計學意義;等級資料采用Ridit分析,以P<0.05為標準判斷差異有統(tǒng)計學意義;計數(shù)資料采用χ2檢驗,以P<0.05為標準判斷差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2.1客觀緩解率或531例中126例有可測量病灶,其中CR6例,PR53例,OR為47.8%;SD62例(49.1%);PD5例(3.1%)。2.2須中小型企業(yè)以體重、體重增加顯著性試驗的總cbr390例患者可評價CBR:Karnofsky評分增加≥20分者占89.8%;疼痛減輕≥50%者占71.05%;胸腹水減少≥50%者占58.33%;體重量增加≥7%者占47.7%?？侰BR為93.33%。對治療前后患者Karnofsky評分進行統(tǒng)計學分析,治療后Karnofsky評分為91.36±2.20,較治療前(72.25±3.49)升高,并具有極顯著性差異。2.3是臨床療效,培養(yǎng)抗病劑Ag-NORs為RNA聚合酶的亞單位,是rDNA轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)蛋白。Ag-NORs反映rDNA的轉(zhuǎn)錄效率,體現(xiàn)淋巴細胞活性,間接反映機體免疫狀態(tài),因此對腫瘤的診斷、療效及預后具有重要意義。本組治療前后測定外周血T淋巴細胞AgNORs結(jié)果表明,治療后Ag-NORs的IS均值明顯升高,由(5.16±0.12)%升高至(5.68±0.08)%,56例恢復正常,較治療前具有極顯著性差異。2.4生存率2.5治療對外周血象及心功能的影響按照WHO關于抗癌藥急性和亞急性分級標準統(tǒng)計,治療前后對比,患者白細胞、血小板、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素、肌酐、尿素氮及心電圖均無顯著性差異(表略),說明治療對外周血象及心、肝、腎功能均無不良影響。531例治療期間,有6例患者輸入DC-CIK細胞后有一過性發(fā)熱反應(溫度≤37.5℃),未做處置,24小時內(nèi)即降至正常,不影響繼續(xù)治療。其余無其他不良反應。3dc-cik治療的臨床效果CIK細胞是將人外周血單個核細胞在體外多種細胞因子作用后獲得的一群異質(zhì)細胞,是一類非主要組織相容性復合物(MHC)和非T細胞受體(TCR)限制性的免疫活性細胞,兼具有T淋巴細胞強大的抗腫瘤活性和NK細胞非MHC限制性殺瘤作用,對各種血液系統(tǒng)腫瘤及實體瘤均具有廣譜的殺傷效應。DC細胞是機體重要的抗原提呈細胞,在介導免疫細胞的抗腫瘤活性中具有重要作用。與DC細胞共培養(yǎng)的DC-CIK細胞對腫瘤的識別和殺傷能力更強。有研究表明,DC-CIK細胞體外增殖量大,溶瘤作用強。單純CIK細胞組溶瘤率為15%,而共培養(yǎng)的DC-CIK細胞組溶瘤率達71%,而且分泌IFN-γ水平高,能調(diào)節(jié)和增強機體的免疫功能,提高間接殺瘤作用。臨床上,DC-CIK細胞特別適用于手術、放化療后腫瘤負荷較小的病人,在清除微小殘留病灶、預防腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移、提高治愈率方面發(fā)揮著重要作用;對于晚期已無手術和放化療適應癥的病人,DC-CIK細胞能控制癌性漿膜腔積液,改善晚期病人的生存質(zhì)量,延長生存期。最近,李卿、張效東等報道DC-CIK細胞與分子靶向藥物、微創(chuàng)技術等聯(lián)合應用,顯著提高了療效,為腫瘤的綜合治療提供了新的方式。本組結(jié)果表明,DC-CIK細胞對多種實體瘤有治療作用,531例患者總的客觀緩解率(OR)達47.8%,總臨床受益率(CBR)達93.33%,Ⅲ~Ⅳ期患者3年生存率61.2%,生存期顯著延長。治療后患者T-淋巴細胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性明顯升高,說明免疫功能得到顯著增強,這有利于改善患者的生存質(zhì)量和消除腫瘤細胞。本組觀察DC-CIK細胞對患者外周血象、心、肝、腎功能無明顯影響,不良反應少且程度輕,安全性很好。目前細胞免疫治療尚無標準方案,作者認為細胞回輸?shù)目倲?shù)應大于2×1010才能具有臨床治療效果,且療效通常與輸注的細胞數(shù)量成正相關,但也存在個體差異,這可能與患者體內(nèi)免疫環(huán)境、腫瘤的免疫原性等有關。在治療時機的選擇上,DC-CIK細胞治療應在手術及放、化療后盡早進行,這樣既有利于協(xié)同作用消除殘存的腫