急性出血性結(jié)膜炎應(yīng)急處置程序參考方案_第1頁
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文檔簡介

急性出血性結(jié)膜炎應(yīng)急處置技術(shù)方案(試行)1總則1.1背景急性出血性結(jié)膜炎(acutehemorrhagicconjunctivitis,AHC)也稱為流行性出血性結(jié)膜炎,是重要由腸道病毒引發(fā)的,以結(jié)膜高度充血,常見結(jié)膜下出血及角膜上皮點(diǎn)狀剝脫為重要臨床特性的傳染病。普通可在2~3周痊愈,屬于自限性疾病,預(yù)后良好。該病全年均可發(fā)病,多見于夏秋季,各年紀(jì)組人群均可發(fā)病。重要通過接觸傳輸,傳染性極強(qiáng),傳輸速度快,人群普遍易感,易造成流行或暴發(fā)。1.2編制目的為確保我一旦發(fā)生急性出血性結(jié)膜炎暴發(fā)疫情,能快速查清因素,并及時采用有效方法控制和撲滅疫情。2分級原則根據(jù)急性出血性結(jié)膜炎疾病的特性,以及我歷年急性出血性結(jié)膜炎的流行狀況,擬定1周內(nèi)一種自然村寨、社區(qū)、建筑工地、學(xué)校等集體單位發(fā)生20例以上流行性出血熱病例的視為暴發(fā)疫情。按照急性出血性結(jié)膜炎疫情發(fā)生和流行的性質(zhì)、危害程度和涉及范疇,將疫情劃分為特別重大(Ⅰ級)、重大(Ⅱ級)、較大(Ⅲ級)和普通(Ⅳ級)疫情,依次用紅色、橙色、藍(lán)色和黃色進(jìn)行預(yù)警,分別實(shí)施Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ級應(yīng)急響應(yīng)。2.2.1Ⅰ級疫情:1周內(nèi)在我半數(shù)以上縣(、區(qū))出現(xiàn)20起以上、持續(xù)發(fā)生的暴發(fā)疫情,且疫情涉及鄰近地,并有大范疇蔓延趨勢。2.2.2Ⅱ級疫情:1周內(nèi)在2個以上縣(、區(qū))出現(xiàn)10起以上暴發(fā)疫情,且有擴(kuò)大蔓延趨勢。2.2.3Ⅲ級疫情:1周內(nèi)在2個毗鄰的縣(、區(qū))出現(xiàn)5起以上暴發(fā)疫情,且有蔓延趨勢。2.2.4Ⅳ級疫情:1周內(nèi)在1個縣(、區(qū))范疇內(nèi)出現(xiàn)2起以上暴發(fā)疫情。3應(yīng)急響應(yīng)(1)Ⅳ級疫情發(fā)生時,縣(、區(qū))疾病防止控制中心應(yīng)立刻組織專業(yè)人員進(jìn)行調(diào)查確認(rèn),報告并請求縣(、區(qū))衛(wèi)生行政部門組織專家組對疫情進(jìn)行綜合評定。縣(、區(qū))疾病防止控制中心負(fù)責(zé)暴發(fā)疫情的現(xiàn)場調(diào)查、解決與報告。必要時,請級疾病防止控制中心提供技術(shù)支持。(2)Ⅲ級及Ⅱ級疫情發(fā)生時,級疾病防止控制中心應(yīng)立刻組織專業(yè)隊伍,會同疫情發(fā)生地縣(、區(qū))疾病防止控制中心,開展疫情的現(xiàn)場調(diào)查、解決與報告。報告并請求級衛(wèi)生行政部門組織專家組對疫情進(jìn)行綜合評定。必要時,請省級疾病防止控制中心提供技術(shù)支持。(3)Ⅰ級疫情發(fā)生時,由級疾病防止控制中心組織專業(yè)人員,會同疫情發(fā)生地的縣(、區(qū))疾病防止控制中心,開展疫情的現(xiàn)場調(diào)查、解決與報告。請省級衛(wèi)生行政部門組織專家組對疫情進(jìn)行綜合評定。必要時,由省級疾控中心統(tǒng)一組織協(xié)調(diào)疫情調(diào)查、解決。4現(xiàn)場處置4.1流行病學(xué)調(diào)查現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查是暴發(fā)疫情應(yīng)急處置的核心環(huán)節(jié)和中心環(huán)節(jié),必須做到認(rèn)真、細(xì)致,必要時應(yīng)開展重復(fù)、多次調(diào)查,力求查明因素和危險因素,為有效控制疫情提供對的的方向和根據(jù)。4.1.1普通狀況調(diào)查(1)理解疫情暴發(fā)單位所在該地區(qū)的位置、周邊環(huán)境。(2)理解疫情暴發(fā)單位和地區(qū)人員數(shù)、各類人員分布狀況。(3)理解疫情暴發(fā)單位和地區(qū)的接觸狀況、飲用水供應(yīng)狀況及水源狀況、飲食供應(yīng)、食堂衛(wèi)生、炊事人員健康狀況、廁所及糞便解決狀況。(4)理解疫情暴發(fā)單位和地區(qū)周邊環(huán)境衛(wèi)生狀況、單位人員的衛(wèi)生習(xí)慣,如喝生水、共用物品等。(5)理解疫情暴發(fā)單位和地區(qū)近1周內(nèi)有無大型聚會活動等。4.1.2發(fā)病狀況調(diào)查(1)理解該單位已經(jīng)掌握病人的臨床癥狀、體征、就診狀況和醫(yī)院檢查診療狀況,核算與報告疾病的診療與否符合。(2)理解該單位已經(jīng)掌握病人的發(fā)病時間、班級(小組或居民區(qū))分布、人群分布狀況。(3)理解該單位周邊的單位或周邊的群眾在近來與否有同樣病人發(fā)生、發(fā)生的時間、發(fā)病的人數(shù)、有無共同接觸等狀況。(4)到該單位或地區(qū)所在的醫(yī)療單位的門診、檢查科理解該病的就診檢查狀況,以發(fā)現(xiàn)病人和進(jìn)一步核算診療。(5)對該單位或村莊每個班組逐個進(jìn)行病人的搜索,全方面理解該單位或村莊的發(fā)病狀況。(6)個案調(diào)查:在普通狀況和發(fā)病狀況調(diào)查后,疾病防止控制機(jī)構(gòu)流行病學(xué)調(diào)查人員要在最短時間內(nèi)對報告和發(fā)現(xiàn)的病例進(jìn)行流行病學(xué)個案調(diào)查。個別需要增加的內(nèi)容能夠根據(jù)調(diào)查和理解的狀況增加。個案調(diào)查時,要認(rèn)真、具體地理解和統(tǒng)計患者發(fā)病前、發(fā)病后的親密接觸人員的有關(guān)狀況。4.1.3病因調(diào)查針對疫情的具體狀況,緊緊抓住疫情中的核心病人和線索病人,擬定診療原則和病例定義,開展病例搜索,盡量掌握疫情的全貌,通過描述性流行病學(xué)辦法,結(jié)合環(huán)境和衛(wèi)生學(xué)調(diào)查,以及疫情發(fā)生地的人群活動狀況,綜合分析,提出疫情的病因假設(shè)。4.1.4傳染來源和傳輸鏈調(diào)查(1)從全部病人個案調(diào)查表中查出該疫情發(fā)生的首例病人。(2)根據(jù)該病人和其它病人之間的發(fā)病時間,分析該病人是本次暴發(fā)或流行的傳染源還是同代病人。(3)若首例病人是本起暴發(fā)疫情的傳染源,追溯該病最長潛伏期內(nèi)有無急性出血性結(jié)膜炎病人接觸史等。(4)調(diào)查暴發(fā)單位發(fā)病信息,明確暴發(fā)單位與外界病例的聯(lián)系和暴露狀況。4.2控制方法控制方法在通過初步調(diào)查擬定后,為及時、有效地控制疫情,應(yīng)當(dāng)立刻采用初步方法,隨著調(diào)查的病因進(jìn)一步清晰,隨時補(bǔ)充或修正方法??刂品椒ㄖ匾婕埃?.2.1病人的隔離治療全部符合診療原則和病例定義的病人必須接受正規(guī)的隔離治療。隔離期為發(fā)病后5天。4.2.2切斷傳輸途徑在未明確傳輸因素以前,開始時能夠采用比較廣泛的控制方法,從有可能引發(fā)傳輸?shù)亩鄠€因素著手;隨著調(diào)查的進(jìn)一步,根據(jù)調(diào)查的成果,能夠作適宜的調(diào)節(jié),采用更具針對性的控制方法,重點(diǎn)針對一種或數(shù)個重要的危險因素開展防控方法,同時需注意不能從一種傳輸介質(zhì)污染到另外一種傳輸介質(zhì),以發(fā)生免疫情新的進(jìn)一步擴(kuò)散。切斷傳輸途徑的重要方法為加強(qiáng)宣傳教育、避免揉眼睛、加強(qiáng)洗手、避免與患者的親密生活接觸、避免通過文具和毛巾等物品間接接觸傳輸。要做好病人家庭、學(xué)校、幼兒園、病人工作單位食具、家具、被褥、玩具、課桌椅、辦公桌、辦公用品等的消毒。4.2.3保護(hù)易動人群(1)開展健康教育和健康增進(jìn)工作,做到勤洗手。(2)對親密接觸者進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察:凡與急性出血性結(jié)膜炎病例有明確或者可能接觸者,一旦發(fā)現(xiàn)接觸者中有出現(xiàn)類似癥狀,立刻按照病人解決。4.3現(xiàn)場應(yīng)急監(jiān)測和效果評定(1)疫情監(jiān)測:對疫情發(fā)生地的醫(yī)療單位發(fā)現(xiàn)病人及時報告,對疫情發(fā)生單位和村莊、居民區(qū)每天上門開展病人主動搜索;親密接觸者的癥狀監(jiān)測,發(fā)現(xiàn)病人及時隔離治療;疫情發(fā)生地周邊地區(qū)的疫情監(jiān)測等。(2)開展在健康教育前和后人群的急性出血性結(jié)膜炎防治知識和行為變化狀況的評定。(3)控制效果評定:在最后1例病人發(fā)病后經(jīng)1個最長潛伏期未出現(xiàn)新發(fā)病例,闡明各項(xiàng)方法是貫徹的,控制效果是好的。5附件附件1:急性出血性結(jié)膜炎個案調(diào)查表附件2:急性出血性結(jié)膜炎防止控制技術(shù)指南(試行)附件3:急性出血性結(jié)膜炎的實(shí)驗(yàn)室檢測附表1急性出血性結(jié)膜炎病例個案調(diào)查表病例編碼□□□□□□□□□□□1普通狀況1.1姓名:1.2身份證號碼:□□□□□□□□□□□□□□□□□□1.3出生日期:年月日□□□□□□□□(如出生日期不詳,實(shí)足年紀(jì)歲月天)□□□□□□1.4性別:⑴男⑵女□1.5職業(yè):□□⑴幼托小朋友⑵散居小朋友⑶學(xué)生⑷教師⑸醫(yī)務(wù)人員⑹餐飲業(yè)⑺商業(yè)服務(wù)⑻工人⑼民工⑽農(nóng)民⑾牧民⑿漁(船)民⒀干部職工⒁保育保姆⒂離退人員⒃家務(wù)待業(yè)⒄其它1.6文化程度□⑴學(xué)齡前小朋友⑵小學(xué)⑶初中⑷高中或中專⑸大學(xué)及以上⑹文盲⑺不詳1.7現(xiàn)居住地或工作學(xué)習(xí)單位:縣(區(qū))鄉(xiāng)(街道)村(社區(qū))聯(lián)系電話1.8家長或監(jiān)護(hù)人姓名:1.9病人屬于□⑴本縣區(qū)⑵本其它縣區(qū)⑶我省其它地⑷外?、筛郯呐_⑹外籍1.10病例分類⑴疑似病例⑵臨床診療病例⑶實(shí)驗(yàn)室確診病例□1.11發(fā)病日期:年月日□□□□□□□□1.12初診日期:年月日□□□□□□□□1.13初診單位:1.15確診日期:年月日□□□□□□□□1.16確診單位:2重要臨床體現(xiàn)2.1發(fā)熱:⑴正常⑵<38℃⑶<39℃⑷≥39℃□2.2眼刺癢:⑴有⑵無⑶不詳□2.3眼瞼沉重:⑴有⑵無⑶不詳□2.4畏光流淚:⑴有⑵無⑶不詳□2.5灼熱:⑴有⑵無⑶不詳□2.6視物不清:⑴有⑵無⑶不詳□2.7腫脹:⑴有⑵無⑶不詳□2.8乏力:⑴有⑵無⑶不詳□2.9粘液分泌物:⑴有⑵無⑶不詳□2.10膿性分泌物:⑴有⑵無⑶不詳□2.11結(jié)膜充血:⑴有⑵無⑶不詳□2.12病程:天□2.13其它3.流行病學(xué)調(diào)查3.1病前2天接觸同類病人:⑴有⑵無⑶不詳□3.2與患者關(guān)系:⑴家庭組員⑵同事或同窗⑶玩伴⑷其它□3.3家庭內(nèi)毛巾:⑴分開⑵不分開□3.4家庭內(nèi)臉盆:⑴分開⑵不分開□3.5家庭人數(shù):人□3.6乘坐公交車:⑴有⑵無□次數(shù):重要乘坐幾路車:3.7乘坐出租車:⑴有⑵無 □次數(shù):3.8游泳:⑴有⑵無 □3.9發(fā)病期間在家隔離:⑴是⑵否⑶不詳□3.10與否常洗手:⑴是⑵否□3.11與否打電話:⑴公用電話⑵家庭電話⑶單位電話 ⑷以上都有□3.12與否使用電腦:⑴公用電腦⑵家庭電腦⑶單位電腦 ⑷以上都有□3.13公共場合乘坐電梯:⑴有⑵無⑶不詳□大概次數(shù): 3.14飯店就餐:⑴有⑵無⑶不詳□大概次數(shù): 3.15舞廳或街頭跳舞:⑴有⑵無⑶不詳□大概次數(shù):3.16有否去過網(wǎng)吧:⑴有⑵無⑶不詳□大概次數(shù): 3.17有無打保齡球:⑴有⑵無⑶不詳□大概次數(shù): 3.18其它重要公共場合:4.調(diào)查小結(jié)調(diào)查人: 調(diào)查日期:附件2急性出血性結(jié)膜炎防止控制技術(shù)指南(試行)急性出血性結(jié)膜炎(acutehemorrhagicconjunctivitis)也稱為流行性出血性結(jié)膜炎,是重要由腸道病毒引發(fā)的,以結(jié)膜高度充血,常見結(jié)膜下出血及角膜上皮點(diǎn)狀剝脫為重要臨床特性的傳染病。普通可在2~3周痊愈,屬于自限性疾病,預(yù)后良好。該病全年均可發(fā)病,多見于夏秋季,各年紀(jì)組人群均可發(fā)病。重要通過接觸傳輸,傳染性極強(qiáng),傳輸速度快,人群普遍易感,易造成流行或暴發(fā)。為指導(dǎo)各地做好急性出血性結(jié)膜炎疫情控制工作,制訂本指南。一、病原學(xué)腸道病毒70型(Enterovirustype70,EV70)和柯薩奇病毒(Coxsackievirus)A組24型變種(CA24v)是急性出血性結(jié)膜炎的重要病原體。腺病毒11型也可引發(fā)該病。EV70屬微小核糖核酸病毒科(Picornaviridae),含有腸道病毒的理化及生物學(xué)特性。病毒呈球形,直徑22nm~30nm,基因組為單鏈RNA,蛋白外殼呈對稱排列的20面體,無包膜。病毒在敏感細(xì)胞胞漿內(nèi)繁殖。EV70的分離培養(yǎng)需用人胚腎細(xì)胞、人胚結(jié)膜組織或HeLa細(xì)胞較難分離。不同流行期病毒基因常有變異,可引發(fā)世界范疇大流行。CA24v也屬微小RNA病毒科,生物學(xué)特性基本同EV70,可用HeLa細(xì)胞等多個傳代細(xì)胞培養(yǎng),易分離。曾引發(fā)亞洲、中南美等地區(qū)大流行。CA24v和EV70適合在溫暖、潮濕的環(huán)境中生存與傳輸,均耐酸、耐乙醚、耐碘苷。75%的酒精是有效的消毒劑。二、流行病學(xué)(一)傳染源患者是本病的重要傳染源,其眼部分泌物及淚液均含有病毒。發(fā)病后2周內(nèi)傳染性最強(qiáng)。該病潛伏期普通為12-48小時,最長可達(dá)6天。(二)傳輸途徑該病重要是通過接觸被患者眼部分泌物污染的手、物品或水等而發(fā)病,部分患者的咽部或糞便中也存在病毒。(三)人群易感性人群普遍易感,各年紀(jì)組均可感染發(fā)病。能夠由不同型別病毒單獨(dú)感染發(fā)病,也可發(fā)生兩種病毒混合感染。病后免疫持久性差,患者病愈后,能夠被不同病毒感染而再次發(fā)病,亦可能在間隔數(shù)年后被同一種病毒再次感染而發(fā)病。(四)流行特性該病曾在世界范疇內(nèi)發(fā)生多次流行。1969年本病首先在西非加納暴發(fā)流行,沿西海岸迅猛蔓延到非洲大部分國家,幾乎同時,印度尼西亞、新加坡、日本、印度等也暴發(fā)流行,很快涉及亞洲大部分國家及歐洲、中東國家,澳州、美洲也有流行報道。1971年我國初次發(fā)生該病的流行,除邊遠(yuǎn)地區(qū)外,遍及涉及香港、臺灣在內(nèi)的全國各省。此后,在80年代和90年代,諸多國家、地區(qū)及我國都有多次地區(qū)性小規(guī)模流行??滤_奇病毒A組24型與腸道病毒70型(EV70)能夠同時或先后引發(fā)流行。該病全年均可發(fā)病,有明顯的季節(jié)特點(diǎn),以夏秋季多見。易在人口稠密、衛(wèi)生條件差的地區(qū)流行,在托幼機(jī)構(gòu)、學(xué)校、工廠公司等人群聚集的地方易發(fā)生暴發(fā)流行。醫(yī)院門診的交叉感染和口腔器械消毒不嚴(yán)格,也可造成傳輸。三、病例的診療和治療各級醫(yī)療機(jī)構(gòu)醫(yī)務(wù)人員可參考《急性出血性結(jié)膜炎診療方案》(附件1),進(jìn)行診療。四、疫情報告出血性結(jié)膜炎是我國傳染病法規(guī)定報告報告的丙類傳染病。各級各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)發(fā)現(xiàn)病例及暴發(fā)疫情時,應(yīng)嚴(yán)格按照《中華人民共和國傳染病法》和《突發(fā)公共衛(wèi)生事件與傳染病疫情監(jiān)測信息報告管理方法》的規(guī)定,進(jìn)行疫情報告。五、流行病學(xué)調(diào)查疾病防止控制機(jī)構(gòu)接到暴發(fā)疫情報告后,可開展流行病學(xué)調(diào)查,重點(diǎn)調(diào)查分析引發(fā)暴發(fā)、流行的危險因素,闡明疾病傳輸?shù)奶攸c(diǎn),以提高疫情控制方法的針對性。六、實(shí)驗(yàn)室檢測發(fā)生急性出血性結(jié)膜炎暴發(fā)或流行時,各地可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件,開展急性出血性結(jié)膜炎病原學(xué)檢測工作,掌握流行毒株的特性。標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)輸和檢測可參考《急性出血性結(jié)膜炎實(shí)驗(yàn)室檢測方案》。七、防止控制方法該病沒有特異性的防止方法。發(fā)生疾病暴發(fā)或流行時,各級醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)在做好病例管理工作的同時,主動開展健康教育,指導(dǎo)公眾做好個人防止,保持良好個人衛(wèi)生習(xí)慣。(一)對病人進(jìn)行規(guī)范治療,避免眼部并發(fā)癥發(fā)生,病人普通不需住院治療。(二)病人病后7~10天內(nèi),應(yīng)盡量居家治療休息,減少公共場合活動。(三)病人接觸過的物品應(yīng)擦拭消毒、煮沸消毒或開水澆燙。病人的洗漱用品要嚴(yán)格做到與其它家庭組員或同居室人員分開,不能混用,避免交叉污染。如接觸病人使用過的物品,應(yīng)充足清潔或消毒手部。(四)發(fā)生疾病暴發(fā)或流行時,學(xué)校和托幼機(jī)構(gòu)要強(qiáng)化晨檢制度,工廠等集體機(jī)構(gòu)要建立健康檢視制度。一旦發(fā)現(xiàn)病人,應(yīng)規(guī)定病人脫離學(xué)習(xí)、工作環(huán)境,居家治療休息。(五)醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)加強(qiáng)預(yù)檢分診和消毒方法的貫徹。醫(yī)務(wù)人員檢治病人后,必須認(rèn)真消毒雙手,未對雙手消毒前,不得再接觸其它病人。診療病人過程中所使用的儀器、物品要擦拭消毒。疾病流行期間,醫(yī)院應(yīng)專辟診室或診臺接診病人,避免交叉感染。(六)加強(qiáng)對游泳池、浴池、剪發(fā)室、旅館的衛(wèi)生管理與監(jiān)督。勸阻患者進(jìn)入公共場合或參加社交活動。暴發(fā)流行期間,有關(guān)管理部門可根據(jù)疫情控制需要,關(guān)閉游泳池、浴池等公共場合。(七)平時要加強(qiáng)健康教育,普及手衛(wèi)生和愛眼護(hù)眼知識,養(yǎng)成勤洗手、不共用毛巾臉盆等個人生活用品的衛(wèi)生習(xí)慣。(八)普通不適宜采用集體滴眼藥等方式,進(jìn)行該病的群體防止。

附件3急性出血性結(jié)膜炎的實(shí)驗(yàn)室檢測一、病毒的分離與鑒定(一)標(biāo)本的采集、運(yùn)輸和保存1.患眼結(jié)膜囊淚液、分泌物是分離CA24v、EV70的重要標(biāo)本。標(biāo)本采集應(yīng)在起病1~3天以內(nèi)。2.用滅菌棉拭子涂擦翻轉(zhuǎn)的上、下瞼結(jié)膜并拭取淚液立刻投入裝有滅菌生理鹽水或Eagle液或0.5%水解乳蛋白Hanks液2mL的小試管中,貼好標(biāo)簽,置冰壺內(nèi)攜至實(shí)驗(yàn)室或低溫(-20℃~-70℃)凍存。(二)病毒分離1.取出標(biāo)本,無菌條件下揉洗棉拭子,壓擠出標(biāo)本液,加10%青霉素、鏈霉素(原濃度青霉素、鏈霉素各1萬u/mL),置4℃作用4h后用作病毒分離。2.細(xì)胞培養(yǎng)用生長單層的HeLa細(xì)胞或人胚肺二倍體細(xì)胞或其它敏感細(xì)胞,生長液為10%牛血清Eagle液,含青霉素100u/mL,鏈霉素100u/mL,pH7.2-7.4。3.傾去細(xì)胞管內(nèi)生長液。每細(xì)胞管接種標(biāo)本液0.2mL吸附10min。每份標(biāo)本液接種4個細(xì)胞管。加維持液(含2%牛血清的Eagle液,PH7.2~7.4)0.8mL/管。余標(biāo)本液置-20℃或-70℃凍存。細(xì)胞對照管4管,每管加維持液1.0mL。

37℃溫箱靜置培養(yǎng)。每日光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞病變。3-4天更換維持液一次,持續(xù)觀察7天。4.細(xì)胞管出現(xiàn)細(xì)胞病變,體現(xiàn)為細(xì)胞圓縮、分散、胞漿內(nèi)顆粒增加,最后細(xì)胞自管壁脫落,為分離陽性成果。細(xì)胞病變達(dá)“+++-++++”時,將細(xì)胞收留凍存于-20℃或-70℃,備TCID50滴定及病毒鑒定。第1代培養(yǎng)見可疑細(xì)胞病變時繼續(xù)傳代,待細(xì)胞病變穩(wěn)定出現(xiàn)后-20℃或-70℃凍存。第1代培養(yǎng)培養(yǎng)7日不出現(xiàn)細(xì)胞病變時持續(xù)盲傳2代,如仍無細(xì)胞病變則分離成果為陰性。(三)病毒TCID50滴定1.陽性細(xì)胞管凍融3次。rpm離心10分鐘,吸取上清,加Eagle液10倍系列稀釋為10-1至10-8病毒液,各加入細(xì)胞板內(nèi),每孔25μl,每稀釋度4孔細(xì)胞。2.每孔加細(xì)胞懸液25μl,同時設(shè)細(xì)胞對照(25μl稀釋液+25μl細(xì)胞懸液),37℃培養(yǎng)7天,觀察細(xì)胞病變。3.按Reed-Muench法計算出分離病毒株的TCID50。(四)病毒鑒定(微量中和實(shí)驗(yàn))1.將CA24v或EV70的原則血清稀釋至20個單位(例如:血清效價為1:160時,進(jìn)行1:8稀釋)。2.在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加入20個單位的原則抗血清25μl和100個

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