乳腺丸號對兔乳腺增生的治療效果及機理研究

乳腺丸號對兔乳腺增生的治療效果及機理研究

乳房增生是乳腺癌最常見的疾病。它的病史很長，有一定的致癌傾向，對大多數(shù)女性的身心健康都有一定的影響。因此，對本病的治療具有重要的臨床價值。筆者研制的乳腺丸Ⅰ號(RXPⅠ)經(jīng)臨床試驗多年,證實對乳腺增生病的療效顯著。為進一步研究RXPⅠ治療乳腺增生病的療效及機理,我們觀察RXPⅠ對兔乳腺增生的治療作用,現(xiàn)報告如下。材料和方法1材料表面1.1飼養(yǎng)雌性日本大耳白兔,未孕,體重(2.0±0.1)kg,4月齡,單籠飼養(yǎng),自動飲水,飼喂顆粒飼料(由哈爾濱醫(yī)科大學附屬二院實驗動物中心提供、飼養(yǎng))。1.2現(xiàn)行為己烯成蟲、黃體酮注射液RXPⅠ主要成分為莪術、三棱、柴胡、郁金、海藻、絲瓜絡及穿地龍?zhí)崛∥?每克含生藥量為14.5g,由哈爾濱醫(yī)科大學附屬二院研制。己烯雌酚注射液:上海通用藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品(批號:050225)。黃體酮注射液:上海通用藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品(批號:040811)。逍遙丸:哈藥集團哈爾濱中藥三廠產(chǎn)品(批號:050355)。2方法2.1認識己烯-白蘇烷的高校乳腺癌生成模型參照文獻將60只兔隨機分為RXPⅠ高、中、低劑量組,逍遙丸組,模型組,正常對照組,共6組,每組10只。前5組采用肌肉注射己烯雌酚0.2mg/(kg·d),連續(xù)25天,之后肌肉注射黃體酮1mg/(kg·d),連續(xù)5天,建立乳腺增生模型。正常對照組兔肌肉注射等量生理鹽水,連續(xù)30天。2.2灌胃量和時間造模完成后,RXPⅠ高、中、低劑量組按0.525g/kg、0.175g/kg、0.058g/kg灌胃,每天2次;逍遙丸組按0.2g/kg灌胃,每天2次;模型組、正常對照組以等劑量蒸餾水灌胃,每天2次。各組連續(xù)灌胃3個月,本實驗給藥劑量根據(jù)人和兔用藥換算關系得出。2.3乳房組織病理學檢測在給藥前、給藥3個月后及停藥3個月后,分3次以利多卡因作局部麻醉,順序切取第1至3對乳房。(1)每對乳房分別用10%甲醛固定,石蠟包埋,切片,HE染色,光鏡下觀察乳腺小葉腺泡數(shù)目、導管腺上皮細胞層數(shù)、結(jié)締組織和毛細血管數(shù)量,結(jié)締組織和毛細血管數(shù)量用占整個乳房組織的百分數(shù)表示。每個乳房取3張切片,每張切片取10個視野,計算平均值;(2)2.5%戊二醛固定,Epon812包埋,超薄切片,醋酸雙氧油和檸檬酸鉛染色,電鏡下觀察乳腺上皮細胞胞質(zhì)內(nèi)線粒體、高爾基體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)總數(shù),每個乳房取3張切片,計算平均值。(3)在切取乳房的同時心臟采血,放射免疫法檢測血清雌激素(E2)和孕激素(P)水平。(4)給藥3個月后,另取第4對乳房,石蠟包埋,切片,免疫組化法測定雌、孕激素受體(ER、PR)表達。每個乳房取3張切片,每張切片取10個視野,計算陽性腺上皮細胞占腺上皮細胞總數(shù)的平均百分比(本實驗病理檢測由哈爾濱醫(yī)科大學附屬二院病理科和哈爾濱醫(yī)科大學電鏡室完成,性激素檢測由哈爾濱醫(yī)科大學附屬二院核醫(yī)學科完成)。2.4統(tǒng)計方法用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計學處理,所有數(shù)據(jù)均以ˉx±sxˉ±s表示。結(jié)果1乳房組織的形態(tài)變化1.1對乳腺癌增殖的影響見表1,圖1。正常對照組乳腺組織鏡檢始終無增生性病變。模型組鏡檢均有典型乳腺增生,表現(xiàn)為乳腺小葉腺泡數(shù)目、導管腺上皮細胞層數(shù)、結(jié)締組織和毛細血管數(shù)量顯著增加(P<0.05)。給藥后RXPⅠ高、中劑量組乳腺增生的3個指標(乳腺小葉腺泡數(shù)、導管腺上皮細胞層數(shù)、結(jié)締組織和毛細血管數(shù)量)較給藥前及模型組均明顯減少,差異有顯著性(P<0.05),與正常對照組比較差異無顯著性(P>0.05),乳腺組織基本趨于正常;RXPⅠ低劑量、逍遙丸組鏡檢均有乳腺增生。RXPⅠ高、中劑量組停藥3個月后上述3個指標與給藥3個月時比較無明顯改變(P>0.05,數(shù)據(jù)略)。1.2對肌皮質(zhì)細胞周的影響見表2,圖2。正常對照組腺上皮呈單層立方形,排列規(guī)整,基底膜均勻。模型組腺細胞呈復層、鱗狀排列,細胞極性消失,可見乳頭狀突起;胞質(zhì)內(nèi)線粒體數(shù)量增多,并有豐富的高爾基體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),細胞核周可見豐富的糖元顆粒;肌上皮細胞核周可見大量微絲結(jié)構(gòu)。RXPⅠ高、中劑量組給藥后腺上皮呈單層高柱狀排列,核上移,導管腺腔緊縮;與給藥前及模型組比較,線粒體、高爾基體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)總數(shù)顯著減少(P<0.05,);部分增生細胞凋亡。RXPⅠ高、中劑量組停藥3個月后繼續(xù)保持治療后效果,細胞器總數(shù)與給藥3個月后比較差異無顯著性(P>0.05)。RXPⅠ低劑量、逍遙丸組治療效果不顯著。2對大鼠血清na見表3。給藥前各組血清E2含量均顯著高于正常對照組,P含量均顯著低于正常對照組(均P<0.01)。給藥3個月后,RXPⅠ高、中劑量組,逍遙丸組,E2含量均明顯低于模型組,P含量均明顯高于模型組(P<0.01),與正常對照組比較差異無顯著性(P>0.05)。停藥3個月后RXPⅠ高、中劑量組及逍遙丸組血清E2、P含量表現(xiàn)平穩(wěn),無反彈,與給藥3個月后比較差異無顯著性(P>0.05)。RXPⅠ低劑量組E2、P含量均無顯著變化。3各給藥后tbp高、中劑量對er及pr含量的影響見表4,圖3。正常對照組兔乳腺組織ER含量明顯低于模型組(P<0.05),PR含量變化不明顯。給藥后RXPⅠ高、中劑量組ER含量降低,和模型組相比差異有顯著性(P<0.05),和正常對照組相比差異無顯著性(P>0.05);PR含量變化不明顯(P>0.05)。RXPⅠ低劑量、逍遙丸組ER、PR含量和模型組相比差異無顯著性(P>0.05)。信息調(diào)節(jié)作用現(xiàn)代醫(yī)學認為乳腺增生病系內(nèi)分泌障礙性疾病,其病因主要為下丘腦-垂體-卵巢內(nèi)分泌軸平衡失調(diào);E2分泌增加,P分泌相對減少及E2、P受體的質(zhì)和量的異常,使乳腺實質(zhì)增生過度和復舊不全,是其發(fā)病的關鍵所在。中醫(yī)學把乳腺增生病歸于“乳癖”范疇,認為其病因多由婦人不知調(diào)養(yǎng),有傷沖任,且忿怒所逆,郁悶所遏,厚味所釀,以致厥陰之氣不行,則氣壅不散,結(jié)聚乳間所致?，F(xiàn)代醫(yī)學可用于乳腺增生病治療的藥物較少,為此我們研制了乳腺丸Ⅰ號并在臨床上經(jīng)多年應用,療效顯著。本研究應用RXPⅠ對兔乳腺增生模型灌胃給藥3個月,并進行了6個月的監(jiān)測,共設立RXPⅠ給藥前、RXPⅠ給藥3個月后及RXPⅠ停藥3個月后3個時間觀測點,通過病理切片證實,高、中劑量RXPⅠ可以逆轉(zhuǎn)由乳腺增生造成的乳腺組織形態(tài)學改變,使其趨于正常,其中各種細胞器的減少表明RXPⅠ減慢了腺細胞新陳代謝并抑制其增殖分裂,部分增生細胞凋亡表明RXPⅠ可以限制其生長并最終清除增生細胞。血清性激素水平檢測證實,高、中劑量RXPⅠ可以明顯降低體內(nèi)E2含量、升高P含量,消除乳腺增生的始動因素。給藥結(jié)束后的3個月中,RXPⅠ高、中劑量組各觀測指標沒有顯著變化,表明其療效穩(wěn)定,無反彈。低劑量RXPⅠ和逍遙丸治療對乳腺增生的形態(tài)學改變不明顯,但逍遙丸可以降低體內(nèi)E2含量,升高P水平。從中醫(yī)學角度看,RXPⅠ的中藥組分切中“乳癖”病機,其中莪術、三棱長于破血行氣、消積止痛,兩者相需為用,一可破氣中之血,一可行血中之氣,使功效倍增;柴胡、郁金可疏肝解郁,消疾散結(jié),理氣活血以助莪術、三棱之力;海藻、絲瓜絡擅長軟堅化痰,散結(jié)消腫,故能使乳腺增生造成的乳腺組織形態(tài)學改變趨于正常。從現(xiàn)代醫(yī)學角度看,RXPⅠ對下丘腦-垂體-卵巢內(nèi)分泌軸具有明顯的調(diào)節(jié)作用,這可能與其組分中的穿地龍?zhí)崛∥锩芮邢嚓P。穿地龍?zhí)崛∥镏泻惺硎氃磉霸?diosgenin)等多種甾體皂甙元,是合成多種避孕藥及甾體激素的重要原料。薯蕷皂甙元與E2具有同源結(jié)構(gòu),因此我們推測薯蕷皂甙元可能發(fā)揮負反饋作用,抑制下丘腦促性腺激素釋放激素(GnRH)的釋放,從而抑制E2的合成,使體內(nèi)過高的E2含量恢復正常。近年有學者認為乳腺上皮細胞中ER的高表達也是乳腺增生病的發(fā)病因素之一。雌激素通過與其受體ER結(jié)合,可以刺激ER和Ki67(腫瘤增殖抗原)雙陽性的乳腺上皮細胞產(chǎn)生細胞生長因子,通過旁分泌途徑誘導臨近的ER陰性細胞有絲分裂,使乳腺上皮細胞的單純增生逐步向不典型增生演變,隨著雙陽性上皮細胞比例的增加,細胞增殖會呈現(xiàn)更強的自主性和失控性,乳癌的發(fā)病危險也隨之加大。本實驗觀察到RXPⅠ可下調(diào)兔乳腺增生中ER的過高表達,表明RXPⅠ不僅可以降低體內(nèi)雌激