甘油和甘露醇溶液對白光狗魚精子活力的影響

甘油和甘露醇溶液對白光狗魚精子活力的影響

eso鹿犬是國內(nèi)外重要的亞冷水性經(jīng)濟魚類之一。在中國，白色狗只分布在新疆的額爾齊斯河系統(tǒng)中。近年來白斑狗魚的天然資源受水利工程建設(shè)、過度捕撈等因素的影響，出現(xiàn)了衰減的趨勢。為了保護該魚的自然資源和滿足人工養(yǎng)殖的需要，研究了不同濃度下甘油和甘露醇溶液對白斑狗魚精子活力影響，旨在為白斑狗魚人工繁殖時精子稀釋液和保存液的配制提供科學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1精液的采集白斑狗魚采自新疆福?？h，體重430～1600g，性腺發(fā)育到Ⅴ期。精液采集時先擦干親魚體表水分，輕擠魚腹部獲取精液。精液應(yīng)呈乳白色、黏稠，無尿、血、糞便污染。1.2溶液滲透率濃度的確定甘油和甘露醇均為分析純。用雙蒸水配制成不同滲透壓濃度的試劑。將甘油和甘露醇的溶液滲透壓濃度初步設(shè)為0、200、400、600和800kPa。根據(jù)試驗當(dāng)天的實際溫度（12.4℃）得出校正后的滲透壓分別為0、205、411、616和821kPa，為5個試驗組。1.3精子在不同水溶液中的生長載玻片上加一滴試劑，用潔凈牙簽挑取少許精液與其混合，即刻移至10×40倍顯微鏡下，依次完成對同尾親魚精子在不同滲透壓的同種溶液中的活動觀測。觀察以一個視野為準(zhǔn)。當(dāng)精液與試劑相混時，立即用秒表開始計時。精子的快速運動時間（FT）和壽命時間（LT）的確定參照嚴(yán)安生的方法。2結(jié)果2.1甘油溶液初始滲透在0～411kPa甘油溶液中，白斑狗魚精子的FT是隨著甘油溶液滲透壓的升高而增大的，205kPa組和411kPa組FT分別高于0kPa組FT的44.6%和95.3%。當(dāng)甘油溶液滲透壓在411kPa和616kPa時，白斑狗魚精子的FT趨于平穩(wěn)，616kPa組FT僅比411kPa組FT高出2.6%，此時白斑狗魚精子的FT達到最高值85.01±5.09s。在甘油溶液滲透壓為821kPa時，白斑狗魚精子的FT逐漸減小至42.40±12.42s（表1）。白斑狗魚精子的LT隨甘油滲透壓變化的情況與FT隨著甘油滲透壓變化的情況基本是一致的。隨著甘油溶液滲透壓的升高，白斑狗魚精子的LT也呈現(xiàn)出升高、走平、下降的規(guī)律。205kPa組、411kPa組和616kPa組的LT依次高于0kPa組LT28%、56.8%和79.8%。當(dāng)甘油溶液滲透壓達到411kPa和616kPa時，白斑狗魚精子的LT達到最高值116.12±7.39s。821kPa組LT低于616kPa組LT（表2）。2.2價值生長和各類過程對白蛋白狗魚精子ft和ft的影響在0～411kPa甘露醇溶液中，白斑狗魚精子的FT是隨著甘露醇溶液滲透壓的升高而增大，205kPa組和411kPa組FT分別高于0kPa組FT23.5%和72.0%。當(dāng)甘露醇溶液滲透壓在411～616kPa時，白斑狗魚精子的FT趨于平穩(wěn)，616kPa組FT僅比411kPa組FT下降3.2%，此時白斑狗魚精子的FT達到最高值75.59±3.67s。以后隨著甘露醇溶液滲透壓升高，白斑狗魚精子的FT逐漸減小至33.23±10.60s（表3）。白斑狗魚精子的LT隨甘露醇滲透壓變化的情況與FT隨著甘露醇滲透壓變化的情況基本是一致的。隨著甘露醇滲透壓的升高，白斑狗魚精子的LT也呈現(xiàn)出升高、走平、下降的規(guī)律。205kPa組LT為77.93±4.72略低于84.33±31.94的0kPa組，t檢驗顯示差異不顯著。411kPa組和616kPa組的LT分別高于0kPa組23.29%和42.69%。當(dāng)甘露醇溶液滲透壓達到411～616kPa時，白斑狗魚精子的LT達到最高值120.33±17.27s,821kPa組LT比616kPa組低60.9%（表4）。3討論3.1精子活動的影響魚類精子在精巢或精液里是不活動的，然而卻具有很強的潛在運動能力。當(dāng)排出精子時，精液會進入水環(huán)境，這時精子就會瞬間活動起來。這說明水中有激活精子活動的因素，精子在精巢或精液中有抑制精子活動的因素。Moriswa等認為精漿中比血漿高出多倍的鉀離子時抑制鮭科魚類精子激活的因素，并不是滲透壓。3.2滲流對海膽的影響單糖物質(zhì)在維持精子活動中的作用是十分明顯的，葡萄糖、果糖雖同為單糖，但他們對延長精子活力的作用已不是完全由滲透壓一個因素所決定的，而是與溶質(zhì)的性質(zhì)密切相關(guān)。蘇德學(xué)發(fā)現(xiàn)適宜濃度的葡萄糖可以明顯延長白斑狗魚精子活動時間，最適滲透壓在339.8kPa左右。試驗研究發(fā)現(xiàn)甘露醇最適滲透壓在411～616kPa，與上述試驗最適滲透壓略有差異。雖然甘露醇和葡萄糖同屬單糖類物質(zhì)，但因具體物質(zhì)的不同，從而導(dǎo)致最適滲透壓略有不同。另外魚類的品種及外部環(huán)境等也會導(dǎo)致滲透壓的不同。因此，在實際生產(chǎn)過程中要根據(jù)不同品種的魚類選用適宜濃度的溶液作為魚類精子的稀釋液和保存液，才能有效的提高魚類精子活力。3.3抗精子“溫度休克”甘油是魚類精液冷凍保存的有效抗凍保護劑。復(fù)方甘油抗凍劑可以有效減少低溫對精子的凍傷，抗凍劑中的卵黃與甘油配伍可發(fā)揮膜內(nèi)、外協(xié)同保護作用，卵黃具有抗精子“溫度休克”的作用，可提高復(fù)溫后精子存活率和致孕率。研究發(fā)現(xiàn)，甘油溶液在濃度滲透壓為0～411kPa時，白斑狗