氣血并治方及其配伍藥對對高脂血癥大鼠脂質代謝、血小板聚集性及血小板活表達率的影響

氣血并治方及其配伍藥對對高脂血癥大鼠脂質代謝、血小板聚集性及血小板活表達率的影響

“藥對”是恢復復合物的基礎。以醫(yī)學實例為出發(fā)點，對闡明中醫(yī)的理、法、方法，以及中藥聯合用藥的規(guī)律具有重要意義。氣血并治方由傳統名方血府逐瘀湯化裁而來,是臨床用于治療動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)的有效方藥。在前期藥理實驗證明其有抑制炎癥因子作用的基礎上,進一步觀察氣血并治方及方中配伍藥對對實驗大鼠血脂、血小板活化、血小板黏附聚集的影響,了解它們的作用強度和作用環(huán)節(jié)的差異。材料和方法1.實驗材料1.1對胡蘿卜干醇提物的提取氣血并治方醇提取物(由川芎、赤芍、枳殼、柴胡等組成),提取率為22.1%,活血藥對川芎-赤芍醇提物,提取率為22.3%;理氣藥對柴胡-枳殼醇提物,提取率為26.6%;活血理氣藥對柴胡-赤芍醇提物,提取率為32.0%。以上制劑由中國科學院大連化學物理研究所制備。血脂康膠囊(主要成分紅曲,每粒含辛伐他汀2.5mg),由北京北大維信生物科技有限公司生產,批號:20010302。1.2動物Wistar大鼠,60只,雌雄各半,體重180~220g,由中國科學院遺傳研究所實驗動物中心提供,合格號:京動字(1999)036。1.3脂質分子part-轉甲基co認同lipproin,ldl-c膽固醇(cholesterol,TC),批號:010116;甘油三酯(triglyceride,TG),批號:010126,由北京中生生物工程高技術公司生產;高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein,HDL-C),批號:010212;低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein,LDL-C),批號:010215,由北京利德曼生化技術有限公司生產;脂蛋白[lipoprotein(α),LP(α)]試劑盒,批號:0002601,上海明華體外診斷試劑有限公司生產;腎上腺素(adrenalinehydrochloride)注射液,批號:20010103,北京永康制藥廠生產;膠原(collagen,COL),批號:702L01,美國BiopoolInternationgal公司生產;血小板活化CD62p一抗(rabbitanti-rat),批號:MO63261,二抗(anti-rabbit-FITC),批號:MO48707,由美國BD-Pharminugen公司生產。2.實驗方法2.1動物分組、給藥與注射動物飼養(yǎng)1周后,隨機分組,每組10只,除空白組外,其余各組同時給予高脂飼料(高脂飼料:4%膽固醇、10%豬油、0.2%甲基硫氧嘧啶、0.5%膽鹽、85%普通飼料),喂高脂飼料7d后,實驗所用動物分為實驗藥物組、陽性對照組、空白組和模型組。實驗藥物組:給予4個不同藥物的醇提取物,用自來水稀釋相應濃度,灌胃給藥。共分為(1)空白組:10ml/kg生理鹽水,喂普通飼料。(2)模型組:10ml/kg生理鹽水;(3)陽性對照組:血脂康膠囊0.108g/kg;(4)全方醇提取物組(全方組):6.3g(生藥)/kg;(5)川芎、赤芍醇提取物組(川芎-赤芍組):2.7g(生藥)/kg;(6)柴胡、赤芍醇提取物組(柴胡-赤芍組):1.79g(生藥)/kg;(7)柴胡、枳殼醇提取物組(柴胡-枳殼組):1.35g(生藥)/kg。第2周開始給藥,連續(xù)2周。除空白組外,其余各組繼續(xù)喂食高脂飼料,空白組、模型組灌胃等量水。末次給藥后,禁食不禁水12h,下午4時,對各組動物(除空白組外)均腹腔注射1mg/kg的腎上腺素生理鹽水溶液。第二天,再次給予各組動物(除空白組外)注射腎上腺素生理鹽水溶液。1h后麻醉,腹主動脈取血,進行血脂、血小板聚集、血小板活化指標的檢測。2.2血小板聚集檢測TC,CHOD-PAP方法;TG,GPO-PAP方法;HDL-C、LDL-C,直接測定法;LP(α),比濁法;以上血脂測定用全自動生化儀,型號:RX-2000,美國TECHNICON公司生產。血小板聚集性(plateletagglutination,PAGT),采用比濁法,誘導劑為膠原(1.9mg/ml),儀器為LBY-NJ2型血小板聚集儀,北京普利生公司生產。血小板活化表達率(CD62p)采用流式細胞檢測法,儀器為ELITE型,美國COUITER公司生產。2.3統計處理對大鼠血清生化指標的影響結果見表1,大鼠喂高脂飼料后,血清膽固醇含量顯著升高,同時LDL-C、LP(α)含量也顯著升高,模型組與空白組比較有明顯差異(P<0.01)。各給藥組對TC均有顯著降低作用,并對LDL-C也有顯著降低作用,與模型組比較有明顯差異(P<0.05和P<0.01)。全方組對TG有顯著降低作用,和模型組比較有明顯差異(P<0.05);由于動物模型為外源性高脂飼料喂養(yǎng),血清膽固醇升高的同時,HDL-C也顯著升高,模型組和空白組比較有明顯差異(P<0.05),柴胡-枳殼組能降低HDL-C含量,與模型組比較差異顯著(P<0.05)。全方組、柴胡-赤芍組、柴胡-枳殼組對LP(α)均有顯著降低作用,與模型組比較有明顯差異(P<0.05)。結果見表2。全方組、川芎-赤芍組對大鼠血小板聚集性有顯著抑制作用,和模型組比較有明顯差異(P<0.05)。大鼠注射腎上腺素后血小板活化程度顯著升高,模型組與空白組比較差異顯著。柴胡-赤芍組和柴胡-枳殼組對大鼠血小板活化陽性表達率均有顯著抑制作用,和模型組比較有明顯差異(P<0.05)。各組對血小板平均熒光強度均無顯著作用(P>0.01)。血小板膜活性氧合酶活性檢測研究及闡明復方配伍規(guī)律是方劑研究中的關鍵環(huán)節(jié),藥對研究是中藥復方研究的重要方法之一。中藥復方是中醫(yī)治病優(yōu)越性的體現,中藥單味藥向復方演變的臨床實踐過程中,藥對配伍起到了重要作用,藥對可以增強藥物的治療作用及療效,也可擴大藥物臨床治療的范圍,并奠定了中藥方劑組成的基礎。氣血并治方是由活血化瘀名方血府逐瘀湯化裁而來,其中就包括川芎與赤芍、柴胡與枳殼等藥對。本實驗將高脂飲食與應激反應結合制造動物高血脂血瘀模型,模擬動脈粥樣硬化初期病變,以脂質代謝、血小板功能等為指標,觀察氣血并治方全方及其配伍藥對作用強度和作用環(huán)節(jié)的差異。高脂血癥是機體發(fā)生動脈粥樣硬化的基本因素。隨著社會競爭日益激烈,與應激有關疾病逐漸增多。給大鼠注射外源性腎上腺素,引起動物應激性反應,體內血管明顯收縮,使紅細胞聚集性增強,血液黏度升高,造成應激性的血瘀證。高脂血癥是痰濁的生化物質基礎,由高脂所化生的痰濁,使血液黏稠性增高,血漿流動性降低、聚集性增高,最終導致內皮細胞損傷。血小板的活化可促進動脈血管壁粥樣硬化和血栓形成的病理過程,血小板膜表面具有多種整合素(integrin)家族由糖蛋白構成的受體,其中CD62p(P選擇素)主要存在于血小板的α顆粒膜上。在正常血液循環(huán)過程中,血小板處于靜止狀態(tài),而發(fā)生血管壁損傷,血小板就會被激活,并通過其表面α顆粒(膜糖蛋白)迅速與血小板質膜融合在血小板的膜面上產生大量的表達。動脈內膜的脂質浸潤已被認為是AS形成的主要原因,高脂血癥時往往損傷內皮細胞,改變了內皮細胞的部分正常功能,促使血小板活化、粘附聚集和釋放。膽固醇水平升高是動脈硬化病變的主要危險因素,而低密度脂蛋白(LDL)升高被認為是導致動脈硬化的獨立危險因素。LP(α)是獨立的一類脂蛋白,與動脈粥樣硬化有明顯的相關性,多數學者一致公認LP(α)是冠心病的一個獨立危險因素。氣血并治方中川芎、赤芍活血行氣,散瘀止痛;柴胡、枳殼舒肝解郁、理氣寬中。全方共奏活血化瘀、理氣止痛之功效。其醇提取物主要活性組分為黃酮類、總苷類、有機酸類等,現代藥理研究表明芍藥苷有擴張血管壁、增加冠脈血流量以及能抑制血小板聚集、增加血小板cAMP水平等作用。而柴胡皂苷具有抗炎和促進血漿膽固醇代謝周轉作用。川芎-赤芍藥對是活血藥,其主要活性成分有苷類(赤芍)、有機酸(川芎和赤芍);柴胡-枳殼藥對是理氣藥,其主要活性成分有黃酮類(枳殼、柴胡)、柴胡皂苷(柴胡);柴胡-赤芍藥對是理氣活血藥對,活性成分是黃酮類(主要來于柴胡)、柴胡皂苷(柴胡)、苷類、有機酸(赤芍)。實驗表明全方組及其配伍藥對對TC均有顯著降低作用,并對動物LDL-C也有顯著降低作用。全方組對TG有顯著降低作用。全方組、柴胡-枳殼組、柴胡-赤芍組對LP(α)有顯著降低作用。全方組和川芎-赤芍組對血小板聚集性有顯著抑制作用;而柴胡-赤芍組和柴胡-枳殼組對血小板活化陽性表達率具顯著抑制作用。從上可以看出,全方在作用強度方面有一定優(yōu)勢,在降脂和抗血小板活化、