基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控SOP

室內(nèi)質(zhì)量控制原則操作程序（SOP—22）1目的：理解并控制實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的精密度的變化2合用范疇：核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)，使用Line—Gene基因擴(kuò)增儀實(shí)驗(yàn)室3操作人:*＊＊*4操作：4.1自制室內(nèi)質(zhì)控品：自制室內(nèi)質(zhì)控品來(lái)自臨床收集的已知HBV陽(yáng)性血清大概（1×104—6拷貝），每收到一份凍存于—20℃.收集到約35ml時(shí)，取出樣品，置室溫復(fù)融。將各管倒入無(wú)菌帶蓋的小三角燒瓶中充足混勻.將以上的混合血清，以每管120ul,分裝于0.5ml離心管內(nèi)，分裝若干管.剩余血清根據(jù)廢物解決及生物防護(hù)操作程序解決。將上述取約23管裝一小袋，其它20管裝一小袋。共分成若干小代。23管一小袋置于-20℃冰箱，其它置于-70℃超低溫冰箱保存,用完一小袋，就從—70℃轉(zhuǎn)移1小袋到—20℃冰箱備用.4。2基線(xiàn)測(cè)定及計(jì)算RCV:在準(zhǔn)備開(kāi)展質(zhì)控工作當(dāng)月的第一天取上述23管中的三管復(fù)溶，隨病人標(biāo)本一起測(cè)定，第二天取兩管復(fù)溶,隨病人標(biāo)本一起測(cè)定，后來(lái)每天隨病人標(biāo)本測(cè)定一管,20天后計(jì)算各項(xiàng)目的測(cè)定成果的_x、s、cv此處的cv即Rcv。RCV的計(jì)算公式：其中_x為RCV測(cè)定中所得23份成果的均值。Σ表達(dá)總和。n表達(dá)成果的份數(shù),n-1為自由度。4。3繪制RCV圖計(jì)算_x+2S、_x—2S、_x+3S、_x—3S并在質(zhì)控圖的縱坐標(biāo)上標(biāo)出_x、_x±2S、_x±3S的位置,并將其具體值標(biāo)在左側(cè)標(biāo)尺上。b)用紅線(xiàn)筆畫(huà)出_x±2S線(xiàn)，用藍(lán)筆畫(huà)出_x±3S線(xiàn)，即成一張“空?qǐng)D”。還應(yīng)填齊圖紙上方的各項(xiàng)，如：實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目、質(zhì)控品來(lái)源及批號(hào)、起止日期、重要儀器等,還應(yīng)填上RCV中測(cè)定所得的X、S、CV，測(cè)定過(guò)程中的特殊狀況,（附圖2)。4。4室內(nèi)質(zhì)控:a）根據(jù)上述質(zhì)控圖,取一小袋上述血清作下月及后來(lái)的質(zhì)控，每次實(shí)驗(yàn)時(shí)隨病標(biāo)本測(cè)定一管。b）在圖紙下方“日期”的上一行對(duì)應(yīng)的日期欄內(nèi)將“測(cè)定值”按原始統(tǒng)計(jì)填入,邊填寫(xiě)邊核對(duì)。注意數(shù)據(jù)次序應(yīng)嚴(yán)格按照實(shí)際操狀況，不得顛倒。未做測(cè)定的天數(shù)在圖上留出空格，由于這樣能夠真實(shí)反映狀況,便于分析誤差因素.c)畫(huà)出每個(gè)檢測(cè)值所對(duì)應(yīng)的圖點(diǎn)。4.5室內(nèi)質(zhì)控圖的使用辦法：4。5.1描點(diǎn)圖中_x線(xiàn)為靶線(xiàn),_x±2s為警告線(xiàn)，_x±3s為失控線(xiàn)。對(duì)于同一批號(hào)的質(zhì)控血清不管使用幾個(gè)月，其質(zhì)控圖均不變化.只要將圖紙上方的“起止日期”項(xiàng)填入每月的實(shí)際起止日期即可。每天將該批號(hào)質(zhì)控血清按有關(guān)規(guī)定程序復(fù)融隨同病人的標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)。將“日期"、“測(cè)定值”和“操作者”如實(shí)統(tǒng)計(jì)在圖下方的對(duì)應(yīng)位置,并按前面的辦法畫(huà)出圖上的對(duì)應(yīng)點(diǎn),用直線(xiàn)將該點(diǎn)與前一天的點(diǎn)連接起來(lái)。月底計(jì)算當(dāng)月全部質(zhì)控血清檢測(cè)成果的_x、s、cv，并進(jìn)行圖形分析和小結(jié)，將質(zhì)量控制圖存入質(zhì)控資料檔案.4。5.2圖形分析：失控的判斷原則：將質(zhì)控品隨日常標(biāo)本共同解決并將質(zhì)控品成果如實(shí)統(tǒng)計(jì)做好的RCV圖中描點(diǎn).a）若成果在_x±2S線(xiàn)內(nèi)，報(bào)告可發(fā)出。b)若成果在_x±2S線(xiàn)外和_x±3S線(xiàn)以?xún)?nèi)或出現(xiàn)持續(xù)6點(diǎn)以上在一側(cè)等規(guī)律變化，應(yīng)向有關(guān)負(fù)責(zé)人反映并主動(dòng)尋找因素，但當(dāng)天檢測(cè)成果能夠發(fā)出.若成果在_x+3S線(xiàn)以外,則為失控，應(yīng)立刻報(bào)告有關(guān)負(fù)責(zé)人訊速查找因素。并將失控狀況、必要時(shí)復(fù)測(cè)標(biāo)本，然后方可發(fā)報(bào)告.并將失控狀況、查找過(guò)程及解決成果等具體統(tǒng)計(jì)登記。4。5。3通過(guò)觀(guān)察圖形的規(guī)律變化進(jìn)行誤差分析,消除誤差來(lái)源曲線(xiàn)漂移:提示有系統(tǒng)誤差，精確度發(fā)生了一次性的向上或向下變化。這種變化往往是由一種新的狀況引發(fā)的。如更換不同批號(hào)的試劑，啟用新批號(hào)的質(zhì)控血清、操作規(guī)程人員的變換等。在找因素時(shí)應(yīng)重點(diǎn)注意“漂移"前的發(fā)生了哪些變動(dòng)性的因素。趨勢(shì)性的變化：向下或向上的趨勢(shì)表明精確度發(fā)生了漸漸的變化。這種變化往往是由于一種逐步變化的因素造成的.如質(zhì)控血清的降解，試劑效價(jià)的減少等。持續(xù)多點(diǎn)分布在靶值同一則:現(xiàn)在，普通認(rèn)為質(zhì)控血清的檢測(cè)成果持續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一則,則應(yīng)快速查找因素,爭(zhēng)取盡快使之回復(fù)圍繞在靶值隨機(jī)分布的狀態(tài)。由于按照統(tǒng)計(jì)學(xué)的原理,由純隨機(jī)誤差狀況造成的這種可能性很小.持續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一則的可能性不大于1。5％。因此凡出現(xiàn)持續(xù)6天以上出現(xiàn)在靶值同一則者均可能性存在非隨機(jī)誤差因素。如果與靶值偏離不大，不會(huì)給臨床使用帶來(lái)太大影響時(shí),普通化驗(yàn)報(bào)告能夠照常填發(fā)。其它規(guī)律性變化:（周期性等）.4。5。4通過(guò)圖形的資料對(duì)比進(jìn)行誤差分析，消除誤差來(lái)源a）每月的月底將該月的全部質(zhì)控血清檢測(cè)成果的_x和s與該測(cè)定的_x和s進(jìn)行比較.如_x發(fā)生了變化，闡明精確度發(fā)生了變化提示有非隨機(jī)誤差存在。如果當(dāng)月s不同則表明檢測(cè)的精密度發(fā)生了變化。b)將使用同一批號(hào)的質(zhì)控血清的CT值的_x和s按月份列出。如果_x逐月上升,則應(yīng)考慮保存不當(dāng)造成的試劑效價(jià)減少或質(zhì)控血清本身出現(xiàn)降解。如果各月份_x基本一致而s逐月加大,則重要提示常規(guī)工作的精密度下降,應(yīng)重點(diǎn)從操作、管理上找因素。c）在數(shù)年中，把每月的CV和失控規(guī)律列成表,可用作檢測(cè)質(zhì)量的歷史回想和趨勢(shì)性分析。4.6失控后的解決:4。6.1分析原始數(shù)據(jù)及初步預(yù)計(jì)失控因素：發(fā)生失控時(shí)，對(duì)同批實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的全部原始數(shù)據(jù)結(jié)合近期室內(nèi)質(zhì)控圖和平時(shí)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行分析，預(yù)計(jì)失控因素的大致方向。4。6。2對(duì)具體檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行回想性分析，分析有無(wú)特殊狀況出現(xiàn)。4。6.3通過(guò)選擇性復(fù)查進(jìn)一步分析判斷失控因素，決定解決方法.選擇性復(fù)查時(shí)應(yīng)涉及下述樣品,方便一次性找出因素，及時(shí)發(fā)出報(bào)告：a)失控時(shí)使用的質(zhì)控血清。b）重新打開(kāi)一瓶相似批號(hào)的質(zhì)控血清.c)失控時(shí)使用的原則品。d)重新打開(kāi)一瓶相似批號(hào)的原則品。少數(shù)幾個(gè)病人標(biāo)本（最佳選擇已知病情近期曾做過(guò)該項(xiàng)目的病人標(biāo)本)通過(guò)對(duì)復(fù)查成果的分析,找到失控因素,制訂對(duì)應(yīng)的解決方案，使實(shí)驗(yàn)室重新在控并將失控狀況、因素和解決方案在檔案中具體統(tǒng)計(jì)(見(jiàn)表22）.4.7該程序的變動(dòng)程序：本原則操作程序的改動(dòng),可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員同意簽字：檢查科主任、室技術(shù)負(fù)責(zé)人。起草人批準(zhǔn)人生效日期年月日表22臨床基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室PCR實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制失控因素及糾正方法統(tǒng)計(jì)日期檢測(cè)項(xiàng)目操作人失控現(xiàn)象因素分析糾正成果審核人附圖2室內(nèi)質(zhì)控統(tǒng)計(jì)圖檢測(cè)項(xiàng)目：試劑廠(chǎng)家：試劑批號(hào):重要儀器質(zhì)控品來(lái)源_X:SD：