2021年度選修一必背知識點(diǎn)

選修1

1、在果酒、果醋制作過程中，所用重要菌種分別是：酵母菌、醋酸菌。

2、在果酒、果醋、制作過程中，它們所需溫度分別是1作25℃、30~35℃

3、酵母菌是高中階段明星生物，必修一：關(guān)于真核生物原核生物問題，酵母菌

是單細(xì)胞真核生物:關(guān)于酶本質(zhì)摸索中，酶本質(zhì)是蛋白質(zhì)或RNA；在探究酵母菌

呼吸方式中，酵母菌異化作用方式是兼性厭氧菌。

必修三：培養(yǎng)液中酵母菌計(jì)數(shù)可以采用抽樣檢測辦法,用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)酵母

菌可用活菌計(jì)數(shù)法（菌落）計(jì)數(shù)。

選修一：運(yùn)用酵母菌制作果酒反映式是：

C6Hl2。6-2CzH50H（酒精）+2CO2,固定酵母細(xì)胞方式是包

埋法。

4、微生物培養(yǎng)基由于加瓊脂而分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基等。

5、培養(yǎng)基化學(xué)成分涉及水、無機(jī)鹽、碳源、氮源四類營養(yǎng)成分。

6、無菌技術(shù)涉及：（1）對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者衣著和手進(jìn)行清潔和消毒;

（2）將培養(yǎng)器皿、接種用品和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；

（3）為避免周邊微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近旁進(jìn)行；

7、制備牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基環(huán)節(jié)：計(jì)算稱量f溶化（調(diào)PH），滅菌一倒平

板）

8、常用4種消毒辦法：煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線消毒法、酒精進(jìn)行消

毒）

9、常用3種滅菌辦法：（灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法）

10、高壓蒸汽滅菌法規(guī)定氣壓升至（100）kPa,溫度為（121）℃,并維持（15?

30）min才干達(dá)到滅菌規(guī)定。

11、微生物接種最慣用辦法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。

12、在微生物培養(yǎng)中，培養(yǎng)基有“三倒”，詳細(xì)是倒放、倒拿、倒培養(yǎng)。

13、平板劃線法接種微生物過程中最后灼燒接種環(huán)目是防止細(xì)菌污染環(huán)境和操

作者;稀釋涂布平板接種微生物過程中移液管吹吸三次目是：使菌種均勻混合。

14、實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選原理：當(dāng)培養(yǎng)基中唯一氮源為尿素時(shí)，就可以分離出

分解尿素細(xì)菌。培養(yǎng)基中唯一碳源為纖維素時(shí)，可以分離出分解纖維素微生物:

15、微生物計(jì)數(shù)常有兩種辦法：活菌計(jì)數(shù)法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)?；罹?jì)數(shù)法普

通選取菌落數(shù)在亞迪平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，在同一稀釋度下，至少對3個(gè)平板進(jìn)行

重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值。

16、寫出每克樣品中菌株數(shù)公式？

17、纖維素酶由微生物分泌一種復(fù)合酶，涉及C1酶、Cx酶和葡萄糖昔酶,剛

果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物,當(dāng)纖維素水解后培養(yǎng)基中浮現(xiàn)以菌落為中心

透明圈。

18、寫出植物組織培養(yǎng)基本流程：離體器官、組織或細(xì)胞一愈傷組織-根芽一

植物體

19、生長素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化核心激素。

20、植物組織培養(yǎng)最慣用培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基。

21、菊花組織培養(yǎng)材料普通選取未開花植物莖上部新萌生側(cè)枝:

22、果膠酶是分解果膠一類酶總稱，涉及多半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、果膠

酯酶等三種。

23、舉例闡明酶活性測定辦法有兩種辦法？

(1)相對直接測定辦法如單位時(shí)間內(nèi)、單位體積中反映物減少量或增長量；(2)

間接測定辦法如產(chǎn)生果汁量、果汁澄清度、果汁透光率

24、高中生物實(shí)驗(yàn)多次用到紅細(xì)胞，人紅細(xì)胞來源于造血干細(xì)胞:蛙紅細(xì)胞進(jìn)

行分裂方式是無絲分裂:動(dòng)物細(xì)胞膜制備所用細(xì)胞材料是哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞:

DNA粗提取所用血液是雞血紅細(xì)胞；血紅蛋白提取材料是哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞。

25、在凝膠柱中分離蛋白質(zhì)有效辦法叫凝膠魚譜法，分子量大在凝膠柱中運(yùn)動(dòng)

速度快，運(yùn)動(dòng)途徑較短,先從凝膠柱洗脫出來。

26、許多重要生物大分子，如多肽、核酸等還可以用電泳辦法分開，依照待分

離樣品中分子帶電性質(zhì)差別以及分子自身大小,形狀不同,使帶電分子產(chǎn)生不

同遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子分離。在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，

只依照分子帶電荷大小就可待分離物質(zhì)分開。

27、蛋白質(zhì)提取和分離普通分為四步：樣品解決f粗分離一純化純度鑒定,

透析除去分子較小雜質(zhì)。

專項(xiàng)一老式發(fā)酵技術(shù)應(yīng)用

課題一果酒和果醋制作

1、發(fā)酵：通過微生物技術(shù)培養(yǎng)來生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物過程。

2、有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)酵?無氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵乳酸發(fā)酵

3、酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌?酵母菌生殖方式：出芽生殖（重要）分裂

生殖抱子生殖

4、在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O6+6O2+

6H2O-682+I2H2O+能量

5、在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。C6H12O6->2C2H5OH+2CO2+

能量

6、20C左右最適當(dāng)酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時(shí)普通將溫度控制在18℃-25℃

7、在葡萄酒自然發(fā)酵過程中，起重要作用是附著在葡萄皮表面野生型酵母菌.在發(fā)

酵過程中，隨著酒精濃度提高，紅葡萄皮色素也進(jìn)入發(fā)酵液，使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色.

在缺氧呈酸性發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其她微生物都因無法

適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。

8、醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌（原核生物），代謝類型是異養(yǎng)需氧型，生殖方式為二分裂

9、當(dāng)氧氣、糖源都充分時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，

醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?。C6H12O6+

2O2—2cH3COOH+2co2+2H2O

C2H5OH+O2-CH3COOH+H2O

10、控制發(fā)酵條件作用①醋酸菌對氧氣含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，雖然

只是短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長溫度為

32℃,控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時(shí)間縮短，又減少雜菌污染機(jī)會(huì)。③有兩條途徑

生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物氧化。

11、實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄一沖洗一榨汁一酒精發(fā)酵一果酒（一醋酸發(fā)酵一果醋）

12、酒精檢查：果汁發(fā)酵后與否有酒精產(chǎn)生，可以用重銘酸鉀來檢查。在酸性條

件下，重銘酸鉀與酒精反映呈現(xiàn)灰綠色。先在試管中加入發(fā)酵液2mL,再滴入

物質(zhì)量濃度為3moi/LH2s043滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和重格酸鉀溶液

3滴，振蕩試管，觀測顏色

13、充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來

排出二氧化碳；出料口是用來取樣。排氣口要通過一種長而彎曲膠管與瓶身相連

接，其目是防止空氣中微生物污染。開口向下目是有助于二氧化碳排出。使用該

裝置制酒時(shí)，應(yīng)當(dāng)關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)當(dāng)充氣口連接氣泵，輸入氧氣。

疑難解答

（1）你以為應(yīng)當(dāng)先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？

應(yīng)當(dāng)先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增長被雜菌污

染機(jī)會(huì)。

（2）你以為應(yīng)當(dāng)從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？

如：要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈，并進(jìn)行酒精消

毒；每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。

(3)制葡萄酒時(shí)，為什么要將溫度控制在18?25℃?制葡萄醋時(shí)，為什么要將

溫度控制在30?35℃?

溫度是酵母菌生長和發(fā)酵重要條件。20℃左右最適合酵母菌繁殖。因而需要將溫

度控制在其最適溫度范疇內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長溫度為32C,因而

要將溫度控制在30?35℃。

專項(xiàng)二微生物培養(yǎng)與應(yīng)用

課題一微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

?培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)不同需求，配制出供其生長繁殖營養(yǎng)基質(zhì)，

是進(jìn)行微生物培養(yǎng)物質(zhì)基本。

?培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培

養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂(是從紅藻中提取一種多糖，在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑)

后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見菌

落。依照菌落特性可以判斷是哪一種菌。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，固

體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物分離和鑒定，半固體培養(yǎng)基則慣用于觀測微生物運(yùn)動(dòng)及菌

種保藏等。

?按照成分培養(yǎng)基可分為人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是用成分已

知化學(xué)物質(zhì)配制而成，其中成分種類比例明確，慣用于微生物分離鑒定。天然培

養(yǎng)基是用化學(xué)成分不明天然物質(zhì)配制而成，慣用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)。

?按照培養(yǎng)基用途，可將培養(yǎng)基分為選取培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選取培養(yǎng)基是指

在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要微生物生長，增進(jìn)所需要微生物生

長。鑒別培養(yǎng)基是依照微生物特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種批示劑或化學(xué)藥物配制

而成，用以鑒別不同類別微生物。

?培養(yǎng)基化學(xué)成分涉及水、無機(jī)鹽、碳源、氮源（生長因子）等。

?碳源：能為微生物代謝提供碳元素物質(zhì)。如CO2、NaHC03等無機(jī)碳源；糖類、

石油、花生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能運(yùn)用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳

源。

?氮源：能為微生物代謝提供氮元素物質(zhì)。如N2、NH3、N03\NH4+（無機(jī)氮源）

蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白陳（有機(jī)氮源）等。只有固氮微生物才干

運(yùn)用N2O

?培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對PH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣規(guī)定。例如，培養(yǎng)乳

酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基pH調(diào)至酸性，培

養(yǎng)細(xì)菌是需要將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧條

件

?無菌技術(shù)?獲得純凈培養(yǎng)物核心是防止外來雜菌入侵，要注意如下幾種方面：

①對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。

②將用于微生物培養(yǎng)器皿、接種用品和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。

③為避免周邊環(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。

④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌解決材料用品與周邊物品相接觸。

無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)物被其她外來微生物污染外，尚有什么目？

答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。

?消毒與滅菌區(qū)別

消毒指使用較為溫和物理或化學(xué)辦法僅殺死物體表面或內(nèi)部一某些對人體有害

微生物（不涉及芽抱和泡子）。消毒辦法慣用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對于某

些不耐高溫液體）尚有化學(xué)藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。

滅菌則是指使用強(qiáng)烈理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，涉及芽抱和抱子。滅菌

辦法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。

滅菌辦法：

①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；

②玻璃器皿、金屬用品等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；

③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。

④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。

比較項(xiàng)理化因素作用強(qiáng)度消滅微生物數(shù)量芽抱和抱子能否被消

滅

消毒較為溫和某些生活狀態(tài)微生物不能

滅菌強(qiáng)烈所有微生物能

制作牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基

(1)辦法環(huán)節(jié)：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。

(2)倒平板操作環(huán)節(jié)：

①將滅過菌培養(yǎng)皿放在火焰旁桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基錐形瓶,左手拔出棉塞。

②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。

③用左手拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍不不大于瓶口縫隙，右手將錐形瓶中培

養(yǎng)基(約10?20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手及時(shí)蓋上培養(yǎng)皿皿蓋。

④等待平板冷卻凝固，大概需5?lOmin。然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿

蓋在下、皿底在上。

?倒平板操作討論

1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50C左右時(shí)，才干用來倒平板。你用什么辦法來預(yù)

計(jì)培養(yǎng)基溫度？

提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基錐形瓶，感覺錐形瓶溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，

就可以進(jìn)行倒平板了。

2.為什么需要使錐形瓶瓶口通過火焰？

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口微生物污染培養(yǎng)基。

3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止培養(yǎng)基表面水

分過度地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基，導(dǎo)致污染。

4.在倒平板過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間部位，這個(gè)平板還

能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

答：空氣中微生物也許在皿蓋與皿底之間培養(yǎng)基上滋生，因而最佳不要用這個(gè)平

板培養(yǎng)微生物。

純化大腸桿菌

（1）微生物接種辦法最慣用是平板劃線法和稀釋涂布平板法。

（2）平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面持續(xù)劃線操作。將匯集菌

種逐漸稀釋分散到培養(yǎng)基表面。在多次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一種細(xì)胞繁殖

而來肉眼可見子細(xì)胞群體，這就是菌落。

（3）稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度菌液分

別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩

步。

（4）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種目是：使匯集在一起微生物分散成單

個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落，以便于純化菌種。

（5）平板劃線法操作環(huán)節(jié)：

①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開

棉塞。

③將試管口通過火焰。④將已冷卻接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。

⑤將試管通過火焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種

接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)皿。

⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)

以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)劃線與第一區(qū)相連。

⑧將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?平板劃線操作討論

1.為什么在操作第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，

依然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：操作第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上也許存在微生物污染培養(yǎng)物；

每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留菌種，使下

一次劃線時(shí)，接種環(huán)上菌種直接來源于上次劃線末端，從而通過劃線次數(shù)增長,

使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能

及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？

答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線末端開始劃線？

答：劃線后，線條末端細(xì)菌數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線末端開

始，能使細(xì)菌數(shù)目隨著劃線次數(shù)增長而逐漸減少，最后能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖

而來菌落。

（6）涂布平板操作環(huán)節(jié)：

①將涂布器浸在盛有酒精燒杯中。②取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。

③將沾有少量酒精涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8?10s。

④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。

涂布平板操作討論

涂布平板所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋無菌操作規(guī)

定，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？

提示：應(yīng)從操作各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿距離要適當(dāng)、吸管

頭不要接觸任何其她物體、吸管要在酒精燈火焰周邊；等等。

菌種保存

(1)對于頻繁使用菌種，可以采用暫時(shí)保藏辦法。

①暫時(shí)保藏辦法

將菌種接種到試管固體斜面培養(yǎng)基上，在適當(dāng)溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將試

管放入4c冰箱中保藏。后來每3?6個(gè)月，都要重新將菌種從舊培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移

到新鮮培養(yǎng)基上。

②缺陷：這種辦法保存時(shí)間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。

(2)對于需要長期保存菌種，可以采用甘油管藏辦法。

在3mL甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，

與甘油充分混勻后，放在一20C冷凍箱中保存。

疑難解答

(1)生物營養(yǎng)

營養(yǎng)是指生物攝取、運(yùn)用營養(yǎng)物質(zhì)過程。營養(yǎng)物質(zhì)是指維持機(jī)體生命活動(dòng)，保證

發(fā)育、生殖所需外源物質(zhì)。

人及動(dòng)物營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。

植物營養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。

微生物營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營養(yǎng)物質(zhì)五類。

（2）擬定培養(yǎng)基制作與否合格辦法

將未接種培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1?2天，無菌落生長，闡明培養(yǎng)基制備是成功,

否則需要重新制備。

課題二土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)

尿素是一種重要農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸取。只有當(dāng)土壤中細(xì)

菌將尿素分解成氨之后，才干被植物運(yùn)用。土壤中細(xì)菌之因此能分解尿素，是由

于她們能合成胭酶

尿素最初是從人尿液中發(fā)現(xiàn)

篩選菌株

(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選應(yīng)用原理

人為提供有助于目菌株生長條件(涉及營養(yǎng)、溫度、pH等)，同步抑制或制止

其她微生物生長。

(2)選取性培養(yǎng)基

在微生物學(xué)中，將容許特定種類微生物生長，同步抑制或制止其她種類微生物生

長培養(yǎng)基，稱作選取培養(yǎng)基。

(3)配制選取培養(yǎng)基根據(jù)

依照選取培養(yǎng)菌種生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選取目。例如，培養(yǎng)基中不

加入有機(jī)物可以選取培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選取培養(yǎng)

能固氮微生物；加入高濃度食鹽可選取培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。

記錄菌落數(shù)目

(1)測定微生物數(shù)量慣用辦法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。

(2)稀釋涂布平板法記錄樣品中活菌數(shù)目原理

當(dāng)樣品稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長一種菌落，來源于樣品稀釋液中一種活

菌。通過記錄平板上菌落數(shù)，就能推測出樣品中大概具有多少活細(xì)菌。為了保證

成果精確，普通設(shè)立3?5個(gè)平板，選取菌落數(shù)在30?300平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取

平均值。記錄菌落數(shù)往往比活菌實(shí)際數(shù)目低，因而，記錄成果普通用菌落數(shù)而不

是活菌數(shù)來表達(dá)。

采用此辦法注意事項(xiàng)：1.普通選用菌落數(shù)在30-300之間平板進(jìn)行計(jì)數(shù)

2.為了防止菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入TTC（在計(jì)數(shù)瓊脂中加入適

量TTC（0.5%TTC1ML力口至1J100ML瓊脂中），細(xì)菌菌落長成紅顏色,對去除食品本

底顆粒物干擾非常故意義）.

3.本法僅限于形成菌落微生物

設(shè)立對照

設(shè)立對照重要目是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)成果影響，提高實(shí)驗(yàn)成果可信

度。對照實(shí)驗(yàn)是指除了被測試條件以外，其她條件都相似實(shí)驗(yàn)，其作用是比照實(shí)

驗(yàn)組，排除任何其她也許因素干擾，證明的確是所測試條件引起相應(yīng)成果。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)涉及實(shí)驗(yàn)方案，所需儀器、材料、用品和藥物，詳細(xì)實(shí)行環(huán)節(jié)以及時(shí)間

安排等綜合考慮和安排。

（1）土壤取樣：同其她生物環(huán)境相比，土壤中微生物，數(shù)量最大，種類最多。

在富具有機(jī)質(zhì)土壤表層，有更多微生物生長。從富具有機(jī)物、潮濕、pHM土壤

中取樣。鏟去表層土，在距地表約3?8cm土壤層取樣。

（2）樣品稀釋：樣品稀釋限度將直接影響平板上生長菌落數(shù)目。在實(shí)際操作中，

普通選用一定稀釋范疇樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30~300之間、適

于計(jì)數(shù)平板。

測定土壤中細(xì)菌數(shù)量，普通選用104105106

測定放線菌數(shù)量，普通選用1（）3io4105

測定真菌數(shù)量，普通選用IO?1（）3104

(3)微生物培養(yǎng)與觀測

不同種類微生物，往往需要不同培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌30~37cl~2天

放線菌25~28℃5~7天霉菌25~28℃3~4天

每隔24小時(shí)記錄一次菌落數(shù)目，選用菌落數(shù)目穩(wěn)定期記錄作為成果，這樣可以

防止因培養(yǎng)時(shí)間局限性而導(dǎo)致一樓菌落數(shù)目。普通來說，在一定培養(yǎng)條件下(相

似培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間)，同種微生物體現(xiàn)出穩(wěn)定菌落特性。形狀、大小、

隆起限度、顏色

疑難解答

(1)如何從平板上菌落數(shù)推測出每克樣品中菌落數(shù)？

記錄某一稀釋度下平板上菌落數(shù)，最佳能記錄3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)平均

值

每克樣品中菌落數(shù)=(C/V)*M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長平均菌落

數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用稀釋液體積(ml),M代表稀釋倍數(shù)

植物細(xì)胞工程

具備某種生物全套遺傳信息任何一種活細(xì)胞,都具備發(fā)育成完整個(gè)體能力,即每

個(gè)生物細(xì)胞都具備全能性。但在生物體生長發(fā)育過程中并不體現(xiàn)出來，這是由于

在特定期間和空間條件下，通過基因選取性表達(dá)，構(gòu)成不同組織和器官。

植物組織培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用有：實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種迅速繁殖;哺育脫毒作物;制作人工種

子；哺育作物新品種以及細(xì)胞產(chǎn)物工廠化生產(chǎn)等。

?細(xì)胞分化是一種持久性變化，它有什么生理意義？

使多細(xì)胞生物體中細(xì)胞構(gòu)造和功能趨向?qū)ｉT化，有助于提高各種生理功能效率。

比較根尖分生組織和愈傷組織異同

組織類型細(xì)胞來源細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞構(gòu)造細(xì)胞排列細(xì)胞去向

根尖分化成各種

受精卵正方形無液泡緊密

分生組織細(xì)胞組織

愈傷組織高度分化細(xì)胞無定形高度液泡化疏松再分化成新個(gè)體

相似點(diǎn)都通過有絲分裂進(jìn)行細(xì)）也增殖

影響植物組織培養(yǎng)條件

材料：不同植物組織，培養(yǎng)難易限度差別很大。植物材料選取直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)成

敗。植物種類、材料年齡和保存時(shí)間長短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)成果。菊花組織培養(yǎng)普

通選取未開花植物莖上部新萌生側(cè)枝作材料。普通來說，容易進(jìn)行無性繁殖植

物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選用生長旺盛嫩枝進(jìn)行組培是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)

脫分化和再分化。

營養(yǎng)：離體植物組織和細(xì)胞，對營養(yǎng)、環(huán)境等條件規(guī)定相對特殊，需要配制適當(dāng)

培養(yǎng)基。慣用培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其中具有大量元素是N、P、S、K、Ca、

Mg,微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co,有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、

肌醇、維生素、蔗糖等。

激素：植物激素中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化核心性

激素。在生長素存在狀況下，細(xì)胞分裂素作用呈現(xiàn)加強(qiáng)趨勢。在培養(yǎng)基中需要添

加生長素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度、使用先后順序、用量比例等都影響

成果。

使用順序?qū)嶒?yàn)成果

先生長素，

有助于分裂但不分

化

后細(xì)胞分裂素

先細(xì)胞分裂素，

細(xì)胞既分裂也分化

后生長素

同步使用分化頻率提高

生長素/細(xì)胞分裂素比值與成果

促根分化，

比值高時(shí)

抑芽形成

促芽分化，

比值低時(shí)

抑根形成

比值適中增進(jìn)愈傷組織生長

環(huán)境條件：PH、溫度、光等環(huán)境條件。

不同植物對各種條件規(guī)定往往不同。進(jìn)行菊花組織培養(yǎng)，普通將pH控制在5.8

左右，溫度控制在18~22℃,并且每日用日光燈照射12h.

4、操作流程

配制MS固體培養(yǎng)基：配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成濃縮液（培

養(yǎng)基母液）。

?使用時(shí)依照母液濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量，并加蒸儲(chǔ)水稀釋。

?配制培養(yǎng)基：應(yīng)加入物質(zhì)有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機(jī)物和植物

激素母液，并用蒸儲(chǔ)水定容到1000毫升。

?在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素

因素是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。?滅菌：采用滅菌辦法是高壓蒸汽滅菌。

?MS培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)作用是什么？與肉湯培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基有哪些

特點(diǎn)？

大量元素和微量元素提供植物細(xì)胞所必須無機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，維持細(xì)胞滲入

壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)重要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一

定影響后所產(chǎn)生特殊營養(yǎng)需求。

微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)。

外植體消毒外植體：用于離體培養(yǎng)植物器官或組織片段。選用菊花莖段時(shí)，要

取生長旺盛嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少量洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷

洗后在流水下沖洗20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入體積分

數(shù)為70%酒精中搖動(dòng)2~3次，持續(xù)6~7s,及時(shí)將外植體取出，在無菌水中清洗。

取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%氯化汞溶液

中l(wèi)~2min。取出后，在無菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。

注意：對外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，就要考慮藥劑消毒效果，又要考慮植物耐受能

力。

接種：接種過程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上，每個(gè)錐形瓶接種7?8個(gè)外植

體。外植體接種與細(xì)菌接種相似，操作環(huán)節(jié)相似，并且都規(guī)定無菌操作。

培養(yǎng)：應(yīng)當(dāng)放在無菌箱中進(jìn)行，并定期進(jìn)行消毒，保持適當(dāng)溫度(18~22℃)和

光照(12h)

移栽：栽前應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根

部培養(yǎng)基。然后將幼苗移植到消過毒蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時(shí)間，進(jìn)行

壯苗。最后進(jìn)行露天栽培。

栽培

外植體在培養(yǎng)過程中也許會(huì)被污染，因素有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹

底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。

專項(xiàng)4酶研究與應(yīng)用知識點(diǎn)

課題1果膠酶在果汁生產(chǎn)中作用

由水果制作果汁要解決兩個(gè)重要問題：一是果肉出汁率低，耗時(shí)長；二是榨取

果汁渾濁、黏度高，容易發(fā)生沉淀。

1、植物細(xì)胞壁以及胞間層重要構(gòu)成成分有纖維素和果膠。并且兩者不溶于

水，在果汁加工中，既影響出汁率，又使果汁渾濁。

2、果膠是植物細(xì)胞壁以及胞間層重要構(gòu)成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合

而成一種高分子化合物，不溶于水。在果汁加工中，果膠不但會(huì)影響出汁率，還

會(huì)使果汁渾濁。果膠酶作用是可以將果膠分解成可溶性半乳醛酸,崩潰植物細(xì)

胞壁及胞間層，并且使果汁變得澄清。

3、果膠酶是一類酶總稱，涉及果膠分解酶、多聚半乳糖醛酸酶、果膠酯酶

一等。

4、酶活性是指酶催化一定化學(xué)反映能力。酶活性高低可以用在一定條件下，

酶所催化某一化學(xué)反映反映速度來表達(dá)。在科學(xué)研究與工業(yè)生產(chǎn)中，酶反映速

度用單位時(shí)間內(nèi)、單位體積中反映物減小量或產(chǎn)物增長量來表達(dá)。

5、影響酶活性因素涉及：溫度、PH、酶抑制劑等。

（二）.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

（設(shè)計(jì)一）探究溫度對酶活性影響

當(dāng)酶處在最適溫度或最適pH時(shí)，酶活性最高；若溫度過高、過酸或過堿，則

導(dǎo)致酶變性失活。在一定范疇內(nèi)，果肉出汁率和果汁澄清度與果膠酶活性成正

比。

此實(shí)驗(yàn)自變量是溫度一；依照單一變量原則，你應(yīng)保證各實(shí)驗(yàn)組相似變量有型

底物濃度底物量實(shí)驗(yàn)器材酶用量等等。

（設(shè)計(jì)二）探究PH對酶活性影響

探究pH對果膠酶活性影響，只須將溫度梯度改成pH梯度，并選定一種適當(dāng)溫

度進(jìn)行水浴加熱。反映液中pH可以通過體積分?jǐn)?shù)為0.1%氫氧化鈉或鹽酸溶液進(jìn)

行調(diào)節(jié)。

（設(shè)計(jì)三）探究果膠酶用量

探究果膠酶用量是建立在探究最適溫度和pH對果膠酶活性影響基本之上。此時(shí),

研究變量是果膠酶用量，其她因素都應(yīng)保持不變。實(shí)驗(yàn)時(shí)可以配制不同濃度果膠

酶溶液，也可以只配制一種濃度果膠酶溶液，然后使用不同體積即可。需要注意

是，反映液pH必要相似，否則將影響實(shí)驗(yàn)成果準(zhǔn)

旁欄思考題

1.為什么在混合蘋果泥和果膠酶之前，要將果泥和果膠酶分裝在不同試管中恒

溫解決？

提示：將果泥和果膠酶分裝在不同試管中恒溫解決，可以保證底物和酶在混合時(shí)

溫度是相似，避免了果泥和果膠酶混合時(shí)影響混合物溫度，從而影響果膠酶活性

問題。

2.在探究溫度或pH影響時(shí)，與否需要設(shè)立對照？如果需要，又應(yīng)當(dāng)如何設(shè)立？

為什么？

提示：需要設(shè)立對照實(shí)驗(yàn)，不同溫度梯度之間或不同pH梯度之間就可以作為對

照，這種對照稱為互相對照。

3.A同窗將哪個(gè)因素作為變量，控制哪些因素不變？為什么要作這樣解決？B

同窗呢？

提示：A同窗將溫度或pH作為變量，控制不變量有蘋果泥用量、果膠酶用量、

反映時(shí)間和過濾時(shí)間等。只有在實(shí)驗(yàn)中保證一種自變量，實(shí)驗(yàn)成果才干闡明問題。

B同窗對于變量解決應(yīng)當(dāng)與A同窗相似，只是觀測因變量角度不同。

4.想一想，為什么可以通過測定濾出蘋果汁體積大小來判斷果膠酶活性高低？

提示：果膠酶將果膠分解為小分子物質(zhì)，小分子物質(zhì)可以通過濾紙，因而蘋果汁

體積大小反映了果膠酶催化分解果膠能力。在不同溫度和pH下，果膠酶活性越

大，蘋果汁體積就越大。

5.當(dāng)探究溫度對果膠酶活性影響時(shí)，哪個(gè)因素是變量，哪些因素應(yīng)當(dāng)保持不變？

提示：溫度是變量，應(yīng)控制果泥量、果膠酶濃度和用量、水浴時(shí)間和混合物pH

等所有其她條件不變。只有這樣才干保證只有溫度一種變量對果膠酶活性產(chǎn)生影

響。

實(shí)驗(yàn)變量與反映變量（如表）

實(shí)驗(yàn)變量（自變量）反映變量（因變量）

含義實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)者所操縱因素或條件由于實(shí)驗(yàn)變量變化而引起變化和成果

實(shí)例溫度或pH果汁量

聯(lián)系實(shí)驗(yàn)變量為因素，反映變量是成果，兩者是因果關(guān)系

課題二胡蘿卜素提取

胡蘿卜素性質(zhì)：橘黃色結(jié)晶，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶

于石油酸等有機(jī)溶劑。

根據(jù)碳碳雙鍵數(shù)目劃分為a、y三類。

其中最重要構(gòu)成成分為快胡蘿卜素。

作用：①治療夜盲癥、幼兒生長發(fā)育不良、干皮癥等疾病；②慣用于食品色素；

③使癌變細(xì)胞恢復(fù)成正常細(xì)胞。

提取B—胡蘿卜素辦法重要有三種：①從植物中提取②從大面積養(yǎng)殖巖藻中獲得

③運(yùn)用微生物發(fā)酵生產(chǎn)

實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)①粉碎：使原料與有機(jī)溶劑充分接觸，增大溶解度。②干燥：脫水溫度

太高，干燥時(shí)間太長會(huì)導(dǎo)致胡蘿卜素分解。③萃取

I、萃取劑選取水溶性：乙醇、丙酮

水不溶性：石油酸、乙酸乙酯、乙醛、苯、四氯化碳等

選?。壕邆漭^高沸點(diǎn)，可以充分溶解胡蘿卜素，并且不與水混溶。

II、影響萃取因素

重要因素：萃取劑性質(zhì)和使用量

次要因素：原料顆粒大小、緊密限度、含水量、萃取溫度和時(shí)間等

普通來說，原料顆粒