科研項目申報書

項目名稱探討替米沙坦對人腎小管上皮細胞尿酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白hUA體現(xiàn)的影響及其作用機制

一、立題根據(jù)（涉及國內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析）近年來研究表明，血尿酸升高與腎臟疾病、動脈粥樣硬化程度及冠心病、心肌梗死、原發(fā)性高血壓、腦卒中、總心血管事件的發(fā)生率、死亡率和總死亡率等呈獨立有關(guān)性，不依賴于某些常見的心血管危險因素及腎損傷指標。尿酸排除減少或生成增加可造成高尿酸血癥，其中90%是由于尿酸排泄減少所致。人體的尿酸約三分之二經(jīng)腎臟排泄。原發(fā)性高尿酸血癥重要由于近段腎小管上尿酸鹽運轉(zhuǎn)蛋白異常所致，屬多基因遺傳缺點。由于尿酸鹽為極性分子，不能自由通過細胞膜，因此，其在近曲小管的重吸取和分泌過程依賴于離子通道，當中起主導作用的即是尿酸鹽運轉(zhuǎn)蛋白。近年來，運用生理、分子生物學和細胞生物等多個技術(shù)研究腎臟尿酸鹽的運轉(zhuǎn)，現(xiàn)已明確有4種尿酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白參加人近曲腎小管對尿酸鹽的轉(zhuǎn)運,即生電型的尿酸鹽轉(zhuǎn)運體(humanurattransporter,hUAT)、電中性的尿酸鹽/陰離子交換體(humanurateaniontransporter1,hURAT1)、有機陰離子轉(zhuǎn)運體(humanorganicaniontransporter,hOAT1)和hOAT3。其中hUAT重要參加腎近曲小管對尿酸鹽的分泌,hURAT1重要參加腎近曲小管對尿酸鹽的重吸取,hOAT1和hOAT3與管周細胞對尿酸鹽的攝取有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)hUAT蛋白通道對亞酸鹽的選擇性比其它離子高，是一種生電性的高選擇性的鹽酸鹽單向運轉(zhuǎn)通道，在腎臟上皮細胞中起到重要的運轉(zhuǎn)鹽酸鹽的作用。而hUAT活性減少和(或)hURAT1的活性升高以及hOAT1和hOAT3活性的變化可成為高尿酸血癥的重要發(fā)病機制。高濃度的尿酸對腎臟組織有著直接的致病作用。我們前期實驗發(fā)現(xiàn)，大鼠腎小管上皮細胞存在UAT的體現(xiàn)（見附圖1），替米沙坦含有降尿酸的作用，可能是通過升高UAT的體現(xiàn)來完畢的（見附圖2-4），但并非全部ARB類藥品均含有降尿酸作用。國外有研究表明替米沙坦是藥品構(gòu)造比較獨特的ARB，除能阻滯腎素一血管緊張素系統(tǒng)外，還含有部分過氧化物酶體增殖物活化受體(PPAR)激動劑的功效，并能調(diào)控血糖、脂肪生成及代謝、胰島素敏感性有關(guān)基因以及克制炎癥因子產(chǎn)生。且替米沙坦的此種作用并不依賴于血管緊張素Ⅱ受體的阻滯作用，研究證明，在缺少血管緊張素受體的狀況下，替米沙坦仍然能部分激活PPARγ，是唯一一種在治療濃度內(nèi)能激活PPAR-γ的ARB，對PPAR-γ作用最強。而與替米沙坦構(gòu)造類似的羅格列酮有降尿酸的作用，且是通過調(diào)節(jié)UAT體現(xiàn)完畢的。那么，替米沙坦與否是通過激活PPARγ來調(diào)節(jié)UAT的體現(xiàn)的呢？現(xiàn)在國內(nèi)外尚無有關(guān)報道。附圖1大鼠腎小管上皮細胞存在UAT體現(xiàn)（免疫熒光）溶解曲線吸取曲線附圖2不同濃度替米沙坦干預后大鼠腎小管上皮細胞UATmRNA體現(xiàn)變化（實時熒光定量PCR）附圖3不同濃度替米沙坦干預后大鼠腎小管上皮細胞UAT、TGF-β1、α-SMA蛋白體現(xiàn)變化（WesternBlot）附圖4不同濃度替米沙坦干預后大鼠腎臟提取蛋白UAT、TGF-β1體現(xiàn)變化（WesternBlot）

二、研究內(nèi)容和預期目的1.通過體內(nèi)實驗，觀察替米沙坦對痛風性腎病患者SUA、SCr、PPAR-γ、NO體現(xiàn)的影響，明確替米沙坦降尿酸的作用及機制。2.通過體外實驗，觀察人腎小管上皮細胞（HK-2）尿酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白hUAT的體現(xiàn)及定位。探討在正常及高尿酸條件下HK-2上hUAT、PPAR-γ、NO、CO-X2、MCP-1、TGF-β1的體現(xiàn)狀況，觀察替米沙坦、羅格列酮及PPAR-γ阻斷劑HL005干預后其體現(xiàn)變化，進一步明確替米沙坦降尿酸及保護腎臟的機制。

研究辦法和技術(shù)路線及可行性分析四、項目創(chuàng)新點1.臨床及基礎(chǔ)實驗相結(jié)合，共同探討替米沙坦降尿酸作用及機制；2.采用共聚焦顯微鏡等先進手段進行hUAT等指標檢測。六、項目年度計劃安排（12月至12月）時間工作安排.12-.2購置試劑，進行預實驗.3-.1培養(yǎng)人腎小管上皮細胞（HK-2），觀察其尿酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白hUAT的體現(xiàn)及定位。檢測在正常及高尿酸條件下HK-2上hUAT、PPAR-γ、NO、CO-X2、MCP-1、TGF-β1的體現(xiàn)狀況，觀察替米沙坦、羅格列酮及PPAR-γ阻斷劑HL005干預后其體現(xiàn)變化，探討替米沙坦降尿酸及保護腎臟的機