茶色素對嗎啡依賴小鼠腦內(nèi)ne、da、5-h和-內(nèi)啡肽的影響

茶色素對嗎啡依賴小鼠腦內(nèi)ne、da、5-h和-內(nèi)啡肽的影響

茶色素是提取的含有多酚類化合物的提取物。近年研究發(fā)現(xiàn),其具有調(diào)節(jié)血脂、抗氧化、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、調(diào)節(jié)免疫、抗菌、抗病毒等藥理作用。有文獻(xiàn)報(bào)道,茶色素對嗎啡依賴小鼠有戒毒作用,戒毒的詳細(xì)機(jī)制未見文獻(xiàn)報(bào)道。因此,本文對茶色素對嗎啡依賴小鼠的戒毒作用機(jī)制進(jìn)行探索。1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供HPLC-ECD-6A高效液相色譜儀(島津制作所);GC-2010γ放射免疫計(jì)數(shù)器(中佳光電儀器分公司)。昆明種小鼠,♀♂各半,由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào):SCXK-(軍)2007-004;茶色素,江西江綠集團(tuán)有限公司提供,含多酚類化合物70%;鹽酸嗎啡注射液(東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥有限公司,批號(hào)100509-1);注射用鹽酸納洛酮(重慶藥友制藥有限責(zé)任公司,批號(hào)10040330);鹽酸可樂定片(常州制藥廠有限公司,批號(hào)11012213);β-內(nèi)啡肽放免藥盒(北京華英生物技術(shù)研究所)。2方法2.1納絡(luò)酮對小鼠體質(zhì)量的影響將昆明種小鼠48只分為正常對照組,嗎啡依賴組,茶色素12.5,25,50,100,200mg·kg-1治療組,鹽酸可樂定陽性藥組8個(gè)組。正常對照組小鼠,皮下注射0.9%氯化鈉注射液,其余7組小鼠皮下遞增注射嗎啡,第1～5天嗎啡用藥劑量分別為10,20,30,40,50mg·kg-1,bid(8:00,20:00),第6天8:00給予嗎啡50mg·kg-1。然后給嗎啡第6天8:00正常對照組小鼠皮下注射0.9%氯化鈉注射液,其余7組小鼠皮下注射嗎啡50mg·kg-1。2h后正常對照組和嗎啡組小鼠灌胃純化水,陽性藥組灌胃0.2mg·kg-1可樂定溶液,茶色素各劑量組小鼠灌胃給予相應(yīng)濃度的茶色素溶液。20min后各組小鼠均腹腔注射納絡(luò)酮5mg·kg-1催癮,測定15min內(nèi)小鼠出現(xiàn)的跳躍反應(yīng)次數(shù),記錄注射納絡(luò)酮前、后30min小鼠體質(zhì)量損失?？綮o脈采血,分離血清-20℃下保存,動(dòng)物處死,分別取出下丘腦,大腦(分成2份),腦干,稱重,-80℃下保存待用。2.2觀測指標(biāo)2.2.1跳躍反應(yīng)和體重差異的觀察腹腔注射納絡(luò)酮5mg·kg-1后,觀察15min內(nèi)小鼠跳躍次數(shù)。記錄注射納絡(luò)酮前、后30min小鼠體質(zhì)量損失。2.2.2大腦皮質(zhì)中nh-1,3,5-o-1,4-l-1,4-l-1,4-四甲基苯磺酸酯,5,5-l-1,4-1,4-四甲基苯磺酸酯,5,5-l,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-四甲基苯磺酸酯,5-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,5-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-3,4-1,4-1,4-4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-1,4-4-3,4-1,4-1,4-1,4-1,4-4-3,4分別在下丘腦、腦干中加入200μL冰冷的0.1mol·L-1高氯酸溶液,大腦皮質(zhì)中加入350μL冰冷的0.1mol·L-1高氯酸溶液,勻漿,高速離心,取上清液20μL進(jìn)樣。用HPLC-ECD系統(tǒng)檢測,記錄峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。2.2.3-ep測定在一半大腦中加入生理鹽水0.5mL·(0.1g)-1,勻漿,離心,取上清液。用放免法測定β-EP。以N/T、B/T計(jì)算NSB、S0結(jié)合百分率,以B/B0計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)及待測物結(jié)合百分率,在半對數(shù)座標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并查出樣品值或由自動(dòng)γ-計(jì)數(shù)儀器直接讀出結(jié)果。2.3統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)以xˉ±sxˉ±s表示,組間比較采用單因素方差分析檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1茶色素對咯-1、3g-1的影響與嗎啡組比較,茶色素12.5,25,50,100mg·kg-1劑量組均顯著降低嗎啡依賴小鼠的跳躍次數(shù)(P<0.01),但茶色素200mg·kg-1劑量組無效,茶色素各劑量組對嗎啡依賴小鼠的體質(zhì)量沒有顯著影響。見表1。3.2茶色素對測腦皮質(zhì)da含量的影響采用高效液相色譜法測定下丘腦,腦干和大腦皮質(zhì)中NE、DA、5-HT含量,結(jié)果見表2。由表2可見:茶色素50mg·kg-1組可以顯著降低嗎啡依賴小鼠下丘腦中NE的含量,12.5,25mg·kg-1組間沒有顯著性差異;茶色素50mg·kg-1組可以顯著降低嗎啡依賴小鼠下丘腦中DA的含量(P<0.05)。12.5,25,100mg·kg-1組間沒有顯著性差異。茶色素各組對嗎啡依賴小鼠大腦皮質(zhì)DA的含量沒有影響;統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,茶色素對嗎啡依賴小鼠下丘腦、腦干和大腦皮質(zhì)5-HT含量沒有顯著性影響(P>0.05)。3.3茶色素對小鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)-ep含量的影響與正常對照組比較,嗎啡組小鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)β-EP含量顯著增加(P<0.01)。與嗎啡組比較,茶色素12.5,25,50,100mg·kg-1各組可顯著降低小鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)β-EP含量(P<0.01)并使其達(dá)到正常對照組水平,茶色素200mg·kg-1組未能降低小鼠大腦皮質(zhì)β-EP含量(P<0.05)。見表3。4茶色素對咯-1對建克氏原螯蝦體內(nèi)5-ht的氧化本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,茶色素使嗎啡依賴小鼠的跳躍次數(shù)減少,說明其對嗎啡依賴小鼠催促戒斷癥狀有抑制作用。大量研究表明,嗎啡依賴小鼠戒斷后,腦內(nèi)DA、NE、5-HT含量驟增。DA能激活中樞系統(tǒng)的獎(jiǎng)賞效應(yīng);去甲腎上腺素能系統(tǒng)涉及阿片軀體戒斷癥狀的表達(dá)。嗎啡的急性應(yīng)用能降低神經(jīng)元外去甲腎上腺素水平,而在阿片戒斷時(shí)幾個(gè)腦區(qū)有神經(jīng)遞質(zhì)釋放的增加;可樂定或β受體拮抗劑普萘洛爾,能減弱阿片戒斷癥狀;5-HT在腦功能中有多種作用,但與藥物依賴有關(guān)的主要是食欲和成癮性,減弱5-HT功能的藥物能阻斷嗎啡形成的位置偏好。許多研究表明阿片類藥物的耐受和依賴作用與5-HT活性變化有關(guān),如急性或慢性接受嗎啡處理的動(dòng)物,5-HT的代謝和合成增加。不同腦區(qū)內(nèi)單胺遞質(zhì)的含量有所差異。在實(shí)驗(yàn)中,同時(shí)測定的3個(gè)腦區(qū)中NE、DA、5-HT的含量。下丘腦中3種單胺遞質(zhì)含量最高。NE只在下丘腦中可以檢測到,在其余2個(gè)腦區(qū)中含量均低于檢測限。DA則在下丘腦和大腦皮質(zhì)中分布較多,腦干中檢測不到信號(hào)。5-HT則在3個(gè)腦區(qū)中均有分布,含量為下丘腦>腦干>大腦皮質(zhì)。實(shí)驗(yàn)得出,茶色素50mg·kg-1組可以顯著降低嗎啡依賴小鼠下丘腦NE、DA的含量,茶色素對嗎啡依賴小鼠下丘腦、腦干和大腦皮質(zhì)5-HT含量沒有影響。由此推測,茶色素對嗎啡依賴小鼠戒斷作用可能與其下調(diào)下丘腦中NE、DA含量有關(guān)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)β-EP作用于μ受體產(chǎn)生獎(jiǎng)賞效應(yīng)致欣快與滿足感,從而產(chǎn)生藥物依賴,阿片類藥物擬β-EP,可以調(diào)解焦慮情緒的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)中茶色素12.5～10