實(shí)驗(yàn)三離體蛙心灌流

實(shí)驗(yàn)三電刺激和化學(xué)因素對(duì)心臟活動(dòng)的影響

2021/5/91一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)離體蛙心灌流方法。2.觀察在心臟活動(dòng)周期內(nèi)給予刺激所引起的期前收縮和代償間歇。3.觀察Na+、K+、Ca2+、Adr（腎上腺素）、Ach（乙酰膽堿）對(duì)心臟活動(dòng)的影響，理解內(nèi)環(huán)境理化因素相對(duì)恒定對(duì)維持心臟正常活動(dòng)的重要性。2021/5/921、心肌的生理特性：2、兩棲類動(dòng)物的心起搏點(diǎn)：3、心肌興奮性的周期性變化：二、實(shí)驗(yàn)原理自律性、興奮性、傳導(dǎo)性、收縮性。靜脈竇。有效不應(yīng)期；相對(duì)不應(yīng)期；超常期。2021/5/93有效不應(yīng)期=收縮期+舒張?jiān)缙谄谇笆湛s：給予心室肌一次有效刺激，產(chǎn)生一次正常節(jié)律以外的收縮反應(yīng)，該收縮先于下一次正常竇房結(jié)興奮引起的收縮。

2021/5/941、心臟的正常節(jié)律性活動(dòng)需要一個(gè)適宜的內(nèi)環(huán)境（離子濃度、pH等），內(nèi)環(huán)境的變化直接影響到心臟的正常節(jié)律性活動(dòng)。2、因此可用人工灌流的方法，觀察灌流液成分的改變對(duì)離體心臟活動(dòng)的影響。無Ca2+任氏液；任氏液（1%KCl；1%CaCl2；2%CaCl2)。二、實(shí)驗(yàn)原理2021/5/951、神經(jīng)調(diào)節(jié)：在體心臟受交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)的雙重支配。交感神經(jīng)末梢釋放NE（去甲腎上腺素），使心肌收縮力加強(qiáng)，傳導(dǎo)速度加快，心率加快，即產(chǎn)生正性變時(shí)、變力、變傳導(dǎo)作用；迷走神經(jīng)末梢釋放Ach（乙酰膽堿），使心肌收縮力減弱，心肌傳導(dǎo)速度減慢，心率減慢，即產(chǎn)生負(fù)性變時(shí)、變力、變傳導(dǎo)作用。2、體液調(diào)節(jié)0.01%Adr（腎上腺素）0.01%Ach（乙酰膽堿）心臟活動(dòng)調(diào)節(jié)2021/5/96三、實(shí)驗(yàn)器材及藥品實(shí)驗(yàn)對(duì)象：蟾蜍2021/5/97實(shí)驗(yàn)藥品：

任氏液無Ca任氏液1%KCl1%CaCl22%CaCl20.01%Ach0.01%Adr實(shí)驗(yàn)器材：

張力換能器蛙類手術(shù)器械一套鐵支架

雙凹夾

蛙心套管蛙心夾刺激電極

滴管

燒杯2021/5/98

四、手術(shù)操作1.取蟾蜍，破壞腦和脊髓、暴露心臟。

12342021/5/99（腹面）

（背面）（兩棲類動(dòng)物心臟解剖結(jié)構(gòu)示意圖）

2021/5/9102.蛙心插管（操作難點(diǎn)）

12342021/5/911蛙心插管步驟小結(jié)：1、在主動(dòng)脈下穿線，備結(jié)扎用；2、在主動(dòng)脈根部剪一斜切口；3、插管裝任氏液，食指堵住上口；5、將插管轉(zhuǎn)向插入心室（插入后有血液進(jìn)入插管），將絲線結(jié)扎固定在蛙心套管上。4、將插管順著主動(dòng)脈方向插入動(dòng)脈圓錐；（腹面）2021/5/9123.游離蛙心1、輕提起蛙心插管，剪斷動(dòng)靜脈(勿損傷靜脈竇），將心臟離體，觀察插管內(nèi)液面高度是否隨著心臟的收縮和舒張而變化？2、用滴管吸凈插管內(nèi)余血，加入新鮮任氏液，反復(fù)換洗數(shù)次，直至液體完全澄清。3、始終保持灌流液面高度恒定（1-2cm）。2021/5/913五、儀器連接12342021/5/914將插好離體心臟的套管固定在支架上，用蛙心夾夾住少許心尖部肌肉，再將蛙心夾上的系線與張力傳感器相連。不可夾得過多，以免因夾破心室而漏液勿使灌流液滴到傳感器上儀器連接注意事項(xiàng)2021/5/915六、軟件操作2021/5/9161.描記正常蛙心收縮曲線

曲線疏密：代表心跳頻率。曲線的規(guī)律性：代表心室的節(jié)律性。曲線的頂點(diǎn)水平：代表心室收縮的程度。曲線的基線：代表心室舒張的程度。七、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目觀察與記錄2021/5/9172.期前收縮和代償間歇2021/5/9183.改變灌流液成分對(duì)心臟活動(dòng)的影響}

對(duì)心臟活動(dòng)的影響（心率、收縮力度、基線水平）無鈣任氏液；任氏液內(nèi)分別添加:(

1%KCl；1%CaCl2；0.01%Ach；0.01%Adr；2%CaCl2；）2021/5/919

（1）吸出插管內(nèi)全部任氏液，換入無鈣任氏液，觀察心縮曲線變化，待效應(yīng)明顯后，吸出灌流液，用新鮮任氏液換洗3次，直至心縮曲線恢復(fù)正常。2021/5/920

（2）加1-2滴1%KCl于新?lián)Q入的任氏液中，觀察心縮曲線的變化。待出現(xiàn)效應(yīng)后，用新鮮任氏液換洗3次至曲線恢復(fù)正常。2021/5/921

（3）加入1-2滴1%CaCl2于新?lián)Q入的任氏液中，觀察心縮曲線的變化。待出現(xiàn)效應(yīng)后，用新鮮任氏液換洗3次至曲線恢復(fù)正常。2021/5/922（4）加入1-2滴0.01%Adr于任氏液中，待效應(yīng)出現(xiàn)后，用任氏液換洗至曲線恢復(fù)正常。2021/5/923（5）加入1-2滴0.01%Ach于任氏液中，待效應(yīng)出現(xiàn)后，用任氏液換洗至曲線恢復(fù)正常。2021/5/924（6）鈣僵：加入4-5滴２%CaCl2于新?lián)Q入的任氏液中，觀察心縮曲線的變化。2021/5/925八、注意事項(xiàng)1.制備標(biāo)本時(shí)，應(yīng)按指導(dǎo)試探著插管，避免損傷心臟(包括靜脈竇)。2.每次換液時(shí)，插管內(nèi)的液面均應(yīng)保持恒定高度。3.各種試劑的滴管不要混淆,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。4.藥物作用不明顯時(shí)，可適量增加。每次加藥，心搏曲線出現(xiàn)變化后立即將插管內(nèi)液體吸出。5.滴加任氏液于心臟表面使之濕潤(rùn)。6.固定換能器時(shí)應(yīng)稍向下傾斜，以免自心臟滴下的液體進(jìn)入換能器內(nèi)造成短路。2021/5/926觀看實(shí)驗(yàn)錄像……2021/5/927九、討論分析分析各觀察結(jié)果的原因。心肌有效不應(yīng)期長(zhǎng)的生理意義。心率過慢，期前收縮后是否有代償間歇？實(shí)驗(yàn)中套管內(nèi)液面為什么要保持相同高度？2021/5/928部分結(jié)果分析無鈣任氏液，心跳減弱心肌收縮活動(dòng)有Ca2+觸發(fā)，心肌肌漿網(wǎng)不發(fā)達(dá)，因此其收縮強(qiáng)弱依賴于細(xì)胞外Ca2+濃度

灌流液中缺乏Ca2+，心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+大大減少，心肌興奮--收縮藕聯(lián)過程減弱，心肌收縮活動(dòng)減弱2021/5/929高K+任氏液，心跳明顯減弱甚至停跳于舒張狀態(tài)

部分結(jié)果分析K+與Ca2+有競(jìng)爭(zhēng)性拮抗作用。細(xì)胞外K+濃度增加可抑制細(xì)胞膜對(duì)Ca2+的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而使進(jìn)入胞內(nèi)的Ca2+減少，心肌興奮--收縮藕聯(lián)過程減弱，心縮力降低甚至停于舒張狀態(tài)。2021/5/930高Ca2+，心縮加強(qiáng)，舒張不完全，甚至停于收縮狀態(tài)部分結(jié)果分析

心肌舒縮活動(dòng)取決于胞內(nèi)Ca2+濃度，當(dāng)Ca2+升高到0.01mM，肌鈣蛋白可結(jié)合足夠Ca2+發(fā)生構(gòu)型改變而觸發(fā)心肌收縮；當(dāng)胞內(nèi)Ca2+濃度降到0.0001mM時(shí)則可解離發(fā)生心肌舒張。高Ca2+使肌鈣蛋白與Ca2+不能解離而造成心肌持續(xù)收縮。2021/5/931部分結(jié)果分析腎上腺素，心臟正性作用并且舒張完全1.腎上腺素與心肌細(xì)胞膜?受體結(jié)合，使心肌細(xì)胞膜上腺苷酸環(huán)化酶活化作用于ATP產(chǎn)生cAMPcAMP的作用：（1）激活Ca2+內(nèi)流；（2）肌漿網(wǎng)釋放Ca2+

因此心肌收縮加強(qiáng)2.腎上腺素使Ca2+泵活動(dòng)增強(qiáng)，肌漿網(wǎng)攝取Ca2+向細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)，胞內(nèi)Ca2+減少，心肌舒張過程加快，舒張完全2021/5/932乙酰膽堿，心縮減弱，心率減慢，興奮傳導(dǎo)速度變慢部分結(jié)果分析乙