《液相色譜基礎(chǔ)知識(shí)》課件

液相色譜基礎(chǔ)知識(shí)液相色譜（HPLC）是一種廣泛應(yīng)用于分離、純化、鑒定和定量目標(biāo)分子的分析技術(shù)，其原理是利用樣品在液相中的分配行為進(jìn)行分離。液相色譜的原理分配作用分子在液相中的分配系數(shù)不同，導(dǎo)致不同大小、極性的分子分離。吸附作用樣品成分吸附在色譜填料表面，不同吸附強(qiáng)度導(dǎo)致分子分離。離子交換作用樣品離子與固定相離子交換，但不同離子強(qiáng)度導(dǎo)致分子分離。排阻作用分子在固定相的孔隙中排斥，不同分子的大小形狀導(dǎo)致分離。液相色譜的分類(lèi)正相色譜以極性固定相為分離介質(zhì)，極性物質(zhì)迅速被吸附出來(lái)。反相色譜以非極性固定相為分離介質(zhì)，非極性物質(zhì)迅速被吸附出來(lái)。離子交換色譜利用固定相上的電荷轉(zhuǎn)移進(jìn)行分離，可對(duì)樣品分子帶電的成分進(jìn)行分離。凝膠過(guò)濾色譜利用固定相上的孔徑分布進(jìn)行分離，可按分子大小分離。色譜柱的選擇1固定相根據(jù)樣品性質(zhì)選用不同的固定相，如疏水固相、親水固相、離子交換固相、手性固相等。2色譜柱長(zhǎng)度色譜柱越長(zhǎng)，分離效果越好，但帶來(lái)的是更長(zhǎng)的分析時(shí)間。3內(nèi)徑內(nèi)徑越小，背壓越大，但靈敏度和分離效果越好。4粒徑粒徑越小，分離效果越好，但是背壓越大。色譜流動(dòng)相的選擇1有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑在控制流動(dòng)相中的比例時(shí)起到分離的作用，常用甲醇、乙醇、乙腈、異丙醇等。2緩沖液可調(diào)節(jié)pH值，防止固相失活，同時(shí)可以使有電解質(zhì)的滯留時(shí)間延長(zhǎng)。3添加劑如有機(jī)酸、有機(jī)堿等，能夠影響樣品的極性，改善分離效果。注射器的選擇自動(dòng)進(jìn)樣器能夠?qū)崿F(xiàn)高效率、高精度的進(jìn)樣，避免手動(dòng)注射器的誤差。手動(dòng)進(jìn)樣器操作簡(jiǎn)單，成本低，適用于一些簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)。濾膜的選擇尺寸選擇必須使得樣品可通過(guò)，但可去除固相顆粒等零碎物。濾膜材料濾膜材料應(yīng)為化學(xué)惰性，不得與樣品化學(xué)反應(yīng)。吸附特性保證樣品在濾膜上的吸附率及其變差不大，防止數(shù)據(jù)誤差。液相色譜中的檢測(cè)方法1UV檢測(cè)器利用吸收波長(zhǎng)檢測(cè)樣品的含量，具有快速、簡(jiǎn)單、靈敏、精確、選波范圍廣、源穩(wěn)定等特點(diǎn)。2熒光檢測(cè)器對(duì)某些熒光化合物靈敏，采用熒光檢測(cè)器靈敏度高，特異性好。3光導(dǎo)檢測(cè)器抗噪技術(shù)精度高，實(shí)現(xiàn)對(duì)各種溶劑、物質(zhì)的偵測(cè)。4大質(zhì)量比檢測(cè)器使用質(zhì)譜技術(shù)篩查和分析樣品，高靈敏度和分辨率。液相色譜的應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)境污染監(jiān)測(cè)可用于大氣、水、土壤等的污染物檢測(cè)和鑒別。食品安全檢測(cè)可對(duì)食品中的雜質(zhì)、