鎖陽蜜抗氧化作用及機制研究

鎖陽蜜抗氧化作用及機制研究

“鎖陽蜜”來自“草本精髓”。“治療陽弱精虛、陰衰血虧、結(jié)腸干渴、便秘”?！辨i陽和蜂蜜酌加肉蓯蓉、黃芪等組方而成,藥理實驗表明鎖陽蜜對小鼠在常壓耐缺氧、抗疲勞、耐寒等抗應(yīng)激的能力都有不同程度的增強。鎖陽蜜的內(nèi)含物具有極好的清除自由基作用。本實驗觀察了鎖陽蜜的抗氧化作用,以探明其補腎益精作用的機理。材料表面1.動物昆明種小鼠,雌雄各半,體重(20±2)g,蘭州醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供(醫(yī)動字第14-001-2002-031號)。2.臨用時需稀釋成所需濃度d-半乳糖鎖陽蜜由甘肅中醫(yī)學(xué)院提供,鎖陽蜜按古方鎖陽和蜂蜜酌加肉蓯蓉、黃芪等配比組方,制成濃縮膏滋。臨用時用蒸餾水稀釋成所需濃度(實驗所用劑量均以生藥計)。D-半乳糖,上海試劑二廠產(chǎn)品,批號990218;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒,南京建成生物工程研究所提供,批號分別為20021219、20021209、0208131-3。3.儀器XT-911型小白鼠跳臺條件反射測試儀,第二軍醫(yī)大學(xué)研制;KON-PRO全自動生化分析儀(荷蘭產(chǎn))。維生素eve組昆明種小鼠270只,雌雄各半,隨機分成6組,即空白對照組、模型對照組、維生素E(VE)組0.1g/kg、鎖陽蜜1.95g/kg、3.9g/kg、7.8g/kg劑量組。每日灌胃給藥1次,除空白對照組每日皮下注射等容量無菌生理鹽水外,其余各組每日皮下注射5%D-半乳糖0.5ml/只,連續(xù)56天。1.小鼠的急性毒性試驗?zāi)┐谓o藥后2h,取體積250ml廣口瓶10個,每瓶加鈉石灰5g,將小鼠放入瓶中,密閉。觀察小鼠在瓶中的表現(xiàn),待動物最終抽搐死亡,記錄小鼠的存活時間。結(jié)果表明鎖陽蜜有耐缺氧的作用,動物的存活時間延長。見表1。2.u3000小鼠在水中的生長末次給藥后2h開始實驗。分別取小鼠,稱重后在其尾系上自身體重10%的砝碼,將其投入(20±2)℃的水中,讓其泳動。待小鼠沉于水底并不再掙扎時,記錄小鼠在水中的存活時間。結(jié)果表明鎖陽蜜有耐疲勞的作用。見表1。3.蜜對衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響以觸電潛伏期(即錯誤潛伏期)和5min內(nèi)錯誤次數(shù)作為指標(biāo),觀察鎖陽蜜對衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響。結(jié)果表明,D-半乳糖模型組小鼠跳臺潛伏期與對照組比較顯著縮短,錯誤次數(shù)顯著增加;而鎖陽蜜3.9g/kg、7.8g/kg組明顯延長小鼠跳臺潛伏期,并顯著減少其5min內(nèi)錯誤次數(shù)。見表2。4.模型大鼠腦勻漿及mda含量測定上述小鼠跳臺實驗結(jié)束后第2天,摘眼球采血取血清,摘全腦(小腦除外)用無菌勻漿介質(zhì)制備10%腦勻漿,3000rpm離心10min,取腦勻漿上清液,分別進(jìn)行血清、腦勻漿的SOD、MDA的含量測定。結(jié)果D-半乳糖模型組腦內(nèi)SOD活性顯著降低,MDA含量顯著升高。鎖陽蜜Ⅱ組、Ⅲ組顯著升高D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老小鼠腦、血清中SOD的活性,鎖陽蜜Ⅲ組顯著降低小鼠腦、血清中MDA的含量。見表3,表4。d-半乳糖衰老模型衰老是生命過程中正常而又復(fù)雜的生理現(xiàn)象,是機體內(nèi)各種生化反應(yīng)的綜合過程。隨著年齡的增長,自由基產(chǎn)生增多,而清除自由基的相關(guān)酶活性下降以及機體免疫功能下降等多種因素均是機體發(fā)生衰老的重要原因。D-半乳糖在一定時間內(nèi)連續(xù)注射使機體細(xì)胞內(nèi)半乳糖濃度增高,在醛糖還原酶催化下還原成半乳糖醇,這種物質(zhì)不能被細(xì)胞進(jìn)一步代謝而堆積在細(xì)胞內(nèi),造成細(xì)胞代謝紊亂,破壞并消耗了機體抗氧化物質(zhì),并不斷產(chǎn)生自由基導(dǎo)致組織細(xì)胞受損。本實驗也證實了D-半乳糖衰老模型鼠腦組織SOD活性明顯下降,MDA含量較生理鹽水對照組明顯增加。機體內(nèi)SOD可催化氧自由基的岐化反應(yīng),是機體清除氧自由基的重要酶,而機體隨著年齡的增長,氧自由基產(chǎn)生增加,同時組織SOD活性降低,導(dǎo)致氧自由基堆積。自由基(如O-2、-OOH等)可通過過氧化作用攻擊細(xì)胞膜、RNA和蛋白質(zhì)等成分,引起脂質(zhì)過氧化和促進(jìn)分子交聯(lián)、DNA基因突變和DNA復(fù)制異常,促進(jìn)細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸產(chǎn)生過氧化反應(yīng),形成MDA等,同時可形成大分子脂褐素在溶酶體中沉積,導(dǎo)致細(xì)胞功能嚴(yán)重受損,機體因而逐漸趨于衰老。VE是天然脂溶性抗氧化劑,主要存在于細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)中,VE不但是單線態(tài)氧和O-的清除劑,更重要的是脂質(zhì)過氧化作用的阻斷劑,用其作為陽性治療組。本研究中,D-半乳糖衰老模型組小鼠跳臺潛伏期與對照組比較顯著縮短,錯誤次數(shù)顯著增加;而鎖陽蜜3.9g/kg、7.8g/kg組明顯延長小鼠跳臺潛伏期,并顯著減少其5min內(nèi)錯誤次數(shù);D-半乳糖模型組腦內(nèi)SOD活性顯著降低,MDA含量顯著升高。鎖陽蜜3.9g/kg、7.8g/kg組顯著升高D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老小鼠腦、血清中SOD的活性,3.9g/kg、7.8g/kg組顯著降低小