瑤藥地不同提取部位降血糖活性研究

瑤藥地不同提取部位降血糖活性研究

李樹是廣西瑤族人民的特產(chǎn)。這是野生牡丹科的一種植物。為了干燥的完整草，在瑤族中被稱為“莫翁樣”，主要用于治療“口渴”和“虛弱”等疾病。地菍中所含的主要成分有黃酮類、多糖類、酚類等。本課題組首次對(duì)地菍開展了一系列抗糖尿病藥效學(xué)研究,發(fā)現(xiàn)地菍的水提取物可降低高血糖模型小鼠的血糖,具有降血脂作用;地菍的乙醇提取物可顯著提高正常小鼠的葡萄糖耐量,但對(duì)其空腹血糖無影響。為探尋地菍降血糖作用的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ),本實(shí)驗(yàn)采用系統(tǒng)溶劑法分離地菍的不同提取部位,觀察各部位對(duì)多種高血糖動(dòng)物模型的降血糖作用,篩選其降血糖有效部位,為進(jìn)一步研究與開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料表面2方法3結(jié)果3.1影響四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影響4降血糖活性篩選四氧嘧啶和鏈脲佐菌素是胰島β細(xì)胞毒劑,常作為建立糖尿病動(dòng)物模型的造模用藥,兩者可選擇性地使多種動(dòng)物的胰島細(xì)胞很快呈現(xiàn)不可逆的損壞或壞死,影響胰島素的分泌,最終導(dǎo)致血糖過高和糖尿病的發(fā)生。腎上腺素具有α和β受體激動(dòng)作用,能促進(jìn)肝臟及肌肉糖原分解,肌肉中糖酵解生成的乳酸增多,經(jīng)三羧酸循環(huán)糖異生增快,從而使血糖升高,造成急性高血糖。為深入研究地菍降血糖活性組份,本實(shí)驗(yàn)以不同極性溶劑依次對(duì)地菍乙醇提取物進(jìn)行萃取,得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。分別建立四氧嘧啶、鏈脲佐菌素致小鼠糖尿病模型,腎上腺素、高濃度葡萄糖致小鼠急性高血糖模型,對(duì)地菍各提取部位進(jìn)行降血糖活性篩選。研究結(jié)果表明,瑤藥地菍的乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能不同程度降低上述糖尿病或高血糖模型小鼠的血糖,顯示出較強(qiáng)的降糖活性,且乙酸乙酯部位給藥組小鼠生長狀況尤為良好,而石油醚部位對(duì)血糖無顯著影響。提示乙酸乙酯部位和正丁醇部位為其主要降糖活性部位,尤以乙酸乙酯部位療效較佳,可能與地菍的降血糖藥效物質(zhì)基礎(chǔ)有關(guān),值得深入地研究。1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2.1影響四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影響健康昆明種小白鼠,體質(zhì)量18~22g,雌雄各半,由廣西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào):SYXK桂2010-0001。1.2c組的浸膏、口服藥物和藥物地菍購自廣西南寧市小瑤王藥店,經(jīng)本校中藥鑒定教研室田輝教授鑒定為野牡丹科植物地菍MelastomadodecandrumLour.的干燥全草。取地菍藥材適量,切碎,加95%乙醇浸泡過夜,加熱回流提取3次,每次1h,過濾,合并濾液,減壓濃縮得總浸膏?？偨嗯c硅膠(1∶2)拌樣,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇加熱回流萃取,分別濃縮成浸膏,得石油醚部位(得膏率約0.53%)、乙酸乙酯部位(得膏率1.51%)和正丁醇部位(得膏率3.64%),備用。鹽酸二甲雙胍片,北京四環(huán)制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)20100414。四氧嘧啶(Alloxan),美國Sigma公司產(chǎn)品,批號(hào)BCBB7829。鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ),美國Sigma公司產(chǎn)品,批號(hào)031M1287V。鹽酸腎上腺素注射液,天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司,批號(hào)1009221;口服葡萄糖,廣西梧州制藥(集團(tuán))股份有限公司生產(chǎn),批號(hào)111005。葡萄糖氧化酶法測(cè)定試劑盒,四川省邁克科技有限責(zé)任公司生產(chǎn),批號(hào)1203021。1.3糖尿病大鼠的分組和給藥TU-1901雙光束紫外可見光分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);臺(tái)式離心機(jī)(16K,珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。小鼠禁食不禁水24h后,尾靜脈注射新鮮配制的四氧嘧啶溶液(60mg/kg),72h后對(duì)小鼠(禁食不禁水8h)眼眶后靜脈叢采血,分離血清,按試劑盒說明測(cè)血糖值,以空腹血糖≥11.0mmol/L的小鼠作為糖尿病模型小鼠,納入實(shí)驗(yàn)。糖尿病小鼠隨機(jī)分為8組,每組12只,另取12只正常小鼠作為正常對(duì)照組,按設(shè)計(jì)劑量(地菍各提取部位以生藥量計(jì))灌胃給藥,正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等容量生理鹽水(20mL/kg),每日灌胃1次,連續(xù)10d。末次給藥后1h(禁食不禁水8h),小鼠眼眶后靜脈叢取血,按試劑盒說明測(cè)定血糖值。2.2糖尿病模型小鼠的檢測(cè)小鼠腹腔注射新鮮配制的鏈脲佐菌素溶液(150mg/kg),72h后對(duì)小鼠(禁食不禁水8h)眼眶后靜脈叢采血,分離血清,按試劑盒說明測(cè)血糖值,以空腹血糖≥8.0mmol/L的小鼠作為糖尿病模型小鼠,納入實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物分組、給藥及檢測(cè)方法同“2.1”項(xiàng)。2.3照組的鹽硝酶管理合格小鼠隨機(jī)分成9組,每組10只。按設(shè)計(jì)劑量(地菍各提取部位以生藥量計(jì))灌胃給藥,正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等容量生理鹽水(20mL/kg),每日灌胃1次,連續(xù)10d。末次給藥后1h(禁食不禁水8h),除正常對(duì)照組給予等容量生理鹽水外,其余各組均腹腔注射鹽酸腎上腺素注射液(0.5mg/kg)復(fù)制小鼠急性高血糖模型,分別于注射腎上腺素前(0h血糖)和注射腎上腺素0.5h后取血測(cè)定血糖值。2.4小鼠血糖檢測(cè)模型總糖設(shè)計(jì)小鼠分組與給藥方法同“2.3”項(xiàng)。末次給藥后1h(禁食不禁水8h),除正常對(duì)照組給予等容量生理鹽水外,其余各組均灌胃葡萄糖溶液(2.5g/kg)復(fù)制小鼠高血糖模型,分別于灌糖前(即0h血糖),灌糖后0.5h、1h和2h,取血測(cè)定血糖值。2.5平均血糖含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以u(píng)e0af±s表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,組間比較用單因素方差分析,P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果如表1所示,與正常對(duì)照組比較,四氧嘧啶造模后,各組小鼠血糖值明顯升高(P<0.01)。給藥10d后,與模型對(duì)照組比較,地菍石油醚部位給藥組小鼠血糖值無顯著差異(P>0.05),地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位給藥組小鼠血糖值顯著降低(P<0.05或P<0.01),且給予乙酸乙酯部位的小鼠生長狀況好于正丁醇部位給藥組小鼠。3.2不同強(qiáng)度下p>0.0.1評(píng)分比較結(jié)果如表2所示,與正常對(duì)照組比較,鏈脲佐菌素造模后,各組小鼠血糖值顯著升高(P<0.01)。給藥10d后,與模型對(duì)照組比較,地菍石油醚部位給藥組小鼠血糖值無顯著差異(P>0.05),地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位給藥組小鼠血糖值降低非常顯著(P<0.01)。3.3鼠血糖的變化結(jié)果如表3所示,與正常對(duì)照組比較,腹腔注射鹽酸腎上腺素0.5h后各組小鼠血糖顯著升高(P<0.01)。與模型對(duì)照組比較,地菍石油醚部位給藥組小鼠血糖值無顯著差異(P>0.05),地菍乙酸乙酯部位和正丁醇部位則顯著抑制鹽酸腎上腺素引起的小鼠急性血糖升高(P<0.05或P<0.01)。3.4降糖作用的比較結(jié)果如表4所示,與正常對(duì)照組比較,模型組小鼠灌胃給予葡萄糖后血糖逐漸升高,到0.5h達(dá)到最高峰(P<0.01)。與模型對(duì)照組比較,灌胃給予葡萄