臨床分子生物學(xué)檢驗學(xué)技術(shù)

臨床分子生物學(xué)檢驗學(xué)技術(shù)【名詞解釋】基因組：是一個細(xì)胞或一種生物體的整套遺傳物質(zhì)，包括基因和非編碼DNA。單核苷酸多態(tài)性(SNP)：主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNADNA串聯(lián)重復(fù)序列，尤其是基因編碼序列或側(cè)翼序列的三核苷酸重復(fù)次數(shù)增加所引變效應(yīng)，所以被稱為動態(tài)突變。限制性片段長度多態(tài)性(RFLP):是依據(jù)不同個體基因組的限制性內(nèi)切酶的酶切位DNA增反響的模板。內(nèi)含子(intron)：斷裂基因中不編碼的間隔序列稱為內(nèi)含子，內(nèi)含子是在mRNA被轉(zhuǎn)錄后的剪接加工中去除的區(qū)域。mRNA的區(qū)域。要對參與雜交反響的核酸分子進(jìn)展標(biāo)記，這一段被標(biāo)記的核酸分子就是探針。酸形成雙鏈雜交體的過程稱作核酸分子雜交。分布，對基因序列及功能進(jìn)展大規(guī)模、高通量的爭論。陣列，以獲得蛋白質(zhì)的表達(dá)、構(gòu)造、功能和相互作用的信息。檢測每個探針分子的雜交信號強度，進(jìn)而獵取樣品分子的數(shù)量和序列信息?；^程中高度穩(wěn)定，對細(xì)胞無害，而且在把握細(xì)胞生長和分化中起重要作用。抑癌基因(anti-oncogene)：為一類可以編碼對腫瘤形成起阻抑作用的蛋白質(zhì)的基因，正常狀況下抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞分化。最正確條件下的變異(OCV)：是指在某一試驗室內(nèi)，在最抱負(fù)和最恒定的條件下，到達(dá)的周密度的最高水平。常規(guī)條件下的變異(RCV)：是指在某一試驗室內(nèi)常規(guī)條件下，對同一質(zhì)控品進(jìn)展起的疾病。鏈及能量代謝障礙所致的以腦和肌肉受累為主的多系統(tǒng)疾病。肽段質(zhì)量圖譜，呈現(xiàn)獨特的指紋特征。單核苷酸多態(tài)性，從中篩選出與疾病相關(guān)的位點。Tm特點設(shè)計的一種檢測核酸突變和多態(tài)性的技術(shù)。PCRDNADNAPCR：是對靶DNA21物。(通常設(shè)計兩對引物)過的循環(huán)次數(shù)?！咎羁疹}】一級構(gòu)造的完整性)；二是盡可能(排解其他分子的污染，保證核酸樣品的純度)。在PCR反響中,Mg++是個至關(guān)重要的因素，濃度(過低)會降低酶的活性，濃度(過高)又會導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。用于核酸雜交的一般硝酸纖維素膜最大的優(yōu)點是(本底低交信號，缺點是(脆性大)易裂開，且對<500bp整個核酸雜交反響主要由(預(yù)雜交)、(雜交)、(洗脫)三個步驟組成。步的固定，常用的固定方法是(烘烤)、(紫外線固定)和(堿固定)?！竞喆痤}】一、原癌基因激活機(jī)制：①點突變②易位激活③原癌基因擴(kuò)增④癌基因甲基化的程度降低二、抑癌基因失活方式：DNARb、p53、WT1。DNA達(dá)，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。三、病毒病的檢出策略：染以及被何種病毒感染，是快速診斷病毒病的首選方法。分析。四、細(xì)菌感染的檢出策略：五、PCR列互補。20~30二級構(gòu)造:兩條引物自身或引物之間一般不應(yīng)存在互補序列，避開形成二級構(gòu)造或引物二聚體，影響引物與模板的正確結(jié)合。4.堿基分布:引物中的四種堿基應(yīng)隨機(jī)分布、組成平衡，避開消滅嘌呤嘧啶堿基積存。TmTm2~5°C。3”端的幾個堿基應(yīng)與模板嚴(yán)格配對，不能進(jìn)展任何化學(xué)修飾。同時引物3”端最終一個堿基最好不落在密碼子的5”端可加修飾成分，如酶切位點、突變位點等。六、水解探針技術(shù)TaqMan探針原理反響體系除了有一-對引物外,還需要一條熒光素標(biāo)記的探針，探針的5”標(biāo)記熒Q。依據(jù)熒光共振能量傳遞(FRET)R，TaqDNATaqDNA基團(tuán)的抑制而放射出熒光，儀器的檢測系統(tǒng)便可檢測到熒光信號。七、簡述探針的種類和優(yōu)缺點cDNA目前應(yīng)用最為廣泛的一種探針.基因組探針:從基因組文庫里篩選得到一個特定的基因或基因片段的克隆后，大量擴(kuò)增,純化，切取插入片段，分別純化為探針.DNA酸片段作為探針.RNARNARNA八、蛋白質(zhì)芯片及原理原理:將的蛋白質(zhì)固定在經(jīng)特別化學(xué)處理的固相載體上，依據(jù)這些生物分子從而檢測未知蛋白質(zhì)的表達(dá)水平和構(gòu)造。九、核酸的分別純化步驟對后續(xù)的試驗尤為重要。因而，分別純化核酸應(yīng)排解其他分子的污染,并保證核酸構(gòu)造的完整性。目前核酸的分別純化主要包括4個步驟:①制備細(xì)胞及裂開細(xì)胞;②消化蛋白質(zhì)，去除與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)、多糖及脂類等生物大分子;③去除其他不需要的核酸分子;④沉淀核酸，去除鹽類、有機(jī)溶劑等雜質(zhì)。十、雙向凝膠電泳原理雙向凝膠電泳(two-dimensionalelectrophoresis2-DE是利用蛋白質(zhì)的電荷數(shù)和分電泳(iso-electricfocusing,IEF)pH有不同電荷的蛋白質(zhì)分別形成區(qū)帶。將第一向電泳凝膠放入其次向電泳的蛋白質(zhì)。十一、16SrRNA基因序列分析鑒定細(xì)菌原理及優(yōu)點細(xì)菌16SrRNA基因構(gòu)造特征：16SrRNA基因編碼原核生物核糖體小亞基rRNA(16SRNA),長度約1500bp,存在于全部細(xì)菌及衣原體、立克次體、支原體、1011無差異；可變區(qū)因細(xì)菌而異，變異程度與細(xì)菌的系統(tǒng)發(fā)育親熱相關(guān)。2.16SrRNA基因序列分析鑒定細(xì)菌原理：16SrRNA基因被稱為細(xì)菌的“分子化3得針對該基因的分子生物學(xué)檢測具有較高的靈敏度;②多信息:由可變區(qū)和保守PCR炎及慢性前列腺炎等細(xì)菌感染性疾病的檢測。十二、熒光原位雜交技術(shù)(FISH)技術(shù)的原理FISH測，再用與熒光素分子耦聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異性結(jié)合，來檢測DNA記好的核酸探針變性，然后與被檢標(biāo)本上已變性的靶核酸在退火溫度下進(jìn)展復(fù)不變的狀況下，對待檢靶核酸序列進(jìn)展定位、定性和相對定量分析。十三、DNA芯片的原理和應(yīng)用:①DNADNADNA，RNA②應(yīng)用:在腫瘤基因表達(dá)譜差異爭論、基因突變、基因測序、基因多態(tài)性分析、機(jī)制爭論等供給了有力工具。基因表達(dá)分析。c.疾病診斷。f.預(yù)防醫(yī)學(xué)。十四、α珠蛋白生成障礙性貧血分類十五、原核生物基因組特征1.原核生物基因組較小原核生物的類核構(gòu)造原核生物的操縱子原核生物的構(gòu)造基因具有編碼同工酶的基因含有可移動的DNA序列十六、病毒基因組的特征1.基因組的堿基組成基因組的核酸類型基因組中有重疊基因基因組中具有操縱子構(gòu)造基因組的非編碼區(qū)少基因組的重復(fù)序列少基因可連續(xù)也可連續(xù)基因組是單