小檗堿、地西他濱去甲基化調(diào)控急性髓系白血病細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥作用及其機(jī)制探討的開題報告

小檗堿、地西他濱去甲基化調(diào)控急性髓系白血病細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥作用及其機(jī)制探討的開題報告一、研究背景急性髓系白血?。╝cutemyeloidleukemia,AML）是一種惡性腫瘤，主要表現(xiàn)為造血干細(xì)胞異常增殖和分化障礙，導(dǎo)致正常骨髓細(xì)胞失去功能，造成全身性血液和免疫系統(tǒng)障礙。近年來，雖然治療手段逐步進(jìn)步，但由于細(xì)胞逆轉(zhuǎn)耐藥的出現(xiàn)，使得治療的效果有限。因此，尋找能夠逆轉(zhuǎn)耐藥的藥物成為了目前研究的重點(diǎn)。小檗堿是一種從黃柏中提取的生物堿，已被證明對人體有多種藥理活性，包括抗腫瘤、抗炎、抗氧化等作用。地西他濱是一種嘌呤類似物，已被廣泛用于急性白血病和其他癌癥的化療。近年來的一些研究表明，小檗堿和地西他濱去甲基化可能逆轉(zhuǎn)了某些癌細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥性。但是，這兩種藥物在逆轉(zhuǎn)AML細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥方面的效力和機(jī)制仍未得到充分探索。因此，本研究旨在探討小檗堿和地西他濱去甲基化對AML細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥作用及其機(jī)制。二、研究目的本研究的主要目的是探討小檗堿和地西他濱去甲基化對AML細(xì)胞逆轉(zhuǎn)耐藥的作用和機(jī)制，具體包括以下幾個方面：1.研究小檗堿和地西他濱去甲基化是否能夠逆轉(zhuǎn)AML細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥。2.研究小檗堿和地西他濱去甲基化是否能夠影響AML細(xì)胞生長抑制和細(xì)胞周期。3.分析小檗堿和地西他濱去甲基化對AML細(xì)胞的凋亡、DNA甲基化和去甲基化的影響。4.探討小檗堿和地西他濱去甲基化對AML細(xì)胞中ATP結(jié)合盒家族轉(zhuǎn)運(yùn)子（ABCtransporter）和蛋白酶體依賴遞送系統(tǒng)（proteasomal-dependentdeliverysystem）的影響。三、研究方法1.細(xì)胞株和試劑本研究將選用人類AMLTHP-1細(xì)胞系和HL-60細(xì)胞系。小檗堿和地西他濱將通過化學(xué)合成、純化及質(zhì)量檢測得到。2.細(xì)胞培養(yǎng)將THP-1和HL-60細(xì)胞分別培養(yǎng)在RPMI1640培養(yǎng)基中，加入10%加熱滅菌的胎牛血清和1%青霉素-鏈霉素。將細(xì)胞置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，5%CO2條件下培養(yǎng)。3.藥物逆轉(zhuǎn)耐藥性實(shí)驗(yàn)按照之前文獻(xiàn)報道的方法，制備出逆轉(zhuǎn)白血病藥物敏感細(xì)胞株和耐藥細(xì)胞株。將THP-1和HL-60的敏感細(xì)胞株分別加入不同濃度的小檗堿和地西他濱去甲基化，觀察細(xì)胞存活率。4.細(xì)胞周期和生長抑制實(shí)驗(yàn)利用細(xì)胞流式儀檢測小檗堿和地西他濱去甲基化對AML細(xì)胞周期的影響。同時，采用CCK-8法測定細(xì)胞的增殖能力和生長抑制。5.凋亡、DNA甲基化和去甲基化實(shí)驗(yàn)細(xì)胞凋亡將采用染色體懸浮試驗(yàn)，并借助熒光染色體和凋亡物質(zhì)檢測。DNA甲基化和去甲基化的試驗(yàn)將使用熒光法進(jìn)行檢測。6.ABCtransporter和蛋白酶體依賴遞送系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)采用Westernblotting和Real-timePCR檢測兩類蛋白的變化。四、研究意義本研究將有助于探索小檗堿和地西他濱去甲基化對AML細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥作用及其機(jī)