大腸菌群的檢測

會(huì)計(jì)學(xué)1大腸菌群的檢測大腸菌群的存在

早在19世紀(jì)末就有人用檢查大腸桿菌的辦法來確定水中有無傷寒沙門氏菌。水受到沙門氏菌的污染，有時(shí)水中該菌的數(shù)量很少，不易直接檢查出來。若水中檢出一定數(shù)量的大腸桿菌，則說明水已被糞便污染

正常糞便中的細(xì)菌種類很多，但符合理想指標(biāo)菌條件和特性的細(xì)菌主要有3類群，即大腸桿菌、糞鏈球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌。在糞便中大腸桿菌數(shù)量最多，每克糞便中可達(dá)30億個(gè)。大腸桿菌容易引發(fā)的疾病：腸道外感染■多為內(nèi)源性感染，以泌尿系感染為主，如尿道炎膀胱炎、腎盂腎炎。也可引起腹膜炎、膽囊炎、闌尾炎等。嬰兒、年老體弱、慢性消耗性疾病、大面積燒傷患者，大腸桿菌可侵入血流，引起敗血癥。早產(chǎn)兒，尤其是生后30天內(nèi)的新生兒，易患大腸桿菌性腦膜炎。急性腹瀉■某些血清型大腸桿菌能引起人類腹瀉。其中腸產(chǎn)性大腸桿菌會(huì)引起嬰幼兒和旅游者腹瀉，出現(xiàn)輕度水瀉也可呈嚴(yán)重的霍亂樣癥狀。腹瀉常為自限性，一般2～天即愈，營養(yǎng)不良者可達(dá)數(shù)周，也可反復(fù)發(fā)作。腸致病性大腸桿菌是嬰兒腹瀉的主要病原菌，有高度傳染性，嚴(yán)重者可致死。細(xì)菌侵入腸道后，主要在十二指腸、空腸和回腸上段大量繁殖。此外，腸出血性大腸桿菌會(huì)引起散發(fā)性或暴發(fā)性出血性結(jié)腸炎，可產(chǎn)生志賀氏毒素樣細(xì)胞毒素。檢樣稀釋乳糖膽鹽發(fā)酵劑培養(yǎng)（36+1℃），（24+2）h產(chǎn)氣伊紅美籃瓊脂平板培養(yǎng)（36+1）℃，（24+2）h乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)（36+1℃）（24+2）h不產(chǎn)氣大腸菌群陰性報(bào)告革蘭氏染色革蘭氏陰性無芽孢桿菌革蘭氏陽性大腸菌群陰性報(bào)告產(chǎn)氣不產(chǎn)氣大腸菌群陽性報(bào)告大腸菌群陰性報(bào)告測定大腸菌群檢驗(yàn)常

器材

測定大腸菌群多用培養(yǎng)基和器材主要有單料乳糖膽鹽，伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB），EC肉湯，磷酸鹽緩沖溶液蘭氏染色液，恒溫培養(yǎng)箱生理鹽水，革恒溫水浴鍋天平，顯微鏡，均質(zhì)器或乳體溫度滅菌平皿（直徑90mm），試管，廣口瓶或接種針，玻璃珠，三角瓶，吸管，載玻片酒精燈，試管架。一.檢樣稀釋

取樣及稀釋方法與菌落總數(shù)檢驗(yàn)方法相同，做成均勻稀釋液。同一稀釋度在菌落總數(shù)測定的同時(shí)接種于乳糖膽鹽復(fù)發(fā)酵管。1)以無菌操作取檢樣25mL（g），放于225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)置適量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨制成1：10的均勻稀釋液。固體取樣在加入稀釋液后，最好置滅菌均質(zhì)器中以8000~1000r＼min的速度處理1min，制成1：10的均勻稀釋液。2用以滅菌吸管吸取1：10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有3mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖試管混合均勻，制成1：100的稀釋液。檢驗(yàn)方法另取1mL滅菌試管，按上項(xiàng)操作順序，做10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋液1次即換用1支10mL吸管。二.乳糖發(fā)酵試驗(yàn)1）根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染程度的估計(jì)，選擇3個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3管乳糖膽鹽發(fā)酵管。接種量在1mL以上者用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL及以下者用單聊乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管。置（36+1.36-1）℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)（24+2.24-2）h，如所有發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性。

經(jīng)上述所說，如有產(chǎn)氣者，將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂（EM瓊脂）平板上劃線分離，然后置（36+1

36-1

）℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18~24h后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。大腸桿菌菌落證實(shí)試驗(yàn)

挑取可疑大腸菌落1~2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌時(shí)，挑取該菌落的另一部分，接種乳糖復(fù)發(fā)酵管。置（36+1.36-1）℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)22~26H，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，證實(shí)有大腸菌群存在，即可報(bào)告為大腸菌群陽性。

大腸菌群可疑菌落的特點(diǎn)（1）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落。（2）紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落，（3）淡紫黑色，中心色澤深的菌落。注意事項(xiàng)：

1：如果平板上典型菌落甚少或均不夠典型，應(yīng)多挑菌落做證實(shí)實(shí)驗(yàn)，以免出現(xiàn)假陽性。

2：在檢驗(yàn)中應(yīng)選用伊紅美藍(lán)平板為分離培養(yǎng)基在該平板上，大腸菌落大多呈紫黑色，有金屬澤或無金屬光澤。

3：挑取菌落一定要挑取典型菌落，如無典型菌落則應(yīng)多挑取幾個(gè)，以免出現(xiàn)假陰性。

4：對未產(chǎn)氣的發(fā)酵管有疑問時(shí)，可以用收輕輕敲動(dòng)或搖動(dòng)試管，如有氣泡沿管壁上浮，既應(yīng)慮有氣體產(chǎn)生。做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)觀察。大腸菌群的存在

早在19世紀(jì)末就有人用檢查大腸桿菌的辦法來確定水中有無傷寒沙門氏菌。水受到沙門氏菌的污染，有時(shí)水中該菌的數(shù)量很少，不易直接檢查出來。若水中檢出一定數(shù)量的大腸桿菌，則說明水已被糞便污染

正常糞便中的細(xì)菌種類很多，但符合理想指標(biāo)菌條件和特性的細(xì)菌主要有3類群，即大腸桿菌、糞鏈球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌。在糞便中大腸桿菌數(shù)量最多，每克糞便中可達(dá)30億個(gè)。證實(shí)試驗(yàn)

挑取可疑大腸菌落1~2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌時(shí)，挑取該菌落的另一部分，接種乳糖復(fù)發(fā)酵管。置（36+1.36-1）℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)22~26