莨菪烷類(lèi)抗膽堿藥物的分析課件

莨菪烷類(lèi)抗膽堿藥物的分析莨菪烷類(lèi)抗膽堿藥物的分析莨菪烷類(lèi)抗膽堿藥物的分析第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)莨菪烷類(lèi)抗膽堿藥物：是由莨菪烷衍生物的氨基醇與不同有機(jī)酸縮合成酯的生物堿。如：顛茄生物堿，古柯生物堿。2021/4/272第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

莨菪烷類(lèi)抗膽堿藥物：是由莨菪烷衍生物的氨基醇與不同有機(jī)酸縮合成酯的生物堿。如：顛茄生物堿，古柯生物堿。2021/4/272第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、典型藥物2021/4/273第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)2021/4/274第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)二、主要理化性質(zhì)1.水解性

本類(lèi)藥物分子結(jié)構(gòu)中具有酯的結(jié)構(gòu)，易水解。以阿托品為例，水解生成莨菪醇和莨菪酸。2021/4/275第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)2.堿性

阿托品和東莨菪堿的結(jié)構(gòu)中，五元脂環(huán)上含有叔胺氮原子,具有較強(qiáng)的堿性,易與酸成鹽。如阿托品的pKb1為4.35。

硫酸阿托品氫溴酸東莨菪堿2021/4/276第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)3.旋光性氫溴酸東莨菪堿結(jié)構(gòu)中含有不對(duì)稱(chēng)碳原子，呈左旋體，比旋度為-24至-27，而阿托品結(jié)構(gòu)中雖然也含有不對(duì)稱(chēng)碳原子，但因外消旋化而為消旋體，無(wú)旋光性利用此性質(zhì)可區(qū)別阿托品與東莨菪堿。

硫酸阿托品氫溴酸東莨菪堿2021/4/277第二節(jié)鑒別試驗(yàn)一、托烷生物堿類(lèi)的Vital鑒別反應(yīng)二、與硫酸-重鉻酸鉀的反應(yīng)三、與生物堿顯色劑或沉淀劑的反應(yīng)四、光譜鑒別法五、色譜法六、硫酸鹽與溴化物的反應(yīng)2021/4/278第二節(jié)鑒別試驗(yàn)一、托烷生物堿類(lèi)的Vital鑒別反應(yīng)【原理】托烷生物堿水解莨菪酸發(fā)煙硝酸

三硝基衍生物KOH（C2H5OH）固體KOH有色的醌型產(chǎn)物深紫色2021/4/279第二節(jié)鑒別試驗(yàn)【反應(yīng)過(guò)程】2021/4/2710第二節(jié)鑒別試驗(yàn)【示例】ChP氫溴酸山莨菪堿的鑒別取供試品10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，黃色的殘?jiān)爬?，加乙?～3滴，加固體氫氧化粒，即顯深紫色。

2021/4/2711第二節(jié)鑒別試驗(yàn)二、與硫酸-重鉻酸鉀的反應(yīng)【原理】

本類(lèi)藥物水解后，生成的莨菪酸，可與硫酸和重鉻酸鉀在加熱的條件下，發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲醛，而逸出類(lèi)似苦杏仁的臭味。其反應(yīng)式為：苦杏仁的臭味2021/4/2712第二節(jié)鑒別試驗(yàn)三、與生物堿顯色劑或沉淀劑的反應(yīng)【原理】生物堿在酸性（堿性條件下試劑本身會(huì)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象）水溶液中可與重金屬鹽類(lèi)或大分子酸類(lèi)等沉淀試劑反應(yīng)，生產(chǎn)難溶性的鹽、復(fù)鹽、或配合物沉淀。但不同的沉淀試劑與生物堿反應(yīng)的靈敏度不同?！臼纠?/p>

阿托品+氯化汞醇試液黃色沉淀東莨菪堿+氯化汞醇試液白色復(fù)鹽沉淀2021/4/2713第二節(jié)鑒別試驗(yàn)四、光譜鑒別法（UV、IR）UV:一般通過(guò)比較藥物的λmax、λmin或吸收光譜的一致性來(lái)進(jìn)行鑒別以及吸光度或吸收系數(shù)的比值來(lái)鑒別。

IR:鑒別該類(lèi)藥物的原料藥。

五、色譜法（TLC、HPLC、GC）一般用于已知生物堿的鑒別。TCL法最常用，但應(yīng)注意，若用硅膠吸附劑，需在流動(dòng)相或固定性中加堿，使生物堿游離或中和硅膠表面的弱酸性，以防止拖尾。2021/4/2714第二節(jié)鑒別試驗(yàn)【示例】

Ch.P氫溴酸山莨菪堿注射液TLC鑒別取本品1ml，置水浴上蒸干。取殘?jiān)c消旋山莨菪堿對(duì)照品，分別加甲醇制成10mg/ml的溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一氧化鋁（中性，活度Ⅱ-Ⅲ級(jí)）薄層板上，以三氯甲烷-無(wú)水乙醇（95∶5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液-碘化鉀碘試液（1∶1）。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)位置和顏色，應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。

2021/4/2715第二節(jié)鑒別試驗(yàn)六、硫酸鹽與溴化物的反應(yīng)【原理】通過(guò)加沉淀試劑如硝酸銀等生成溴化銀沉淀或加入氯試劑生成溴溶于三氯甲烷而顯色。

【示例】氫溴酸東莨菪堿+硝酸銀溶液AgBr(白色沉淀)氫溴酸東莨菪堿+氯試液Br2

黃色或棕紅色2021/4/2716第三節(jié)特殊雜志與檢查一、氫溴酸東莨菪堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查

根據(jù)其制備工藝，本品在生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中可能引入的有關(guān)物質(zhì)可通過(guò)酸度、其他生物堿和易氧化物檢查進(jìn)行控制2021/4/2717第三節(jié)特殊雜志與檢查一、氫溴酸東莨菪堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查

1.酸度

東莨菪堿堿性很弱，對(duì)石蕊試紙幾乎不顯堿性反應(yīng)。氫溴酸東莨菪堿為強(qiáng)酸弱堿形成的鹽，通過(guò)其5%水溶液的pH值為4.0～5.5，來(lái)控制本品中的酸性雜質(zhì)。

2.易氧化物

可能雜質(zhì)為阿撲東莨菪堿、及其它含有不飽和雙鍵的有機(jī)物，他們的紫外吸收波長(zhǎng)會(huì)紅移、可使高錳酸鉀溶液褪色2021/4/2718第三節(jié)特殊雜志與檢查一、氫溴酸東莨菪堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查3.其他生物堿.因東莨菪堿在堿性條件下可以水解，生成東莨菪醇和莨菪酸，前者在水中溶解，后者生成鉀鹽在水中也能溶解，故可使瞬即發(fā)生的混濁消失。2021/4/2719第三節(jié)特殊雜志與檢查一、氫溴酸東莨菪堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查其他類(lèi)生物堿還常有TLC和HPLC法檢查。期雜質(zhì)限量判斷主要有標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法、自身稀釋對(duì)照法等方法。【示例】BP采用TLC自身稀釋對(duì)照法檢查氫溴酸東莨菪堿中其他生物堿和分解產(chǎn)物：取本品0.2g，加甲醇溶解并稀釋至10ml，為供試品溶液；精密量取1ml，加甲醇稀釋至100ml，為對(duì)照液（a）；取對(duì)照液（a）5ml，加甲醇稀釋至10ml，為對(duì)照液（b）。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以濃氨水-甲醇-丙酮-三氯甲烷（2：10:30:50）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，于105℃干燥15分鐘，冷卻后，噴碘化鉍鉀試液顯色。供試品溶液除主斑點(diǎn)及起點(diǎn)處的黃色斑點(diǎn)外，其他雜質(zhì)斑點(diǎn)的顏色與對(duì)照液（a）的主斑點(diǎn)比較不得更深（1.0％），比對(duì)照液（b）主斑點(diǎn)顏色更深的雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)不得多于1個(gè)（0.5%）。2021/4/2720第三節(jié)特殊雜志與檢查二、硫酸阿托品中有關(guān)物質(zhì)的檢查

硫酸阿托品為消旋體，無(wú)旋光性，而莨菪堿為左旋體，可以利用旋光性對(duì)莨菪堿雜質(zhì)進(jìn)行檢查。ChP用HPLC法檢查其中有關(guān)物質(zhì)，通過(guò)峰面積的比值及保留時(shí)間來(lái)控制雜質(zhì)限度。2021/4/2721第四節(jié)含量測(cè)定一、酸性染料比色法（一）基本原理（二）影響因素（三）應(yīng)用示例二、非水溶液滴定法三、高效液相色譜法2021/4/2722第四節(jié)含量測(cè)定一、酸性染料比色法（一）基本原理該法是利用堿性藥物，在一定pH條件下，可與某些酸性染料結(jié)合顯色，隨后用分光光度法測(cè)定藥物含量的方法。該法樣品用量少，靈敏度高適用于少量供試品、尤其是小劑量藥物制劑的定量分析具有一定的專(zhuān)屬性和準(zhǔn)確度2021/4/2723第四節(jié)含量測(cè)定一、酸性染料比色法HIn、In-不溶于有機(jī)相顯色2021/4/2724第四節(jié)含量測(cè)定一、酸性染料比色法（二）影響因素1.水相最佳pH的選擇

如果水相pH值過(guò)低，酸性染料幾乎仍以分子狀態(tài)存在，而不能離解成In-；如果水相pH值過(guò)高，則生物堿幾乎全部以游離堿的形式（即B）存在，（BH+In）濃度減小，有機(jī)溶劑萃取的不是離子對(duì)，而是生物堿本身。故應(yīng)選擇一個(gè)水相的最適pH值。一般根據(jù)藥物和酸性染料的pK值以及兩相中的分配系數(shù)而定。2021/4/2725第四節(jié)含量測(cè)定一、酸性染料比色法（二）影響因素

2.酸性染料及其濃度常用：溴甲酚綠(BCG)、溴麝香草酚藍(lán)（BTB）、溴甲酚紫（BCP）、溴酚蘭(BPB)、甲基橙等。中國(guó)藥典中托烷類(lèi)藥物采用溴甲酚綠作酸性染料。酸性染料的濃度對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大，只要有足夠的量即可。2021/4/2726第四節(jié)含量測(cè)定一、酸性染料比色法（二）影響因素3.有機(jī)溶劑的選擇對(duì)離子對(duì)的萃取效率高、能與離子對(duì)形成氫鍵、不與或極少與水混溶的試劑。常用的有機(jī)溶劑有：CHCl3、CH2Cl2、苯、甲苯等

2021/4/2727第四節(jié)含量測(cè)定一、酸性染料比色法（二）影響因素

4.水分的影響水相有中有過(guò)量色酸性染料，酸性染料可引入，有色，影響比色測(cè)定；且水分會(huì)使有機(jī)層渾濁，也影響比色測(cè)定。所以應(yīng)嚴(yán)防水分的混入。有機(jī)層可加入無(wú)水硫酸鈉等脫水或經(jīng)干燥濾紙、脫脂棉濾過(guò)。

5.酸性染料中有色雜質(zhì)

在加入供試品前，將緩沖液與酸性染料的混合液先用所選的有機(jī)溶劑萃取，棄去有色雜質(zhì)。2021/4/2728第四節(jié)含量測(cè)定一、酸性染料比色法（三）應(yīng)用示例利用本法可對(duì)紫外吸收弱、標(biāo)示量低的有機(jī)堿性（生物堿）藥物制劑的含量或含量均勻度進(jìn)行測(cè)量。如：硫酸阿托品片、氫溴酸東莨菪堿片、中藥材和中成藥中的生物堿成分等。2021/4/2729第四節(jié)含量測(cè)定一、酸性染料比色法【示例】硫酸阿托品片的含量測(cè)定精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液4ml，振搖提取后，靜置使分層；分取三氯甲烷液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在420nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。2021/4/2730第四節(jié)含量測(cè)定二、非水溶液滴定法

硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二級(jí)解離，生成SO42-但在非水介質(zhì)中，只顯示一元酸解離為HSO4-，即只供給個(gè)H+，所以硫酸鹽類(lèi)藥物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氫鹽，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。

【示例】硫酸阿托品測(cè)定直接滴定，反應(yīng)摩爾比為1∶1溶劑：冰醋酸、醋酐指示劑：結(jié)晶紫反應(yīng)式：(BH+)2·SO42-+HClO4→(BH+)·ClO4-+(BH+)·HSO4

2021/4/2731第四節(jié)含量測(cè)定三、高效液相色譜法離子對(duì)色譜Ion-PairHPLC【應(yīng)用范圍】在反相液相色譜條件下呈離子狀態(tài)的藥物，如有機(jī)堿類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)等色譜保留常常較弱，從而影響到它們的含量或有關(guān)物質(zhì)HPLC測(cè)定的專(zhuān)屬性和準(zhǔn)確度。調(diào)整流動(dòng)相的pH，抑制它們的解離，以改變色譜保留行為，但并不都能獲得滿意的結(jié)果。采用離子對(duì)高效液相色譜法，可以改善它們的色譜保留行為，并實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確測(cè)定。2021/4/2732第四節(jié)含量測(cè)定三、高效液相色譜法【原理】將待測(cè)組份的反離子加入流動(dòng)相中，與呈離解狀態(tài)的藥物作用，生成可逆的離子對(duì)化合物

【范圍】測(cè)定在反相色譜條件下呈離子狀態(tài)的藥物，如有機(jī)堿、有機(jī)酸類(lèi)藥物

【離子對(duì)試劑的選擇】

分析有機(jī)堿，主要采用烷基磺酸鹽陰離子對(duì)試劑（如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉）或其他鹽類(lèi)分析有機(jī)酸，主要采用季銨鹽陽(yáng)離子對(duì)試劑（四丁基氫氧化銨、四丁基溴化銨等）2021/4/2733第四節(jié)含量測(cè)定三、高效液相色譜法【影響離子對(duì)形成的條件】

離子對(duì)的種類(lèi)、性質(zhì)和濃度例：陰離子對(duì)試劑的非極性部分越大，形成的離子對(duì)分配系數(shù)越大，保留時(shí)間越長(zhǎng)（十二烷基磺酸鈉＞庚烷磺酸鈉＞戊烷磺酸鈉）流動(dòng)相的組成、pH及離子強(qiáng)度流動(dòng)相一般呈酸性，以利于有機(jī)堿藥物的離解；水相為具有適宜pH的緩沖溶液離子對(duì)試劑的濃度大約