DB3715-T 41-2023 羊肚菌液體菌種制備技術(shù)規(guī)程

65.020CCS

B

053715 DB

3715/T

—2023羊肚菌液體菌種制備技術(shù)規(guī)程 聊城市市場(chǎng)監(jiān)督管理局 發(fā)

布DB

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41—2023 本文件按照GB/T

—《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由聊城市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出、組織實(shí)施并歸口。中心、山東蒙恩現(xiàn)代有限公司。張素芳、王遠(yuǎn)亮

、趙岑、何小春、蘇靜、王鳳改、王光勇、付成龍。DB

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41—20231 范圍本文件規(guī)定了羊肚菌液體菌種制備的術(shù)語(yǔ)和定義、生產(chǎn)要求、生產(chǎn)技術(shù)和檔案管理等要求。本文件適用于羊肚菌液體菌種的制備。2 規(guī)范性引用文件文件。GB

150 壓力容器GB

5749 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB

50073 潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范NY/T

食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T

1935 食用菌栽培基質(zhì)質(zhì)量安全要求3 術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1液體菌種發(fā)酵罐

liquid

strain

fermentation

食用菌液體菌種培養(yǎng)的專(zhuān)用發(fā)酵設(shè)備，設(shè)備應(yīng)符合

GB

要求。3.2接種搶

inoculation

gun將液體菌種按無(wú)菌操作要求由發(fā)酵罐接種到固體培養(yǎng)機(jī)物料上的工具。4 生產(chǎn)要求4.1人員要求工作人員應(yīng)該保持個(gè)人衛(wèi)生，進(jìn)液體菌種發(fā)酵車(chē)間必須穿戴經(jīng)滅菌處理的工作服、口罩、鞋、帽。4.2 產(chǎn)地環(huán)境要求4.2.1 場(chǎng)所要求

NY/T

528

5749要求。4.2.2 廠房要求采用高溫高壓滅菌，在

℃，壓力約

采用高溫高壓滅菌，在

℃，壓力約

條件下保持

30

。培養(yǎng)基冷卻至常溫，在無(wú)菌條件下將

3～4

塊

2

cm

的母種菌塊接入搖瓶?jī)?nèi)。廠房設(shè)計(jì)應(yīng)符合

NY/T

要求，發(fā)酵罐菌種培養(yǎng)室應(yīng)符合

GB

50073

要求。冷卻區(qū)應(yīng)衛(wèi)生干凈、接種區(qū)應(yīng)正壓無(wú)菌、培養(yǎng)室應(yīng)能控溫、通風(fēng)。4.3 生產(chǎn)設(shè)備與設(shè)施4.3.1 生產(chǎn)設(shè)備與用具

GB

要求。應(yīng)具有備用電源。4.3.2 備、制種用的滅菌設(shè)施和常規(guī)用具。5 生產(chǎn)技術(shù)5.1 工藝流程母種制備

→

搖瓶液體菌種制備

→

發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)

→

放罐接種5.2 母種制備母種制備應(yīng)符合

NY/T

的規(guī)定。5.3 搖瓶液體菌種制備5.3.1 培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基按下列配方配制，豆粕

%，葡萄糖

2

%，磷酸二氫鉀

0.3

%，硫酸鎂

0.15

%，原料應(yīng)符合NY/T

1935

的規(guī)定。取定量的純水放入燒杯，煮沸后將上述原料按比例依次倒入燒杯中完全溶解,培養(yǎng)液，冷卻備用。5.3.2 搖瓶裝液量采用

1

000

mL

三角瓶，裝液量為

500

mL

用紗布和牛皮紙封口。5.3.3 25.3.4 35.3.5 靜置

h

后置于恒溫?fù)u床，24

℃～

℃、140

r/min～160

r/min

4

d～6

d養(yǎng)液應(yīng)澄清透明，無(wú)雜菌、無(wú)異味；鏡檢無(wú)雜菌、菌絲淺白色且色澤均勻、形態(tài)正常；菌絲球密度達(dá)70

%～80

%，菌絲球較小且均勻（菌球直徑小于

0.5

8

，均勻懸浮于液體培養(yǎng)基中，不分層。5.3.6 DB

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41—2023搖瓶液體菌種若不能及時(shí)使用，可在

0

℃～4

℃度低溫保藏不超過(guò)

10

d。5.4 發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)5.4.1 雜菌檢測(cè)接種前

2

d

應(yīng)對(duì)搖瓶液體菌種進(jìn)行檢測(cè)，用注射器吸取少量菌液注射到培養(yǎng)基斜面上，36

℃培養(yǎng)24

h5.4.2 罐體清洗及注水生產(chǎn)前，嚴(yán)格檢測(cè)罐體：內(nèi)檢與外檢，及時(shí)排查問(wèn)題，確保安全生產(chǎn)。檢查后，罐體注入純凈水，器下沿齊平。5.4.3 磨細(xì)玉米面

4

5.6

g/L，全麥粉

1.25

，白糖

5

g/L，葡萄糖

6.25

，磷酸二氫鉀

0.325

0.19

g/L，0.15

mL/L純凈水?dāng)嚢柚翢o(wú)顆粒，倒入罐內(nèi)，最后加入消泡劑。5.4.4 封罐滅菌氣壓力介于

0.2

Mpa～0.3

Mpa

124

℃～126

0.14

Mpa～0.15

60

(由外向內(nèi)關(guān))，滅菌完成。5.4.5

0.05

～0.07

氣攪拌，罐內(nèi)溫度降到

℃以下時(shí)，關(guān)閉冷水管、進(jìn)氣和排氣閥，罐體壓力保持

0.05

。5.4.6

接種前準(zhǔn)備卡環(huán)并向外拔出約

1

cm，當(dāng)排氣閥有微弱氣體排出時(shí)，關(guān)閉排氣閥，準(zhǔn)備接種。5.4.7 接種與培養(yǎng)5.4.7.1接種量接種比例為

1：800。5.4.7.2 殺菌消毒5.4.7.3 接種DB

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41—2023緩捏軟管使菌液流入罐內(nèi)，完畢后用干凈的脫脂棉對(duì)接種口內(nèi)壁清理，關(guān)閉接種口閥門(mén)。5.4.7.4 培養(yǎng)0.01

15

℃～18

℃培養(yǎng)。再培養(yǎng)

2

d～3

d

即可接種，培養(yǎng)的后

3

d，因菌液粘稠，菌絲量增加，宜適當(dāng)加大通氣量攪拌。5.4.7.5 雜菌檢測(cè)第

4

d

點(diǎn)燃托板上的脫脂棉對(duì)取樣口火焰封口。取樣完后用干凈的脫脂棉對(duì)取樣口內(nèi)壁清理。樣品在

36

養(yǎng)

24

h，無(wú)雜菌出現(xiàn)。5.5 放罐接種5.5.1 菌包培養(yǎng)料準(zhǔn)備60

%的麥粒，煮熟煮透無(wú)白芯；

%玉米芯，玉米芯顆粒大小在

0.8

cm～1

，玉米芯泡透。將煮熟的麥粒用其干重

1.5

%的輕質(zhì)碳酸鈣和

5

‰磷酸二氫鉀拌勻，浸泡過(guò)的玉米芯用其干重

2

%的輕質(zhì)碳酸鈣拌勻，再將二者拌勻，含水量以

60

%～65

%為宜。用生石灰調(diào)

pH

值到

～11

之間。5.5.2 5.5.2.1

包裝規(guī)格采用

cm×36

cm×0.5

聚丙烯袋包裝。5.5.2.2 菌包重量每包重

0.8

kg

左右。5.5.2.3 封口套環(huán)+扣蓋。5.5.3 菌袋消毒滅菌

持

60

，升溫到

℃保持

min，升溫到

121

℃，達(dá)到滅菌溫度保持

min，再燜置

30

。5.5.4 接種環(huán)境應(yīng)符合

GB

50073

要求。5.5.5 接種槍用酒精燈火焰消毒后使用。5.5.6

0.08

Mpa(送氣壓力為

氣閥微開(kāi))，霧化好，菌絲生長(zhǎng)快，接種量每包

20

～30

，每接種

1

5.5.7 DB

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41—2023培養(yǎng)溫度為

13

℃～

15

d

左右長(zhǎng)滿(mǎn)菌袋。5.5.8 5

℃～8

℃條件下可保存

d。6 檔案管理應(yīng)建立羊肚菌液體菌種生產(chǎn)記錄（見(jiàn)附錄A），定期由