實(shí)驗(yàn)二.蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)與等電點(diǎn)測(cè)定

實(shí)驗(yàn)二

蛋白質(zhì)的兩性反響與

等電點(diǎn)測(cè)定1整理ppt

了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)

掌握測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的方法實(shí)驗(yàn)?zāi)康?整理pptPCOOHNH2PCOO-NH3+PCOO-NH2PCOOHNH3+pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH<pI兼性離子

陽(yáng)離子陰離子實(shí)驗(yàn)原理3整理ppt

在等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)顆粒上的凈電荷為零，缺乏同電相斥的因素，蛋白質(zhì)溶解度最小，最容易析出沉淀

維持蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素：外表電荷、水化膜4整理ppt

本實(shí)驗(yàn)配制了各種不同pH值的緩沖液，沉淀出現(xiàn)最多的緩沖液pH值即為酪蛋白的等電點(diǎn)5整理ppt實(shí)驗(yàn)器材與試劑

大試管、滴管、刻度吸量管

0.5％酪蛋白醋酸鈉溶液

0.01％溴甲酚綠指示劑(指示范圍:

pH3.8-5.4)

0.02MHCL溶液、0.02MNaOH溶液

0.01M醋酸溶液、0.10M醋酸溶液、

1.00M醋酸溶液6整理ppt蛋白質(zhì)的兩性反響〔1〕實(shí)驗(yàn)步驟取一干凈試管酪蛋白液10滴溴甲酚綠指示劑3滴觀察溶液顏色并解釋現(xiàn)象7整理ppt蛋白質(zhì)的兩性反響〔2〕滴加0.02MHCL溶液邊滴加邊混勻有最大沉淀產(chǎn)生，觀察溶液顏色變化至沉淀消失，觀察溶液顏色并解釋現(xiàn)象繼續(xù)滴加0.02MHCL溶液邊滴加邊混勻8整理ppt蛋白質(zhì)的兩性反響〔3〕繼續(xù)滴加0.02MNaOH溶液邊滴加邊混勻有最大沉淀產(chǎn)生，觀察溶液顏色變化至沉淀消失，觀察溶液顏色并解釋現(xiàn)象繼續(xù)滴加0.02MNaOH溶液邊滴加邊混勻9整理ppt

溶液呈藍(lán)色蛋白質(zhì)的兩性反響(1)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

酪蛋白溶液呈堿性(pH﹥5.4)，使溴甲酚綠指示劑顯藍(lán)色10整理ppt[H+]，沉淀蛋白質(zhì)的兩性反響(2)

出現(xiàn)最大量沉淀時(shí),說(shuō)明到達(dá)了酪蛋白的等電點(diǎn)溶液由藍(lán)色變成淺綠色〔3.8﹤pH﹤5.4〕11整理ppt

繼續(xù)加酸，[H+]繼續(xù)增大，pH＜pI。酪蛋白所帶正電荷不斷增加，同電相斥，沉淀溶解

沉淀完全溶解時(shí)，溶液顯黃色(pH﹤3.8)12整理ppt[OH-]，沉淀蛋白質(zhì)的兩性反響(3)

出現(xiàn)最大量沉淀時(shí),說(shuō)明到達(dá)了酪蛋白的等電點(diǎn)溶液由黃色變成淺綠色〔3.8﹤pH﹤5.4〕13整理ppt

繼續(xù)加堿，[OH-]繼續(xù)增大，pH﹥pI。酪蛋白所帶負(fù)電荷不斷增加，同電相斥，沉淀溶解

沉淀完全溶解時(shí)，溶液顯藍(lán)色(pH﹥5.4)14整理ppt結(jié)論1：

酪蛋白的等電點(diǎn)在pH3.8-5.4之間pH=pI時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度最小

蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)15整理ppt取7支同樣規(guī)格的枯燥試管，精確參加各試劑試管號(hào)碼1234567蒸餾水2.43.2—3.01.52.753.381.00M醋酸1.60.8—————0.1M醋酸——4.01.0———0.01M醋酸————2.51.250.62pH3.53.84.14.75.35.65.9

酪蛋白等電點(diǎn)的測(cè)定注：?jiǎn)挝痪鶠閙L16整理ppt

向每個(gè)試管中各加0.5%酪蛋白溶液20滴，加一管，立即混勻一管

靜置30分鐘后，以0、+、++、+++、++++表示各管的混濁度，并指出哪一種pH是酪蛋白的等電點(diǎn)17整理ppt1234567沉淀量0++++++++++00

酪蛋白等電點(diǎn)的測(cè)定1234567實(shí)驗(yàn)結(jié)果18整理ppt結(jié)論2：4號(hào)試管沉淀量最多

說(shuō)明4號(hào)管溶液的pH值為酪蛋白的等電點(diǎn)，即pI=4.7

什么是蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)？在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)溶液為什么容易發(fā)生沉淀？思考題20整理ppt實(shí)驗(yàn)工程實(shí)驗(yàn)原理