氨基酸分析儀規(guī)范

1本規(guī)程適用于食品安全、醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢驗和飼料監(jiān)察等分析用氨基酸分析儀(以下簡稱儀器)的首次檢定、后續(xù)檢定和使用中檢驗。氨基酸分析儀是采用陽離子交換色譜法對氨基酸進行分離，并進行定性和定量分析的儀器。樣品中的蛋白質(zhì)經(jīng)鹽酸水解，其產(chǎn)物經(jīng)離子交換色譜柱分離，分離出的單個氨基酸組分與茚三酮試劑反應(yīng)，生成紫色化合物，用可見光檢測器測量其在570nm的吸光度(脯氨酸和羥脯氨酸在440nm測量),與標準溶液的吸光度比較，即可計算出樣品中氨基酸的含量。氨基酸分析儀的基本原理圖見圖1。衍生單元圖1氨基酸分析儀分析原理圖氨基酸分析儀的主要計量性能應(yīng)符合表1的要求。2序號技術(shù)指標流量設(shè)定值誤差2色譜柱分離度(峰高分離度)31)基線噪聲2)基線系移3檢測陽不大于1nmN(S/N=2,組氨酸)41)性測量于1.5%(天冬氡酸和精氨酸)定量測3.0%(氨酸印組氨酸)3)線性教γ不小于0.295儀器上立有議器名稱、型儀器應(yīng)主影句正常工作的摘4.2工作正章性4.2.1儀器代路心使用不銹鋼數(shù)字顯示清晰。(PEJ乙烯等管方，上規(guī)定的壓5.1檢定條件5.1.1檢定環(huán)境5.1.1.1室內(nèi)溫度為15℃~30℃,濕度為30%～80%RH。室內(nèi)清潔，無易燃、易爆和腐蝕性氣體，排風良好。5.1.1.2儀器周圍無強烈的機械震動和電磁干擾。5.1.2檢定設(shè)備5.1.2.1分析天平：最小分度不大于0.1mg;5.1.2.2秒表：最小分度不大于0.1s;5.1.2.3游標卡尺：最小分度不大于0.02mm;5.1.2.4容量瓶等玻璃器皿。5.1.3標準物質(zhì)35.2檢定項目檢定項目見表2。檢定項目首次檢定后續(xù)檢定1外觀及工作正常性檢查十十十2十3十4分離度十十十5基線噪聲十+6十7十十8定性河量重復性十十9定章測量重復性十十十十位位病性S從檢測器出口用氧先清性、平燥、稱重過的容量瓶收集沉20min～30min,在分析大飛上稱重，按式(1)計算流顯實測住下。(mL/min)。每測完一次，改變泵流量，幾公鐘后再快復礎(chǔ)盾迅之值，待穩(wěn)定后按上述方法收集流動相、稱重。重復測量3次，3次結(jié)果做亞均值為流量實值。按式(2)、式(3)計算泵1式中：W?—--容量瓶+流動相的質(zhì)量，g;Pr——實驗溫度下流動相的密度，g/4式中：Fm——3次測量流量的算術(shù)平均值，mL/min;泵1流量測量結(jié)束后，啟動泵2,按上述方法測量泵1和泵2的流量，由當時測得的緩沖溶液B1與茚三酮混合液的密度及流動相搜集時間，按式(1)計算泵1加泵2的流量，扣除泵1的流量，即得泵2的流量，重復測量3次，按式(2)、式(3)計算泵按儀器推薦的測量條件設(shè)置各項參數(shù)，啟動儀器待穩(wěn)定后，由進樣系統(tǒng)注入氨基酸標準溶液(濃度為5nmol/mL～20nmol/mL)做色譜分析，由色譜圖測量的數(shù)據(jù)按式(Leu)-異亮氨酸(Ile)的分離度Rn。H——兩相鄰色譜峰交點到基線的距離，mm。5.3.4基線噪聲和漂移按儀器推薦的測量條件設(shè)置儀器參數(shù)，啟動泵1(只用緩沖溶液B1)和泵2,待儀器穩(wěn)定后記錄基線60min,取一段時間基線峰-峰值表示基線噪聲，以mV(或μV)表示；60min內(nèi)基線偏離起始點的值為基線漂移，以mV(μV)/60min表示。5.3.5檢測限在5.3.3的測量條件下，測量濃度為5nmol/mL左右的氨基酸標準溶液3次，記錄色譜圖，由組氨酸(His)峰高平均值和基線噪聲值，按式(5)計算檢測限C。H組——組氨酸色譜峰高的平均值，mV或mm;5.3.6定性、定量測量重復性在5.3.3的測量條件下，重復測量氨基酸標準溶液(濃度同5.3.3)至少7次，由測量結(jié)果按式(6)計算天冬氨酸(Asp)和精氨酸(Arg)保留時間的重復性及甘氨酸第i次測量的色譜峰保留時間(或峰面積);5X—-色譜峰保留時間(或峰面積)的n次測量平均值。在儀器正常的工作條件下，測量4～5個濃度(至少在兩個數(shù)量級范圍內(nèi))氨基酸標準溶液，每個濃度重復測量3次，計算甘氨酸和賴氨酸峰面積的算術(shù)平均值，標準溶液濃度對峰面積平均值的線性相關(guān)系數(shù)γ不小于0.995。按規(guī)程的條款檢定，達到規(guī)定技術(shù)要求的儀器為合格儀器，發(fā)給檢定證書；達不到規(guī)定技術(shù)要求的儀器為不合格儀器，發(fā)給檢定結(jié)果通知書，并注明不合格項6檢定證書(內(nèi)頁)參考格式A.1外觀及工作正常性檢查：A.3色譜柱分離度：A.4檢測器A.5整機性能定量測量重復性(RSD?):A.6檢定結(jié)論：7檢定結(jié)果通知書(內(nèi)頁)參考格式8附錄C檢定記錄參考格式氨基酸分析儀檢定記錄檢定日期室內(nèi)溫度相對濕度儀器型號檢定人員生產(chǎn)廠家核驗人員設(shè)備編號證書編號泵編號1流動相密度FHC.4基線噪聲C.5基線漂移C.6檢測限組氨酸峰高：C.7測量重復性序號1234567C.8儀器線性測量結(jié)果123平均附錄D流動相密度測量方法D.1緩沖溶液B1的密度準確稱量(準確到0.1mg)一個清潔、干燥、體積校準過的5mL容量瓶的質(zhì)量記為m,從緩沖溶液B1瓶中取出B1溶液注入容量瓶中恰好到刻度(注意不要將流動相沾到容量瓶刻線以上),在天平上稱重，記為m?,按下式計算緩沖溶液B1的密度，重復3次，取平均值。D.2緩沖溶液B1和茚三酮混合溶液的密度在天平上準確稱量一個清潔、干燥、體積校準過的5mL容量瓶的質(zhì)量，記為m?準確到0.1mg。按儀器說明書設(shè)置常用的泵1和泵2流量