大豆?jié)饪s磷脂變色檢測方法的研究

大豆?jié)饪s磷脂變色檢測方法的研究

重要的顯示之一是大豆的濃縮磷脂顏色。在以往的工作中,常以目視對比法進行比色分析,其缺點:標準樣(參照物)因受自然條件的影響及存放時間、溫度、玻璃試管壁厚、透光度等諸多因素和人們辨色能力的限制,往往出現(xiàn)失真率高,誤差較大。利用磷脂加特納色標與羅維朋色值之間存在一種顏色語言的相關(guān)性,以求得磷脂加特納色標級別,實踐證明羅維朋色值可以滿足磷脂比色的要求。此文結(jié)合自己的實踐經(jīng)驗,就以下磷脂比色過程(磷脂加特納色標與羅維朋比色計色值之間對照、對比)和實驗方法,介紹給大家供同行們參考。1原料組成產(chǎn)物純凈的大豆磷脂在室溫下,本是白色的蠟狀固體,而大豆?jié)饪s磷脂是褐色的,其色澤來源:一是由一部分原料帶入的,像胡蘿卜素、葉綠素等;二是原料在加工及磷脂濃縮過程中生成的褐色物質(zhì);三是原料及產(chǎn)品磷脂在儲存時與空氣接觸、或在陽光照射下,不穩(wěn)定易氧化,酸值升高而引起色澤加深,或在儲存過程中,由某些微生物的代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的顏色和某些菌體帶有的顏色。2大豆?jié)饪s磷脂的制備機理大豆?jié)饪s磷脂產(chǎn)品的溶解度大小、透明度高低,均對比色分析有著不同程度的影響。大豆?jié)饪s磷脂中有一定量的蛋白質(zhì)-碳水化合物和約50%不飽和脂肪酸以及低含量的水分、正己烷不溶物、磷脂酸、色素等。蛋白質(zhì)-碳水化合物受熱后,發(fā)生的褐色反應(yīng)(美拉德反應(yīng))不僅可以導(dǎo)致大豆?jié)饪s磷脂色澤、風(fēng)味發(fā)生變化,而且變性的蛋白質(zhì)由“溶膠性”變?yōu)椤澳z性”,促使正己烷不溶物含量增多,磷脂溶解度下降。另外,蛋白質(zhì)-碳水化合物結(jié)構(gòu)中有較強的極性基團(氨基、羥基和多羥基化合物)極易溶于水,不溶或難溶于有機溶劑(苯、乙醚類)。大豆?jié)饪s磷脂中過多的水分和正己烷不溶物(磷脂膠和固體顆粒雜質(zhì))的存在,也是導(dǎo)致磷脂溶解度降低的主要原因。在比色時,會使比色溶液出現(xiàn)渾濁、透明度降低、有沉淀物等。而磷脂溶解度高低,在很大程度上取決于原料加工條件和磷脂加工精度。一般大豆?jié)饪s磷脂水分控制在1.0%以下,超過這個指標時產(chǎn)品會發(fā)生渾濁,同時產(chǎn)品水分小于1.0%,水的活度較低,也降低了微生物在磷脂體系中生存的可能性。產(chǎn)品中的雜質(zhì)應(yīng)控制在小于0.3%。3材料和方法3.1加特納色標,2.大豆?jié)饪s磷脂(福建康宏公司提供),理化指標:水分0.8%,含油36.0%,丙酮不溶物62.50%,乙醚不溶物0.03%,色澤(加特納色標)12,酸值25mgKOH/g,黏度11000。硫酸、重鉻酸鉀、苯均為分析純。3.2限公司限公司W(wǎng)SC-2型羅維朋比色計(上海精密科學(xué)儀器有限公司);AL104型天平(0.1mg)(梅特勒-托利多集團),具塞比色管25mL,燒杯50mL,容量瓶100mL等。3.3測量3.3.1原理利用比色液中的物質(zhì)顏色深淺與其濃度(含量)的關(guān)系,采用羅維朋比色計原理和方法,運用色值單位來表達磷脂的顏色。3.3.2羅維朋色槽+加特納色標液法按表1中加特納色標級別,分別稱取重鉻酸鉀數(shù)克(精確0.0001g),置于100mL潔凈干燥的容量瓶中,加少量濃硫酸,加塞搖動,使重鉻酸鉀顆粒完全溶解后,再加濃硫酸至刻度,搖勻。即得加特納色標溶液,色標級別分別為7、8、9、10、11、12、13、14。將新配制的加特納色標溶液,按其顏色的深淺,選用不同規(guī)格的羅維朋色槽(詳見表1),分別置于比色槽中(小心輕拿、輕放),液面距上口約5mm高度,放入比色箱槽內(nèi),關(guān)閉活動蓋,先固定黃色玻璃片(以黃定紅),然后開燈,再依次配入不同色值的紅色玻璃片,直至觀察管視場中玻璃片和色標溶液的顏色完全相同為止。所測得不同加特納色標下的黃、紅玻璃片色值(羅維朋單位),即為加特納色標下的羅維朋(單位)標準色值(見表1)。3.3.3被測樣品的色值精確稱取混勻試樣5.0000g(精確0.0002g),于50mL燒杯中,用少量苯試劑溶解后(反復(fù)沖洗),無損失地移入100mL容量瓶中,再用苯試劑稀釋至刻度,充分搖勻,按樣品液色澤深淺、結(jié)合感觀色澤,分別選定相應(yīng)的比色槽,將樣品液置于比色槽中,至上口5mm高度,放入比色箱槽內(nèi),關(guān)閉活動蓋,進行色澤分析(先固定黃色玻璃片,參考附表中黃35或70),開啟電源觀察視場,左半部顯示樣品顏色,右半部顯示標準玻片的顏色,根據(jù)需要依次配入不同色值的紅色玻璃片,直到左右兩部分的顏色完全一致,此時儀器槽板顯示窗顯示的數(shù)值,即為被測樣品的色值(羅維朋)。4加特納色標法大豆?jié)饪s磷脂加特納色標級別(7～14)分別進行羅維朋比色,色標與色值的對比、對照檢測結(jié)果匯總于表1中。(1)從表1中可見,濃縮大豆磷脂加特納色標與羅維朋色值之間,存在一種較明顯的顏色相關(guān)性,因此可利用磷脂加特納色標為基礎(chǔ),確定羅維朋色值指標。以試樣與苯試劑混合液,進行羅維朋比色計色值的測定,所得色值再與表1中加特納色標對照查找該樣品加特納色標級別。此方法,具有一定的實用性和互換性。(2)在測定過程中,當(dāng)一種或兩種玻璃片調(diào)到最接近樣品顏色時,如果其顏色比樣品顏色深,可利用調(diào)入樣品光路中的中性片,來減弱樣品亮度(其數(shù)值為樣品亮度數(shù)據(jù))。這里必須明確指出,當(dāng)3種玻璃片(黃、紅、蘭)被用于比色時,中性灰片不能再使用了,只能調(diào)節(jié)紅色示值的最小玻片的方法,來實現(xiàn)顏色的匹配。試驗結(jié)果允許差0.2,以試驗結(jié)果較高的色度值作為最終測定結(jié)果。(3)在檢測過程中,羅維朋黃色為固定值、紅色為檢測值,當(dāng)試樣色階介于二者之間,如高于8、低于9,則用色標8～9來表示。從表1中可以看出,加特納色標7～9、10～14之間,使用比色槽大小規(guī)格不同,只因溶液的顏色及色值差別較大,難以用統(tǒng)一規(guī)格的比色槽規(guī)范起來。從目前各生產(chǎn)廠的狀況,大豆?jié)饪s磷脂,一般加特納色標都在10～13范圍內(nèi),不經(jīng)脫色較難達到9以下。(4)在操作時,樣品溶液溫度,對結(jié)果有一定影響,一般在室溫下操作,另外樣品液不能在羅維朋比色計中(比色箱)放置過久,以防比色箱內(nèi)溫度過高,樣品溶液中試劑揮發(fā)及樣品的濃縮,會影響測定結(jié)果的精度,一般在幾分種內(nèi)完成操作。5復(fù)合光的特性