人白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒使用說明書

第第頁人白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒使用說明書人白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒試驗原理本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將待測物質(zhì)和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中指標的濃度呈比例關系。試劑盒內(nèi)容及其配制：試劑盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶標板1塊板（96T）半塊（48T）塑料膜板蓋1塊半塊標準品1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）標準品稀釋緩沖液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素標記抗體1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）親和鏈酶素HRP1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）自備材料：1．蒸餾水。2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3．振蕩器及磁力攪拌器等。人白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法：1、血清操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2、血漿EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。4、組織勻漿將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液5、保存如果樣品不立即使用，應將其分成小部分70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。操作注意事項：l試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。l實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。l不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。l使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。l使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。l底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。l加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。安全性：1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。試劑盒性能：1.靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990.2.特異性：不與其它細胞因子反應。3.重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。操作步驟：1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5．每孔加入100ul的親和鏈酶素HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。9．在450nm波長處測定各孔的OD值。結(jié)果判斷與分析：1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的指標標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣