磷酸替米考星可溶性粉在雞體內(nèi)的安全性評價

磷酸替米考星可溶性粉在雞體內(nèi)的安全性評價

季美石是一種特殊的抗凝劑，具有很強(qiáng)的抗菌活性，抗藥性低，抗菌譜高。它對所有革蘭氏陽性細(xì)菌和部分革蘭氏陰性細(xì)菌、莖和螺旋體都有抑制作用，尤其是對各種支架和螺旋體的強(qiáng)烈抑制作用。該藥主要用于治療山羊、奶牛、豬、雞等動物的感染性疾病。然而,由于替米考星不溶于水,所以在獸醫(yī)臨床應(yīng)用過程中存在諸多不便,而且還可能影響其使用效率。磷酸替米考星是替米考星與3,5-二甲基哌啶反應(yīng)生成替米考星堿,再加磷酸和水后形成的。因其易溶于水,所以存在未來應(yīng)有于獸醫(yī)臨床的潛在可能性。但由于磷酸替米考星的化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變,其在體內(nèi)的吸收利用度、甚至毒性范圍均可能出現(xiàn)相應(yīng)的改變。為了客觀評價磷酸替米考星對靶動物雞的使用安全性,我們按照《獸藥注冊資料匯編2009》以及《VICH獸藥靶動物安全性研究指導(dǎo)原則概述》,特此進(jìn)行了安全性試驗研究。1材料和方法1.1材料表面1.1.1試驗藥物10%磷酸替米考星可溶性粉受試藥(批號20110401,標(biāo)示量為94.0%)由寧夏泰瑞制藥股份有限公司提供。1.1.2白羽雞場150只28日齡,體重1.5kg的AA白羽肉雞,購自海安雞場,公母兼有。按常規(guī)程序進(jìn)行飼養(yǎng)管理,試驗前飼喂不含抗菌藥物的全價飼料,自由飲水。1.1.3血凝試劑和血球分析法神州英諾華D280血液生化分析儀;日本SYS-MEXCA530全自動血凝分析儀;HORIBAABXSAS血球分析儀;德國科寶COMBISCAN500尿常規(guī)分析儀。1.2分組、給藥與給藥將150羽試驗雞隨機(jī)分為5組,每組30只。給藥前稱量體重。給藥方式為:混飲,每日1次,連用21d［6－7］。各試驗組雞分組及用藥情況見表1。1.3抗凝劑血液單次給藥的觀察給藥前,自試驗組中各分別隨機(jī)選取20只受試雞進(jìn)行采樣,包括尿樣采集5mL;血液采集(包括2mL加EDTA抗凝劑血液、2mL加枸櫞酸鈉抗凝劑血液,5mL加促凝劑血液)。給藥后第22天,自各試驗組受試雞逐只按照上述方法進(jìn)行采樣。試驗期間,每天觀察受試雞給藥后的臨床癥狀變化,包括精神狀況、活動、呼吸、采食等。樣品采集后,尿樣和加抗凝劑的血樣立刻送檢;不加抗凝劑的血樣于室溫下靜置2h后,3500r/min離心5min,取上層血清,送檢。1.4血液檢測、尿檢測和血清生化指標(biāo)的分析1.4.1s血球分析法取EDTA抗凝全血,使用HORIBAABXSAS血球分析儀檢驗紅細(xì)胞(RBC)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、血紅蛋白(HGB)、白細(xì)胞(WBC)、血小板數(shù)(PLT)等指標(biāo)［6］。1.4.2血凝指標(biāo)檢驗取枸櫞酸鈉抗凝全血,使用日本SYSMEXCA530全自動血凝分析儀檢驗血凝四項指標(biāo),即纖維蛋白原(FIB)、活化部分促凝血酶原激酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)和凝血酶原國際標(biāo)準(zhǔn)化比率(INR)等指標(biāo)［6］。1.4.3谷丙勞動指標(biāo)使用神州英諾華D280血液生化分析儀測定分離總蛋白(TP)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、尿素(Urea)、肌酐(CRE)、總膽固醇(CHO)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、Ca等指標(biāo)［8－9］。1.4.4主要指標(biāo)pro使用德國科寶COMBISCAN500尿常規(guī)分析儀測定尿液蛋白質(zhì)(PRO)、酸堿度(pH)、酮體(KET)、尿比重(SG)、膽紅素(BIL)、尿膽素原(URO)、硝酸鹽(NIT)、WBC、RBC、GLU等指標(biāo)［10－13］。1.4.5計算每例平均增重量增重:根據(jù)給藥前及試驗結(jié)束時的體重,計算每只雞的增重量,然后計算每組受試雞的平均增重量。飼料報酬:根據(jù)每組受試雞的平均增重和飼料消耗,計算每組受試雞的飼料報酬［14］。1.4.6病理組織學(xué)檢查試驗結(jié)束時,從每組受試雞中隨機(jī)選取3只雞進(jìn)行剖殺,采取心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、胰腺、眼睛、氣管、法氏囊、食管、胃、膽囊、腸(上段,中段和盲腸)、皮、肌肉以及淋巴結(jié)等組織,固定于10%中性福爾馬林溶液中,石蠟制片,HE染色,進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。1.5單因素方差分析所有試驗數(shù)據(jù)差異顯著性均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,單因素方差分析統(tǒng)計,利用SPSS16.0軟件進(jìn)行顯著性差異分析。2結(jié)果與分析2.1臨床癥狀觀察臨床癥狀觀察表明,各試驗組受試雞的進(jìn)食、飲水、行動、呼吸均正常。整個試驗過程中受試雞全部存活,未觀察到明顯的臨床不良反應(yīng)。2.2對試驗雞的細(xì)胞計數(shù)結(jié)果靶動物雞在使用10%磷酸替米考星可溶性粉前、后各不同劑量用藥組受試雞的血液常規(guī)指標(biāo)如表2所示。從表2可以看出,用藥后所有劑量組受試雞的白細(xì)胞總數(shù)均高于未用藥之前,5倍劑量組(400mg/L)和10倍劑量組(800mg/L)受試雞的白細(xì)胞總數(shù)明顯高于1倍劑量組(80mg/L)和3倍劑量組(240mg/L),但與對照組雞沒有明顯差異。說明使用10%磷酸替米考星可溶性粉后對受試雞的白細(xì)胞總數(shù)的影響不大,顯然這種差異與藥物的使用沒有直接關(guān)系。除以上白細(xì)胞總數(shù)的變化外,其他各不同劑量組受試雞的血液常規(guī)指標(biāo)在使用10%磷酸替米考星可溶性粉后基本沒有明顯的變化,或其數(shù)值均處于正常值范圍之內(nèi)。說明10%磷酸替米考星可溶性粉以10倍推薦劑量(800mg/L)以內(nèi)應(yīng)用于靶動物雞,對受試雞的血常規(guī)指標(biāo)影響不明顯。2.3對血清總蛋白指標(biāo)的影響靶動物雞在使用10%磷酸替米考星可溶性粉前、后各不同劑量用藥組受試雞的血清生化指標(biāo)檢測結(jié)果如表3所示。由表3可知,使用10%磷酸替米考星可溶性粉后,1倍(80mg/L)、3倍(240mg/L)、5倍(400mg/L)推薦劑量組受試雞的血清總蛋白指標(biāo)比空白對照組受試雞有明顯的升高,但由于這三個劑量組受試雞血清總蛋白指標(biāo)同樣也明顯高于10倍(800mg/L)劑量組試驗雞,說明這種血清總蛋白指標(biāo)的改變與10%磷酸替米考星可溶性粉的使用劑量無關(guān)。3倍和10倍劑量組受試雞的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶水平在用藥前就明顯高于空白對照組受試雞,顯然這種差異不是由于使用藥物所致。使用10%磷酸替米考星可溶性粉后,所有用藥組受試雞的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶水平均明顯高于空白對照組,似乎顯示出10%磷酸替米考星可溶性粉對肝臟有一定程度的損傷作用,不過由于其中二組受試雞的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶水平在試驗前就存在明顯的升高,因此還不能判斷為受試雞血清谷草轉(zhuǎn)氨酶水平的升高就一定與使用10%磷酸替米考星可溶性粉有關(guān)。除了上述血清生化指標(biāo)的改變之外,使用10%磷酸替米考星可溶性粉的各不同劑量用藥組受試雞相互間均沒有顯著差異,說明10%磷酸替米考星可溶性粉以10倍推薦劑量(800mg/L)應(yīng)用于靶動物雞是基本安全的,不會引起受試雞血清學(xué)指標(biāo)顯著的改變。2.4各組大鼠凝血活酶時間變化比較靶動物雞在使用10%磷酸替米考星可溶性粉前、后各不同劑量用藥組受試雞的血凝指標(biāo)檢測結(jié)果如表4所示。由表4可知,各試驗組受試雞用藥前、后的各項血凝檢測指標(biāo)除了活化部分凝血活酶時間出現(xiàn)略微降低以外,均與空白對照組受試雞沒有極顯著差異。由此可以看出,10%磷酸替米考星可溶性粉以10倍推薦劑量(800mg/L)應(yīng)用于靶動物雞后,對其血液血凝學(xué)指標(biāo)沒有明顯影響。2.5考慮受試雞在一定期內(nèi)的歷史檢查指標(biāo)靶動物雞在使用10%磷酸替米考星可溶性粉前、后各不同劑量用藥組受試雞的尿液常規(guī)檢測結(jié)果如表5所示。由表5可知,10%磷酸替米考星可溶性粉1倍劑量組的受試雞在試驗開始前的某些指標(biāo)(如白細(xì)胞、酮體、膽紅素、尿蛋白等)稍有異常,顯然這與用藥沒有直接聯(lián)系。所有受試雞用藥后尿液常規(guī)檢測指標(biāo)在10%磷酸替米考星可溶性粉使用前、后的各不同劑量組間均無顯著差異,與空白對照組受試雞相比也無明顯差異。由此可見,在10倍推薦劑量(800mg/L)范圍內(nèi)應(yīng)用10%磷酸替米考星可溶性粉于靶動物雞,對受試雞的尿液指標(biāo)基本沒有影響,其使用是安全的。2.6對飼料報酬的影響靶動物雞在使用10%磷酸替米考星可溶性粉前、后各不同劑量用藥組受試雞的增重和飼料報酬結(jié)果如表6所示。由表6可知,所有藥物使用組受試雞的增重均比對照組試驗雞有顯著提高(P<0.05),但各不同劑量用藥組受試雞之間的飼料報酬差異不顯著。由此可以說明,使用10%磷酸替米考星可溶性粉對雞具有一定的促生長作用,但無劑量依賴性。2.7組織病理學(xué)檢查試驗結(jié)束后,各不同劑量組受試雞的組織學(xué)檢查結(jié)果未見有主要組織(如肝)的明顯病理學(xué)變化。3對大鼠血清谷草芽孢的影響本試驗從血液常規(guī)檢測、血凝指標(biāo)檢測、血清生化指標(biāo)檢測、尿液常規(guī)檢測、增重及飼料報酬分析、組織病理學(xué)檢查等多方面,對以10%磷酸替米考星可溶性粉1倍、3倍、5倍、10倍劑量投服的受試雞進(jìn)行了安全性研究和評估。從試驗結(jié)果可以看出,使用1倍到10倍劑量10%磷酸替米考星可溶性粉的受試雞均未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀,血液學(xué)指標(biāo)、臨床生化指標(biāo)、尿液常規(guī)指標(biāo)等參數(shù)的也未發(fā)生顯著改變。由此可以說明,10%磷酸替米考星可溶性粉1倍(80mg/L)、3倍(240mg/L)、5倍(400mg/L)、10倍(800mg/L)推薦劑量應(yīng)用于靶動物雞是安全的。另外,使用5倍和10倍推薦劑量的10%磷酸替米考星可溶性粉后,受試雞有較明顯的增重表現(xiàn),說明10%磷酸替米考星可溶性粉在一定劑量范圍內(nèi)連續(xù)使用對雞具有一定的促生長作用,但這種對生長的促進(jìn)作用似乎沒有劑量依賴性,即受試雞的增重效果并不隨著藥物使用劑量的增加而增加。需要注意的是,使用10%磷酸替米考星可溶性粉后,所有用藥組受試雞的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶水平均明顯高于空白對照組,說明10%磷酸替米考星可溶性粉對受試雞的肝臟可能有一定程度