氨基糖苷類藥物抗生素的elsd法測定

氨基糖苷類藥物抗生素的elsd法測定

蒸發(fā)光散射檢測器（elsd）的多樣性和良好性能取決于其獨特的檢測原理：氣體將鉻線針的廢水溶液稀釋為微液滴注液。流動相在加熱和偏移的管道中蒸發(fā)。剩下的樣品在一個檢測池中被分散，并通過吸收。ELSD的響應值與樣品的質(zhì)量成正比,物理性質(zhì)類似的物質(zhì)在ELSD中的響應因子近于一致。氨基糖苷類抗生素為臨床上最常用的抗感染藥物之一,由于該類藥無特征紫外吸收,其質(zhì)量分析工作一直是難題。蒸發(fā)光散射檢測器的出現(xiàn)為上述難題的解決提供了新的途徑。目前國內(nèi)外還未見有關采用HPLC-ELSD法分析氨基糖苷類抗生素的報道。為了探索蒸發(fā)光散射檢測器在該類藥質(zhì)量分析工作中應用的可能性,本文對氨基糖苷類抗生素在蒸發(fā)光散射檢測器中的響應因子的一致性進行了考察。藥物、標準品、基準品儀器和試劑Waters510型液相色譜儀;Alltech500ELSD;天津藍珂全自動空氣凈化器;大連江申工作站;三氟醋酸,Sigma公司產(chǎn)品;水為重蒸水;甲醇,HPLC級,Sigma公司產(chǎn)品。阿米卡星(amikacin)、西索米星(sisomicin)、奈替米星(netilmicin)和依替米星(etimicin)標準品及威替米星(vertilmicin)基準品(一類新藥)均由中國藥品生物制品檢定所提供。色譜條件色譜柱:DiamonsilC18柱,150mm×4.6mm,5μm;流動相:0.2mol·L-1三氟醋酸-甲醇(94∶6);流速:0.6mL·min-1。檢測器條件:漂移管溫度110℃,氣體流速2.80L·min-1。溶液的配制精密稱取各標準品適量于100mL量瓶中,用重蒸水溶解并稀釋至刻度,使其終濃度為0.5mg·mL-1。分別取上述標準品溶液各5mL置50mL量瓶中,振蕩混勻。結(jié)果1氟醋酸-甲醇法分別用0.2mol·L-1三氟醋酸,0.2mol·L-1三氟醋酸-甲醇(90∶10,94∶6)分析混合對照品溶液(流速均為0.6mL·min-1),結(jié)果0.2mol·L-1三氟醋酸-甲醇(94∶6)效果最好,僅需30min即可將所選的5種氨基糖苷類抗生素完全分離。其典型的高效液相色譜分離圖見圖1。2溫度和載氣流速對噪聲的影響按廠家提供的檢測器條件的推薦值及優(yōu)化步驟,以0.5mV為最低可接受限度,分別對漂移管溫度、載氣流速進行優(yōu)化。實驗結(jié)果表明,當漂移管溫度降至105℃時,噪音則增至1.5mV以上,故漂移管溫度設為110℃,噪音低于0.5mV。載氣流速大于或等于2.80L·min-1時,噪音水平均在0.2mV左Mobilephase:0.2mol·L-1trifluoroaceticacid-methanol(96∶4);Flowrate:0.6mL·min-1右。根據(jù)蒸發(fā)光散射檢測器的原理載氣流速越小,形成的物質(zhì)粒子越大,相應的響應值越大,故載氣流速選擇2.80L·min-1。3數(shù)字模型取混合對照品溶液,分別進樣10,15,20,25,30和40μL(n=2)。分別以峰面積的對數(shù)(Y),進樣量(μg)的對數(shù)(X)作線性方程為amikacin:Y=1.46X+5.07,γ=0.9997;sisomicin:Y=1.51X+5.03,γ=0.9997;netilmicin:Y=1.52X+4.88,γ=1.000;etimicin:Y=1.46X+4.85,γ=0.9999;vertilmicin:Y=1.41X+4.90,γ=0.9998。4線性方程間的差異從上述線性方程中看出,響應因子差別最大的是威替米星與奈替米星。用方差分析法判別這兩個樣本的線性方程間是否有顯著性差異(張承訓,韓少梅.醫(yī)學統(tǒng)計學講義.中國協(xié)和醫(yī)科大學基礎醫(yī)學研究所.1998),結(jié)果見表1。表1結(jié)果表明,奈替米星與威替米星的回歸方程間的差異不顯著,5種氨基糖苷類抗生素在蒸發(fā)光散射器中的響應因子基本一致。蒸發(fā)光散射檢測氨基糖苷類抗生素無特征紫外吸收,很難直接用傳統(tǒng)的HPLC法(紫外檢測器)分析。用衍生化技術(shù)雖然能部分解決其質(zhì)量分析中的難題,但由于衍生化方法的實驗結(jié)果影響因素多,無法明確判斷該法檢測到的雜質(zhì)來源,限制了衍生化方法在該類藥的有關物質(zhì)檢查(或純度分析)中的應用。另外,衍生化產(chǎn)物間紫外吸收系數(shù)的差異,影響了多組分藥物相對比例測定結(jié)果的準確性。ELSD檢測器為質(zhì)量型檢測器,可準確檢測難揮發(fā)或半揮發(fā)性化合物,同時其靈敏度較示差折光檢測器高,基線平穩(wěn),能與梯度洗脫相容,更重要的是不同物質(zhì)在ELSD中的響應因子幾乎一致,使蒸發(fā)光散射檢測器成為解決無紫外吸收物質(zhì)分析難題的強有力途徑。但目前國內(nèi)外尚鮮見有關ELSD在氨基糖苷類抗生素中應用的報道。本文考察了一組氨基糖苷類抗生素(阿米卡星、西索米星、奈替米星、依替米星及一類新藥威替米星)在蒸發(fā)光散射檢測器中的響應因子,旨在考察ELSD在該類藥的有