解百憂口服液對抑郁大鼠行為及中樞神經(jīng)遞質(zhì)的影響

解百憂口服液對抑郁大鼠行為及中樞神經(jīng)遞質(zhì)的影響

解百友口服是在古代專門開發(fā)的一種中藥新制劑。它由牡丹、柴胡和其他藥物組成。具有平肝健脾解郁的功效，對治療高血壓和療效有顯著影響。本文采用多種不同的應激方法建立了穩(wěn)定的大鼠抑郁模型,并觀察解百憂口服液對抑郁模型大鼠行為及中樞神經(jīng)遞質(zhì)的影響,探討解百憂口服液的作用機理,為臨床合理用藥提供依據(jù)。實驗材料1質(zhì)量合格健康SD大鼠(清潔級)48只,♀♂各半,體重180g~210g,由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供,合格證:滬動合證字(152)號。對照組每籠飼養(yǎng)4只,其余各組每籠飼養(yǎng)1只,各組大鼠均在相同條件下,自由飲水、攝食,保持自然光照。大鼠專用飼料由阜陽穎泉康樂實驗動物飼料廠提供。2明片、藥房有限責任解百憂口服液由安徽省藥物研究所自制,批號:20000302,濃度3.15g/mL,設5、10、15g/kg三個劑量組(分別相當于臨床用量的2.5、5.0、7.5倍);鹽酸氯米帕明片,天津藥物研究院藥業(yè)有限責任公司生產(chǎn),批號:961013;重酒石酸去甲腎上腺素(NE)、鹽酸多巴胺(DA)、5-羥色胺硫酸肌酐(5-HT)、5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)標準品均由中國醫(yī)藥(集團)上?；瘜W試劑公司提供,進口分裝,瑞士Fluka產(chǎn)品;L-半胱氨酸鹽酸鹽,批號:990508,中國上海曹揚第二中學化工廠產(chǎn)品;鄰苯二甲醛(OPT),批號:W981215;高碘酸鈉,批號:F990712;碘化鈉,批號:F000317;抗壞血酸,批號:F980611,均由中國醫(yī)藥(集團)上?；瘜W試劑公司提供,其他均為市售分析純試劑。3ysd-4g實驗儀大鼠行為測定儀及刺激儀,本所自制;850-熒光分光光度計,日本日立公司產(chǎn)品(由中國科學技術(shù)大學結(jié)構(gòu)中心提供);YSD-4G藥理生理多用實驗儀,蚌埠無線電二廠產(chǎn)品;HG101-電熱鼓風干燥箱,南京實驗儀器廠產(chǎn)品;80-2沉淀離心機,上海手術(shù)器械廠產(chǎn)品;玻璃勻漿器等。實驗方法1單次給藥及多次給藥選用Open-Field法評分相近的大鼠48只,隨機分為6組,即生理鹽水組、模型組、氯米帕明組、解百憂低、中、高劑量組,除生理鹽水組外,各組共接受21d各種不同的應激,包括電擊足底(36V交流電,每隔1min刺激1次,每次刺激10s,共30次)、冰水游泳(4℃,5min)、熱應激(45℃,5min)、搖晃(1速率次/s,15min)、夾尾(1min)、禁水(24h)、禁食(48h)和晝夜顛倒等刺激,平均每種刺激各2次,按上述次序連續(xù)刺激2輪,第一輪刺激結(jié)束開始給藥,解百憂低、中、高劑量組分別給予解百憂口服液1mL/100g(5、10、15g/kg),氯米帕明組給予氯米帕明溶液1mL/100g(20mg/kg),生理鹽水組及模型組分別給予等量的生理鹽水。分別在實驗的第1、7、14和21d測定動物的體重變化,第7、14和21d測定動物的行為變化,第22d測定糖水消耗量,第23d測定中樞神經(jīng)遞質(zhì)含量。2動物雙足活動Open-Field法測定行為。本實驗所用敞箱為圓柱形,高40cm,直徑80cm,周壁為黑色,底面按扇形分成面積相等的25塊。以動物穿越底面塊數(shù)為水平活動(crossing)得分,動物一般靠邊行走,穿越1格為1次,如動物按直徑方向行走,一般以每10cm為1次;以直立次數(shù)為垂直活動(rearing)得分,動物雙足離開底面為垂直活動,無論動物站立多長時間直至動物雙足放下為1次活動。每只動物每次僅進行一次測定,每次測定時間為3min。3糖的消耗實驗在進行糖水消耗實驗時所有動物均單籠飼養(yǎng),每只動物加1%蔗糖溶液130mL,同時所有動物進行禁食,計算動物24h飲用1%蔗糖溶液的量。4酸性正丁醇對腦組織勻漿的制備動物連續(xù)給藥12d,于末次給藥30min~60min后,斷頭處死大鼠,去顱骨,完全暴露腦組織,在枕骨大孔處迅速剪斷延髓,取出大腦組織,除去大腦皮層,放于硫酸紙上稱重。迅速將腦組織放入裝有3mL預冷的酸性正丁醇溶液中,退除紙重,求出腦組織凈重。按1∶30左右比例補充酸性正丁醇至7mL,制備組織勻漿。將組織勻漿倒入帶塞離心管中,振蕩5min,在3000r/min下離心10min,取適量的酸性正丁醇上清液按文獻方法進行提取和測定,NE測定時的激發(fā)波長為290nm,發(fā)射波長為374nm,DA測定時的激發(fā)波長為326nm,發(fā)射波長為381nm,5-HT及5-HTAA測定時的激發(fā)波長為360nm,發(fā)射波長為500nm,計算出各組動物中樞單胺神經(jīng)遞質(zhì)的含量。結(jié)果1第14d和21d模型組體重下降通過21d各種不同方法的應激,各組與生理鹽水組相比較,在第7d動物體重的增加已有降低趨勢,第14d和21d模型組體重下降具有顯著和極顯著意義(P<0.05~0.01),說明應激可使動物體重的增加明顯下降。服用解百憂口服液和氯米帕明后,對動物因應激造成的體重增加降低無明顯的改善作用(結(jié)果見表1)。2應激對抑郁動物活動的影響經(jīng)過21d各種不同方法的應激后,我們通過Open-Field法測定動物行為的水平活動(crossing)得分和垂直活動(rearing)得分,與生理鹽水組相比較,在第7d動物兩種活動次數(shù)已有減少趨勢,第14d和第21d兩種活動次數(shù)均顯著減少(P<0.05~0.01)。說明應激可使動物的活動明顯減少,產(chǎn)生抑郁癥狀。我們用解百憂口服液和氯米帕明對抑郁動物進行治療,結(jié)果在第21d(即給藥后第10d),解百憂能顯著增加抑郁動物的活動次數(shù)(P<0.05~P<0.01),與氯米帕明具有同等的藥理作用,但無明顯量效關(guān)系(結(jié)果見表2)。動物從第12d開始給藥,第14d時動物給藥僅3d。3低p>0.1學習標準通過各種不同方法的應激后,與生理鹽水組相比較,模型組動物的糖水消耗量明顯降低(P<0.01)。服用解百憂口服液和氯米帕明后,可明顯增加因應激造成的動物糖水消耗量的下降,解百憂低、中、高劑量組與模型組比較P<0.05~0.01,但無明顯的量效關(guān)系,氯米帕明組與模型組相比較P<0.01(結(jié)果見表3)。4應激對動物顯神經(jīng)遞質(zhì)的影響經(jīng)過21d各種不同方法的應激后,用熒光光度計法測定動物中樞神經(jīng)遞質(zhì)的含量,與生理鹽水組相比較,結(jié)果模型組動物大腦中樞中NE、DA、5-HT、5-HIAA的含量均明顯降低(P<0.01),說明應激已造成動物中樞神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化,差異具有顯著意義。動物服用解百憂口服液和氯米帕明后,可使模型動物中樞中NE含量明顯升高(P<0.05),5-HT、5-HIAA的含量也明顯升高(P<0.05~P<0.01),DA的含量有升高趨勢,但無顯著差異(P>0.05),解百憂口服液與氯米帕明相比具有同等的藥理作用,但無明顯的量效關(guān)系(結(jié)果見表4)。抑郁癥模型動物活性成分的檢測結(jié)果我們綜合運用應激和分養(yǎng)兩種經(jīng)典方法,利用長期不可預見性的中等強度應激,造成分養(yǎng)動物抑郁狀態(tài),抑郁動物在行為上表現(xiàn)為:在規(guī)定時間內(nèi)的水平行活動和垂直活動次數(shù)減少,體重增加減輕,糖水消耗量降低,水平活動反映動物的活動度,垂直活動反映動物對新鮮環(huán)境的好奇程度,糖水消耗量反映動物的獎賞反應程度。本模型動物表現(xiàn)出來的抑郁狀態(tài)、興趣喪失、快感缺乏與抑郁癥臨床診斷中的精神運動改變、興趣或快感的喪失有一定程度的相似性。同時,通過對動物中樞神經(jīng)遞質(zhì)含量的測定,發(fā)現(xiàn)抑郁動物中樞神經(jīng)遞質(zhì)NE、5-HT、5-HIAA含量降低,支持經(jīng)典的抑郁癥發(fā)病的5-HT能與NE能神經(jīng)低下假說。因此,我們認為該模型是較為理想的抑郁動物模型。抑郁癥屬中醫(yī)“郁證”范疇。其病理機制為氣機失調(diào),內(nèi)氣及血,導致肝氣郁結(jié),心神失養(yǎng)。在治療方面歷代醫(yī)家多主張治郁先治氣,調(diào)氣先治肝?，F(xiàn)代醫(yī)家認為,抑郁癥發(fā)病與5-HT、NE、DA、Ach、GABA等遞質(zhì)密切相關(guān),尤其是5-HT和NE,目前較公認的抑郁癥發(fā)病的生化機制仍是單胺假說,主要是5-HT能低下假說和NE能低下假說。解百憂口服液具有疏肝健脾解郁之功,本方重用白芍直入肝經(jīng),以益其匱乏之氣,自然血生而火熄;白術(shù)、當歸健土以生血,柴胡解郁,