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文檔簡介

實驗二DNA的純化及含量測定2013-09-22DNA的純化方法:酚/仿抽提與硅柱吸附DNA的檢測方法:電泳和紫外DNA的質量判斷方法：OD230，260，280，320預備知識實驗目的了解DNA純化的原理及步驟；了解分光光度計法測DNA濃度和純度的方法及原理。利用RNA酶去除植物組織總核酸中的RNA雜質，用有機溶劑抽提溶液中的蛋白質、多糖及酚類物質，再用95%的預冷酒精沉淀和清洗即可得到較純的DNA。根據DNA和蛋白質分別在260nm和280nm波長的最大吸收值，即可通過計算由紫外分光光度計測定DNA溶液在260nm和280nmO.D值的比值，確定DNA溶液的純度。O.D(260)/O.D(280)應等于1.8。若大于1.8，說明溶液中含RNA雜質，可用RNA酶重新處理。若小于1.6，說明溶液中有蛋白質及酚，可用有機溶劑再次抽提。實驗原理儀器

紫外分光度計，離心機，移液槍試劑25mg/mL的RNA酶，氯仿—異戊醇（24：1），95%乙醇實驗前準備DNA的純化1.在實驗一已提好的植物核酸粗提液中加RNA酶，使最終濃度為50ug/ml，放入37oC的水浴鍋中溫浴30min。2.加入等體積的氯仿—異戊醇（24：1）的混合液，充分混勻并于8000轉/分的條件離心5min，吸取上清液并加入2倍體積預冷的95%乙醇，輕輕混勻，使DNA析出。3.在4oC4000轉/分的條件下離心5min，去上清液，晾干沉淀，加適量1*TE或無菌水，使DNA溶解。實驗步驟用紫外分光光度檢測DNA純度和濃度。1.開啟紫外分光光度計預熱；2.用無菌水反復沖洗比色皿,并用擦鏡紙按照同一方向將比色皿外壁擦拭干凈；3.吸取SSC溶液3ml(1ml)加入比色皿，再用移液槍吸取0.1%體積的DNA溶液加入比色皿，并用移液槍反復吹打混勻，注意避免產生氣泡；4.將比色皿放入分光光度計進行測定；5.分別記錄260nm,280nm波長下的讀數。OD260OD280OD260/280DNA的濃度:1OD（260nm）=50（ug/ml）DNA濃度=OD260

×核酸稀釋倍數×

50/1000（ug/ul）實驗結果1.記錄你檢測DNA溶液在26

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