硝苯地平中有關(guān)物質(zhì)檢查HPLC法測(cè)定課件

雜環(huán)環(huán)狀有機(jī)化合物的碳環(huán)中夾雜有非碳原子非碳原子：雜原子如O、S、N雜環(huán)類藥物：合成比例最多最大雜原子數(shù)不超過3個(gè)（也有4或5個(gè)）五元環(huán)或六元環(huán)，單環(huán)或駢合環(huán)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，不易開環(huán)性質(zhì)受雜原子種類、數(shù)目、位置影響雜環(huán)取代基性質(zhì)比較活潑氮雜環(huán)，其堿性可用于分析Contents吡啶類藥物的分析喹啉類藥物的分析托烷類藥物的分析吩噻嗪類藥物的分析苯并二氮雜卓類藥物的分析第一節(jié) 吡啶類藥物的分析典型藥物的結(jié)構(gòu)典型藥物的特性鑒別試驗(yàn)吡啶環(huán)反應(yīng)戊烯二醛反應(yīng)——衍生物的顏色隨芳香伯胺的不同而不同黃色戊烯二醛反應(yīng)戊烯二醛反應(yīng)適用于α，α’未取代者，異煙肼需先氧化成異煙酸，然后再與溴化氰、芳香伯胺反應(yīng)2.二硝基氯苯反應(yīng)3.與重金屬離子的沉淀反應(yīng)酰肼基的反應(yīng)銀鏡反應(yīng)縮合反應(yīng)分解產(chǎn)物反應(yīng)尼可剎米+NaOH→二乙胺↑紅色石蕊試紙變藍(lán)有關(guān)物質(zhì)檢查異煙肼中游離肼的檢查（TLC）對(duì)照——硫酸肼顯色——對(duì)二甲氨基苯甲醛樣品液——50mg異煙肼/mL，點(diǎn)樣：10

L雜質(zhì)對(duì)照液——50

g游離肼/mL點(diǎn)樣：2

L規(guī)定——在硫酸肼斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，供試品不得顯黃色斑點(diǎn)限量其他藥典方法比濁法原理：游離肼+水楊酸→水楊醛腙（渾濁）規(guī)定：異煙肼樣品+水楊醛→5min內(nèi)不得渾濁TLC法樣品液：100mg異煙肼/mL雜質(zhì)對(duì)照液：50

g游離肼/mL（含供試品0.2mg/mL）顯色：其他雜質(zhì)——觀測(cè)熒光；游離肼——比色規(guī)定：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照液主斑點(diǎn)（異煙肼）比較不得更深供試液如顯與硫酸肼相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得比對(duì)照液中硫酸肼斑點(diǎn)的強(qiáng)度更深（0.05%）硝苯地平中有關(guān)物質(zhì)檢查HPLC法測(cè)定供試品溶液1：1mg/mL供試品溶液2：0.2mg/mL雜質(zhì)對(duì)照品液1：雜質(zhì)A和B各10mg/50mL雜質(zhì)對(duì)照品液2：供試品液2各1mL→100mL雜質(zhì)對(duì)照品液1雜質(zhì)對(duì)照品液2中：硝苯地平2

g/mL，雜質(zhì)A和B各2

g/mLHPLC法測(cè)定進(jìn)樣測(cè)定雜質(zhì)對(duì)照品液2進(jìn)樣測(cè)定——考察分離度與靈敏度供試品液1進(jìn)樣測(cè)定——記錄至主峰tR的2倍判斷-供試液1中含雜質(zhì)A，B峰<雜質(zhì)對(duì)照品液2中雜質(zhì)A，B峰面積-供試液1中其他雜質(zhì)峰<雜質(zhì)對(duì)照品液2中硝苯地平峰面積第二節(jié)喹啉類藥物鑒別試驗(yàn)+

氨試液綠奎寧反應(yīng)硫酸奎寧/硫酸奎尼丁+溴水（氯水）翠綠色加酸成中性藍(lán)色加酸紫紅色熒光反應(yīng)硫酸奎寧/硫酸奎尼丁+稀硫酸→藍(lán)色熒光酸根反應(yīng)SO42-、Cl-反應(yīng)特殊雜質(zhì)檢查硫酸奎寧其他金雞鈉堿——TLC高低濃度法氯仿-乙醇中不溶物——控制無機(jī)鹽與醇中不溶性雜質(zhì)。其在氯仿-乙醇中不溶，過濾，干燥，稱定殘?jiān)亓垦醴承怯嘘P(guān)物質(zhì)——HPLC法，采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法控制雜質(zhì)量第三節(jié)托烷類藥物鑒別試驗(yàn)Vitali反應(yīng)（托烷類生物堿的一般鑒別）氧化反應(yīng)本類藥物水解后生成莨菪酸，與硫酸和重鉻酸鉀發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲醛沉淀反應(yīng)與生物堿沉淀試劑作用

阿托品+氯化汞醇→黃色↓東莨菪堿+氯化汞醇→白色復(fù)鹽↓硫酸鹽和溴化物反應(yīng)特殊雜質(zhì)檢查硫酸阿托品中特殊雜質(zhì)莨菪堿——利用阿托品無旋光性，莨菪堿為左旋體，旋光法檢測(cè)其他生物堿——利用其他生物堿堿性弱于阿托品，加氨試液被游離析出，使發(fā)生渾濁而檢出氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)其他生物堿——檢查原理同硫酸阿托品中其他生物堿的檢查易氧化物——主要檢查阿撲阿托品及含不飽和雙鍵的有機(jī)物樣品液+KMnO4→10min內(nèi)紅色不得全消失第四節(jié)吩噻嗪類藥物基本結(jié)構(gòu)本類藥物具有下列性質(zhì)：具有多吸收峰的紫外吸收光譜特征R取代基上N原子具有堿性環(huán)上硫原子易被氧化成亞砜和砜環(huán)上硫原子可與某些金屬離子形成有色絡(luò)合物以上性質(zhì)1、3、4可用作鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)紫外光譜法——有三個(gè)特征吸收峰：205nm，254nm（強(qiáng)），300nm氧化顯色反應(yīng)本類藥物與H2SO4，HNO3，Br2水，H2O2，F(xiàn)eCl3等試劑的顯色反應(yīng)，如：與金屬鈀離子的顯色反應(yīng)分解反應(yīng)含氟藥物經(jīng)與碳酸鈉、碳酸鉀在600℃熾灼，分解成氟化物，與茜素鋯作用成[ZrF6]2-，游離出茜素，是溶液由紅色→黃色特殊雜質(zhì)檢查鹽酸異丙嗪中有關(guān)物質(zhì)檢查主要指合成過程中副產(chǎn)物（異構(gòu)體）鹽酸硫利達(dá)嗪中有關(guān)物質(zhì)檢查均采用TLC——供試品稀釋液對(duì)照法例鹽酸異丙嗪中有關(guān)物質(zhì)檢查薄層板——硅膠GF254供試液——10mg/mL對(duì)照液——0.15mg/mL（1）0.05mg/mL（2）點(diǎn)樣——各10

L，紫外254nm檢測(cè)規(guī)定：雜質(zhì)斑點(diǎn)不得多于3個(gè)熒光強(qiáng)度不得較對(duì)照液2強(qiáng)如有一點(diǎn)超過，不得甚于對(duì)照液1第五節(jié)苯并二氮雜卓類基本結(jié)構(gòu)與代表性的藥物鑒別試驗(yàn)水解產(chǎn)物（重氮化-偶合、茚三酮反應(yīng)）硫酸-熒光反應(yīng)本類藥物溶于硫酸，在紫外燈365nm下顯不同顏色的熒光有機(jī)氯反應(yīng)（氧瓶燃燒后顯氯化物反應(yīng)）薄層色譜法s，m，w代表熒光強(qiáng)度強(qiáng)，中，弱特殊雜質(zhì)檢查有關(guān)物質(zhì)和降解產(chǎn)物氯氮卓中雜質(zhì)主要為氨基物與氧化物地西泮中雜質(zhì)主要為合成中間體與分解產(chǎn)物采用TLC法，HPLC法第六節(jié)含量測(cè)定非水溶液滴定法（原料藥）紫外分光光度法（制劑）色譜法氧化還原滴定法溴酸鉀法（異煙肼原料、制劑）鈰量法（吩噻嗪類藥物）比色法酸性染料比色法（制劑）鈀離子比色法1、非水溶液滴定法（堿量法）常用溶劑：冰醋酸，醋酐，丙酮，二氧六環(huán)等常用滴定劑：HClO4-冰HAc溶液常用指示劑：結(jié)晶紫-冰HAc溶液終點(diǎn)顏色-藍(lán)色/藍(lán)綠色/綠色/黃綠色電位法注意溫度影響方法適用范圍主要用于Kb<10-8的有機(jī)堿鹽，對(duì)于不同堿性的雜環(huán)類藥物只有選擇合適的溶劑和指示終點(diǎn)方法才能獲得滿意的滴定結(jié)果注意酸根的影響

冰醋酸溶液中各酸根的酸性強(qiáng)弱如下：高氯酸>

氫溴酸

>硫酸

>鹽酸

>

硫酸氫根>硝酸>磷酸、有機(jī)酸對(duì)不同酸根采取的措施HX——加HgAc2→HgX2↓H2SO4——生物堿的硫酸鹽通常為2分子生物堿4與1分子硫酸成鹽，可直接滴定至HSO

-（注意摩爾比）HNO3——可氧化指示劑，妨礙終點(diǎn)觀察，改用電位法測(cè)定磷酸、有機(jī)酸——無需處理，直接滴定例硫酸奎寧的含量測(cè)定硫酸阿托品的含量測(cè)定直接滴定：硫酸阿托品與滴定劑的摩爾比為1：1若采用堿化、有機(jī)溶劑提取后再滴定，此時(shí)摩爾比是？（硫酸奎寧片、硫酸阿托品的測(cè)定）2.紫外分光光度法直接分光光度法例鹽酸氯丙嗪片、注射液的含量測(cè)定

片劑λ254nm處測(cè)定，按E值915計(jì)算含量注射液λ306nm處測(cè)定，按E值115計(jì)算含量萃取-雙波長(zhǎng)分光光度法該法用于消除氧化產(chǎn)物的干擾例：鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定（USP）在氨堿性溶液中用氯仿提取，鹽酸溶液提取利用氯丙嗪在254nm有λmax氧化物在254nm和277nm處有等吸收采用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定以標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法計(jì)算含量雙波長(zhǎng)分光光度法原理1-繪制光譜圖2-選擇波長(zhǎng)3-樣品測(cè)定測(cè)定方法注射液VmL（100mg）→500mL→乙取10mL

→氨液堿化 醚提取→鹽酸提取→合并提取液→250mL（供試品溶液）取鹽酸氯丙嗪對(duì)照品→8

g/mL（對(duì)照液）以鹽酸為空白，于254nm和277nm處測(cè)定兩溶液的吸收度HCl注射液含量3.溴酸鉀法異煙肼及其制劑的含量采用溴酸鉀法，滴定劑為溴酸鉀溶液（0.01667mol/L），甲基橙為指示劑，反應(yīng)原理如下：異煙肼分子量=137.13，故滴定度T=3.429mg4.鈰量法吩噻嗪類藥物在酸性溶液中用硫酸鈰滴定，被測(cè)物溶液紅色消退指示終點(diǎn)紅色無色硝苯地平鈰量法與吩噻嗪類的鈰量法有何不同？5.比色法酸性染料比色法原理：在適當(dāng)?shù)膒H介質(zhì)中測(cè)定有機(jī)相吸收度或?qū)⒂袡C(jī)相堿化后測(cè)定釋放出來的有機(jī)染料的吸收度，按標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法計(jì)算含量影響因素水相pH值：要使有機(jī)堿以

BH+形式，染料以ln-形式存在酸性染料的選擇：與有機(jī)堿定量結(jié)合，生成的絡(luò)合物在有機(jī)相中有較大的溶解度和較高的吸收度有機(jī)溶劑的選擇：對(duì)絡(luò)合物有大的溶解度，即與離子對(duì)形成氫鍵的能力強(qiáng)，不與或極少與水相混溶水分影響常用的酸性染料有：溴麝香草酚藍(lán)溴甲酚藍(lán)溴酚藍(lán)

溴用酚紫常用的有機(jī)溶劑有：氯仿二氯甲烷等應(yīng)用chP采用酸性染料比色法測(cè)定含量的制劑有： 硫酸阿托品片氫溴酸東莨菪堿片

氫溴酸山莨菪堿片等以三氯甲烷為提取溶劑，溴甲酚綠為酸性染料鈀離子比色法該法選擇性地測(cè)定未被氧化的吩噻嗪類藥物，原理如下：標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法計(jì)算含量6.色譜法HPLC法——采用反相HPLC法測(cè)定本類藥物含量時(shí)，常常會(huì)產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象，這是因?yàn)镺DS固定相表面未被硅烷化的硅醇基與堿性藥物發(fā)生了吸附或離子交換作用。解決的方法有：調(diào)整流動(dòng)相pH，使呈弱堿性（pH7-8）加掃尾劑，最常用的掃尾劑為三乙胺更換固定相，用硅膠柱或金剛烷基硅烷化硅膠