微生物檢驗第五章G+球菌

第十四章

革蘭陽性球菌1整理ppt

第一節(jié)葡萄球菌屬在自然界廣泛分布。存在于人和動物的皮膚黏膜上的菌株可致多種化膿性感染癤、癰、膿腫、菌血癥等燙傷樣皮膚綜合癥毒性休克綜合癥2整理ppt二、臨床意義致病物質(zhì)：酶

血漿凝固酶耐熱核酸酶毒素葡萄球菌溶素 殺白細胞素腸毒素表皮剝脫毒素毒性休克綜合征毒素3整理ppt

金黃色葡萄球菌所致疾病

感染類型

所致疾病侵襲性局部感染：癤、癰、毛囊炎、傷口化膿、內(nèi)臟器官感染全身感染：敗血癥、膿毒血癥毒素性假膜性腸炎、食物中毒4整理ppt凝固酶陰性葡萄球菌〔CoNS〕所致疾病1、CoNS是人體皮膚黏膜正常菌群之一，是醫(yī)院感染的主要病原菌。2、表皮葡萄球菌：人工瓣膜性心內(nèi)膜炎、靜脈導管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工關(guān)節(jié)感染等。3、腐生葡萄球菌：女性尿路感染的重要病原菌。5整理ppt1.菌體形態(tài)：球形，葡萄串狀，無鞭毛，無芽胞，體外培養(yǎng)無莢膜。革蘭染色陽性球菌。2.培養(yǎng)特性：兼性厭氧，易培養(yǎng)，在普通平板、血平板上生長良好。大局部菌落產(chǎn)生有色素：金黃色、白色、檸檬色。有些菌溶血，產(chǎn)生透明的β溶血環(huán)。三、生物學特性6整理ppt3.生化反響和抗原構(gòu)造觸酶陽性多數(shù)菌分解葡萄糖、麥芽糖和蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。7整理ppt4.抵抗力對外界因素的抵抗力強于其他無芽胞菌?？菰锬撝⑻狄褐锌纱婊?~3個月。耐鹽性強，能在10%~15%NaCl培養(yǎng)基中生長。易產(chǎn)生耐藥性，對青霉素G的耐藥性已達90%以上，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA已經(jīng)成為醫(yī)院內(nèi)感染最常見的致病菌。病原性葡萄球菌一般分布在人的皮膚和鼻咽部，帶菌率達20%~50%，醫(yī)務(wù)人員帶菌率達70%，是醫(yī)院內(nèi)交叉感染的重要傳染源。8整理ppt〔一〕標本采集根據(jù)感染的部位，采集不同的標本。該屬細菌廣泛分布在人體皮膚和黏膜，采取時防止病灶周圍正常菌群污染。

四、微生物檢驗9整理ppt〔二〕檢驗程序10整理ppt〔三〕標本直接檢查無菌體液如腦脊液和穿刺液可直接涂片、革蘭染色后直接顯微鏡檢查，查見細菌具有重要臨床價值。其他體液標本如同時伴有炎性細胞時那么直接顯微鏡檢查結(jié)果也具有參考價值。涂片檢查發(fā)現(xiàn)有形態(tài)相似的革蘭陽性球菌，那么可初步報告“查見類似葡萄球菌屬革蘭陽性球菌〞，并進一步進行別離和鑒定予以證實。11整理ppt〔四〕別離培養(yǎng)與鑒定膿液、分泌物等接種于血瓊脂平板有污染的標本如糞便等應接種在選擇平板上，如甘露醇高鹽平板、哥倫比亞多粘菌素奈啶酸平板血液標本那么用肉湯增菌培養(yǎng)基12整理ppt1.菌落與菌體形態(tài)

金黃色葡萄球菌直徑6~8mn，金黃色或橙色，菌落周圍出現(xiàn)或不出現(xiàn)透明溶血環(huán)表皮葡萄球菌直徑為5~6mm，某些產(chǎn)粘液菌株能粘附在瓊脂平板外表，無色或白色溶血葡萄球菌直徑5~9mm，不透明，無色素或奶油色、黃色里昂葡萄球菌直徑4~7mm，邊緣整齊稍扁，奶色、黃色和沃氏葡萄球菌相似腐生葡萄球菌直徑5~8mm，白色或檸檬色注意：菌落外觀疑為葡萄球菌者應進行革蘭染色證實，甘露醇高鹽平板上金黃色葡萄球菌菌落為黃色。13整理ppt2．凝固酶試驗

玻片法-測定結(jié)合型凝固酶試管法-測定分泌型凝固酶金黃色葡萄球菌、中間型葡萄球菌呈現(xiàn)陽性反響14整理ppt3．耐熱核酸酶試驗

大多數(shù)金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌能產(chǎn)生耐熱核酸酶。表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐熱核酸酶。15整理ppt4．磷酸酶試驗

大多數(shù)的表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌和豬葡萄球菌為陽性。將待測菌種點種在加有硝基酚磷酸鹽的pH5.6~6.8MH瓊脂上，孵育18~24h，菌落周圍出現(xiàn)黃色為陽性。16整理ppt17整理ppt定義：凡對甲氧西林、苯唑西林、頭孢西丁耐藥，或PBP2a陽性、mecA基因陽性的葡萄球菌定義為耐甲氧西林葡萄球菌〔MRS〕。

耐甲氧西林葡萄球菌18整理ppt*耐甲氧西林葡萄球菌〔MRSA、MRSE〕的含義：對所有β-內(nèi)酰胺類(青霉素類，頭孢菌素類，碳青霉烯類)抗生素耐藥。對絕大多數(shù)的大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、氟喹諾酮類、四環(huán)素類、磺胺類也耐藥。萬古霉素、替考拉寧和利奈唑胺敏感。19整理ppt第二節(jié)鏈球菌屬〔Streptococcus〕20整理ppt傳統(tǒng)分類Lancefield抗原血清分型

種系分類法溶血現(xiàn)象

丙型〔γ〕鏈球菌甲型〔α〕溶血性鏈球菌乙型〔β〕溶血性鏈球菌血清群與溶血特性沒有相關(guān)性

遺傳學和血清學分型不能統(tǒng)一

一、分類21整理ppt不溶血D群鏈球菌：牛鏈球菌α溶血性鏈球菌β溶血性鏈球菌肺炎鏈球菌草綠色鏈球菌A、C、G群B群：無乳鏈球菌化膿、馬、似馬鏈球菌米勒鏈球菌22整理ppt二、臨床意義23整理ppt酶：鏈激酶、鏈道酶、透明質(zhì)酸酶脂磷壁酸化膿性鏈球菌

肺炎鏈球菌致病物質(zhì)所致疾病毒素：鏈球菌溶素O和S、紅疹毒素M蛋白致病物質(zhì)：莢膜、溶血素、神經(jīng)氨酸酶

所致疾?。捍笕~性肺炎、支氣管炎、中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎和菌血癥。超敏反響性疾?。杭毙阅I小球腎炎、風濕熱化膿性感染中毒性疾?。盒杉t熱24整理ppt無乳鏈球菌引起新生兒菌血癥和腦膜炎米勒鏈球菌在手術(shù)和創(chuàng)傷時引起內(nèi)源性感染草綠色鏈球菌可引起心臟瓣膜異常患者的亞急性細菌性心內(nèi)膜炎猩紅熱(scarletfever)

由產(chǎn)生致熱外毒素的化膿性鏈球菌所致。細菌經(jīng)咽喉粘膜侵入機體，增殖并產(chǎn)生毒素引起高熱、全身紅疹等病癥，病后獲得較強的免疫力。25整理ppt鏈球菌是直徑小于2μm的球形或卵圓形革蘭陽性球菌，呈鏈狀排列，鏈的長短和細菌的種類及生長環(huán)境有關(guān)。1.形態(tài)染色三、微生物學特性26整理ppt肺炎鏈球菌呈矛尖狀，寬端相對尖端向外，成雙排列，無芽胞、無動力，但能形成莢膜和粘液層。27整理ppt兼性厭氧菌營養(yǎng)要求高血平板α、β、γ三種特征性溶血現(xiàn)象肺炎鏈球菌莢膜多糖使菌落呈粘液狀產(chǎn)生自溶酶，培養(yǎng)48h后出現(xiàn)“臍窩狀〞菌落。

2．培養(yǎng)特性28整理ppt29整理ppt3．生化特性和抗原構(gòu)造發(fā)酵葡萄糖和多種糖，不產(chǎn)氣，乳酸為代謝終末產(chǎn)物，觸酶陰性

分20個群M抗原莢膜蛋白質(zhì)多糖肽聚糖細胞膜細胞質(zhì)30整理ppt近年對青霉素耐藥甚至多重耐藥的肺炎鏈球菌的出現(xiàn)并在全球播散，引起高度關(guān)注。4.抵抗力大多數(shù)細菌對枯燥和消毒劑敏感；較少引起細菌耐藥性。31整理ppt32整理ppt〔二〕標本采集咽拭子、痰液、膿汁和血液等標本采集后在2h內(nèi)運送到實驗室，立即進行檢查和接種。對B群溶血鏈球菌的檢查，用無菌棉簽采集第35周~37周妊娠婦女的陰道分泌物，置于含多粘菌素(10μg/ml)和萘啶酸(15μg/ml)選擇性培養(yǎng)肉湯中孵育18~24h，再作別離培養(yǎng)。33整理ppt〔三〕標本直接檢查直接顯微鏡檢查標本涂片、革蘭染色、顯微鏡檢查見鏈狀排列革蘭陽性球菌有助于無正常菌群污染標本的診斷莢膜腫脹試驗用于檢查肺炎鏈球菌直接檢測抗原咽拭標本的A群鏈球菌和女性生殖道標本的B群鏈球菌可用抗原檢測34整理ppt莢膜腫脹試驗35整理ppt〔四〕別離培養(yǎng)與鑒定用羊血瓊脂平板培養(yǎng)初代別離需用5%CO2環(huán)境，35~37℃孵育24h。觀察菌落性狀：溶血現(xiàn)象及菌落大小。革蘭染色為革蘭陽性球菌，鏈狀或短鏈狀排列，觸酶試驗陰性，6.5%NaCl不生長者可確定為鏈球菌屬細菌。36整理ppt(1)Lancefield群特異性抗原鑒定：B群為無乳鏈球菌，F(xiàn)群為米勒鏈球菌。(2)PYR試驗：化膿性鏈球菌陽性(3)桿菌肽敏感試驗：化膿性鏈球菌陽性。(4)VP試驗：挑取平板上孵育過夜菌落置于2mlVP肉湯中，孵育6h后參加VP試劑，搖勻30秒，出現(xiàn)桃紅色者為陽性?！?〕CAMP試驗β-溶血鏈球菌鑒定37整理ppt鏈球菌屬內(nèi)的鑒定試驗38整理ppt非β溶血鏈球菌鑒定

菌種optochin敏感試驗

膽汁溶菌試驗膽汁七葉苷試驗肺炎鏈球菌S+—草綠色鏈球菌R——牛鏈球菌R—+39整理ppt抗鏈球菌溶素O抗體檢測常用于風濕熱的輔助診斷?；顒有燥L濕熱患者抗體效價一般超過400單位。40整理ppt標本別離培養(yǎng)膿汁，血液，咽喉拭子直接涂片鏡檢革蘭陽性鏈球菌與葡萄球菌菌的鑒別H2O2陽性1.肚臍樣菌落2.莢膜腫脹試驗3.膽汁溶菌試驗溶血環(huán)與肺炎鏈球菌的鑒別αLancefeild、PYR、桿菌肽敏感試驗、CAMP試驗βH2O2陰性6.5%NaCl不生長者41整理ppt第三節(jié)腸球菌屬廣泛分布在自然界。常棲居在人、動物的腸道和女性生殖道。為醫(yī)院感染的重要病原菌。42整理ppt一、分類腸球菌屬原歸類于鏈球菌屬。于1984年將其命名為腸球菌屬。至今，經(jīng)由16SrRNA序列分析和核酸雜交等，證實腸球菌可分為5群19個種。臨床標本別離的腸球菌多屬于第2群。43整理ppt二、臨床意義腸球菌所致感染最多見于泌尿道感染,是重要的醫(yī)院感染病原菌。多與泌尿道器械操作、留置導尿、尿路結(jié)構(gòu)異常有關(guān)。腹腔和盆腔創(chuàng)傷時也是常見的感染菌。腸球菌引起的菌血癥常發(fā)生于有嚴重根底疾患的老年人、長期住院接受抗菌藥物治療的免疫功能低下患者。44整理ppt近年來不斷上升的腸球菌感染率和廣泛使用抗菌藥物出現(xiàn)的耐藥性有關(guān)。在臨床診斷前應認真評估別離菌的臨床意義。臨床標本中別離的80%~90%是糞腸球菌。屎腸球菌約占5%~10%。很少別離到腸球菌屬的其它種。45整理ppt腸球菌為革蘭陽性球菌、呈單個，成對或短鏈狀排列，瓊脂平板上生長的細菌呈球桿狀。液體培養(yǎng)基中呈卵圓形、鏈狀排列。無芽胞和莢膜，個別菌種有稀疏鞭毛。1.形態(tài)46整理ppt2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，最適生長溫度35℃，10℃和45℃均能生長。營養(yǎng)要求不高。所有菌株在含6.5%NaCl肉湯中能生長。在40%膽汁培養(yǎng)基中能分解七葉苷。47整理ppt48整理ppt3.生化反響和抗原構(gòu)造多數(shù)菌種具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺〔PYR〕。不含細胞色素氧化酶和觸酶。但糞腸球菌培養(yǎng)于含血的培養(yǎng)基中，可合成細胞色素或觸酶或兩者皆有，因而某些菌株表現(xiàn)為觸酶弱陽性。含鏈球菌D群抗原。G+C為37~45mol%。49整理ppt4.抵抗力對頭孢菌素類、林可霉素類和磺胺類抗菌藥物耐藥。近年來獲得性耐藥菌株不斷增多，表現(xiàn)為對氨基糖苷類耐藥和對萬古霉素耐藥。對萬古霉素的耐藥是由vanA、vanB和vanC等基因介導。50整理ppt〔一〕檢驗程序

51整理ppt〔二〕標本采集常規(guī)方法采集血、尿、創(chuàng)傷標本和其他拭子，標本于1小時內(nèi)接種完畢?！踩硺吮局苯訖z查涂片染色顯微鏡檢查可見單個、成雙或短鏈排列卵圓形革蘭陽性球菌。52整理ppt〔四〕別離培養(yǎng)與鑒定標本接種于含血瓊脂平板。假設(shè)送檢標本中含革蘭陰性桿菌可選用選擇鑒別培養(yǎng)基，常用的有：疊氮膽汁七葉苷瓊脂，可抑制革蘭陰性菌生長，而腸球菌分解七葉苷產(chǎn)生黑色菌落；哥倫比亞多粘菌素-萘啶酸瓊脂(CAN)和苯乙基乙醇瓊脂(PEA)。由于耐萬古霉素腸球菌發(fā)生率增高，為早期檢出耐藥菌株，可使用含萬古霉素瓊脂篩