實(shí)驗(yàn)十-血糖的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)十血糖的測(cè)定血液中的葡萄糖稱血糖。正常人血糖濃度較恒定，維持在3．9mmol／L～6．1mmol／L之間。血糖濃度的相對(duì)恒定是機(jī)體進(jìn)行正常生理活動(dòng)的前提條件之一，有著雙重實(shí)際意義：其一，維持穩(wěn)定的能源供給，滿足機(jī)體在各種生理狀態(tài)下對(duì)能量的需求。其二，保證機(jī)體不因進(jìn)食致血糖濃度過高，導(dǎo)致糖的丟失。因此，血糖的測(cè)定是臨床生化檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。血糖測(cè)定按其發(fā)展過程及反應(yīng)原理的不同，大致分三類：氧化還原法，縮合法（主要有鄰甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下邊介紹兩種方法供選擇。一、葡萄糖氧化酶法【目的】1.了解葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖的原理，能進(jìn)行血糖測(cè)定的操作。2.掌握血糖測(cè)定的臨床意義?！驹怼科咸烟茄趸?glucoseoxidase，GOD)能將葡萄糖氧化為葡萄糖酸和過氧化氫。后者在過氧化物酶(peroxidase，POD)作用下，分解為水和氧的同時(shí)將無色的4-氨基安替比林與酚氧化縮合生成紅色的醌類化合物，即Trinder反應(yīng)。其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與葡萄糖濃度成正比，在505nm波長處測(cè)定吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)管比較可計(jì)算出血糖的濃度。反應(yīng)式如下：【器材】試管、吸管、試管架、恒溫水浴箱、分光光度計(jì)【試劑】1.0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0）稱取無水磷酸氫二鈉8.67g及無水磷酸二氫鉀5.3g溶于800ml蒸餾水中，用1mol/L氫氧化鈉（或1mol/L鹽酸）調(diào)節(jié)pH至7.0，然后用蒸餾水稀釋至1L。2.酶試劑稱取過氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，疊氮鈉100mg，溶于上述磷酸鹽緩沖液80ml中，用1mol/LNaOH調(diào)pH至7.0，加磷酸緩沖液至100ml。置冰箱保存，4℃可穩(wěn)定3個(gè)月。3.酚溶液稱取重蒸餾酚100mg溶于100ml蒸餾水中（酚在空氣中易氧化成紅色，可先配成500g/L的溶液，貯存于棕色瓶中，用時(shí)稀釋），用棕色瓶貯存。4.酶酚混合試劑取上述酶試劑與酚溶液等量混合，4℃可以存放一個(gè)月。5.12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸餾水約800ml中，加溫助溶，冷卻后加蒸餾水至1L。6．葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液（100mmol/L）稱取已干燥恒重的無水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液約70ml中，并移入100ml容量瓶內(nèi)，再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml。7.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（5mmol/L）吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液5.0ml于100ml容量瓶中，加12mmol/L苯甲酸溶液至刻度?！静僮鳌咳?支試管,編號(hào)，按下表操作。表3-12血糖測(cè)定操作步驟加入物(ml)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管血清－－0.02葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液－0.02－蒸餾水0.02－－酶酚混合液3.03.03.0混勻，置37℃水浴中保溫15分鐘，在波長505nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管吸光度。【計(jì)算】測(cè)定管吸光度血糖（mmol/L）=×5

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度【注意事項(xiàng)】表3-13血糖測(cè)定操作步驟試劑（ml）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清或血漿0.1——葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液—0.1—蒸餾水——0.1鄰甲苯胺試劑3.03.03.0

2．將上述各管混勻放入沸水浴中加熱12分鐘，取出用自來水冷卻5分鐘。注意在煮沸時(shí)水浴中的水面必須高于試管內(nèi)的液面。否則則溫度不均而影響比色。3．用波長630nm分光光度計(jì)進(jìn)行比色，空白管調(diào)零點(diǎn)，讀取測(cè)定管與標(biāo)準(zhǔn)管吸光度。4．計(jì)算測(cè)定管吸光度血糖（mmol/L）=×5

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度5．本