DB22-T 3531-2023 人參組培不定根快速擴(kuò)繁技術(shù)規(guī)程

65.020.20CCS

B

3622 DB22/T

3531—2023人參組培不定根快速擴(kuò)繁技術(shù)規(guī)程Technical

of

practice

of

ginseng

adventitious

吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳 發(fā)

布DB22/T

3531—2023 本文件按照GB/T

—《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院（中國農(nóng)業(yè)科技東北創(chuàng)新中心）。博、蘭西、李艷君。DB22/T

3531—20231 范圍本文件確立了人參組培不定根快速擴(kuò)繁的程序，規(guī)定了不定根誘導(dǎo)、生物反應(yīng)器培養(yǎng)組培不定根、收獲及保存等階段的操作指示，描述了記錄與檔案等追溯方法。本文件適用于人參組培不定根的快速擴(kuò)繁。2 規(guī)范性引用文件文件。NY/T

2306—2013 花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3 術(shù)語和定義NY/T

2306

界定的術(shù)語和定義適用于本文件。組培不定根

adventitious

root利用植物組織、器官或細(xì)胞等作為起始材料，通過植物組織培養(yǎng)方式生產(chǎn)獲得的根狀物。[來源：NY/T

2306—2013，3.12，有修改]固體培養(yǎng)

solid

culture通過添加植物凝膠使配置好的營(yíng)養(yǎng)液形成固體狀態(tài)供植物生長(zhǎng)的過程。繼代

對(duì)來自于外植體所增殖的培養(yǎng)物(包括細(xì)胞、組織或器官)通過更換新鮮培養(yǎng)基及不斷切割或分離，進(jìn)行連續(xù)多代的培養(yǎng)。[來源：NY/T

2306—2013，3.2，有修改]植物生物反應(yīng)器

plant

活的工廠生產(chǎn)特定化學(xué)物質(zhì)的生物反應(yīng)器。4 縮略語下列縮略語適用于本文件。2,4-D:

2,4-Dichlorophenoxyacetic

acid）IBA:

吲哚丁酸（Indole-3-butyric

acid）DB22/T

3531—2023FeNa-EDTA:

乙二胺四乙酸鐵鈉鹽

[EDTA

iron(Ⅲ)

sodium

salt]MS:

Murashige

and

Skoog,19625 程序人參組培不定根快速擴(kuò)繁技術(shù)規(guī)程包含

3

個(gè)階段，程序流程圖見圖

1。圖1 人參組培不定根快速擴(kuò)繁程序6 不定根誘導(dǎo)材料及處理6.1.1 以健康人參主根為外植體，用自來水沖洗

20

，洗凈后在超凈工作臺(tái)中切成

1

cm～2

cm

方塊，用

70%

乙醇處理

30

s，再用次氯酸鈉水溶液（有效氯為

）浸泡

40

（每隔

10

用無菌水清洗

1

次）進(jìn)行表面消毒。6.1.2 表面消毒后的根用無菌水清洗

3

（

cm×0.5

cm

×0.4

cm（0.7

cm×0.7

cm×0.4

）（長(zhǎng)×寬×高）的塊。愈傷組織誘導(dǎo)及繼代6.2.1 培養(yǎng)基配方：MS

+

2,4-D

1.0

mg/L

+

30

g/L

+

植物凝膠

2.3

g/L，pH

5.7～。6.2.2 培養(yǎng)條件：22

℃±1

℃

暗培養(yǎng)。6.2.3 6.1.2（6.2.1）的培養(yǎng)皿中誘導(dǎo)愈傷組織

6

8

周后，將誘導(dǎo)的愈傷組織接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，每

2

周～3

周繼代一次，篩選高產(chǎn)愈傷組織。組培不定根誘導(dǎo)及繼代6.3.1 組培不定根誘導(dǎo)6.3.1.1 培養(yǎng)基配方：MS

+

IBA

3

mg/L～5

mg/L

+

+

植物凝膠

g/L，

5.7～5.8。6.3.1.2 培養(yǎng)條件：22

℃±1

℃

暗培養(yǎng)。6.3.1.3 接種：將愈傷組織接入含有培養(yǎng)基（6.3.1.1）的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)

6

周，誘導(dǎo)不定根。6.3.2.1

MS

4

：NO6.3.2.1

MS

4

：NO3

=7.5（）:37.5（mMCuSO4?5H2O

0.05

；FeNa-EDTA6.3.2 組培不定根繼代+ -0.0373

g/L；肌醇

5

mg/L

+

蔗糖

g/L

+

植物凝膠

，pH

5.7～5.8。6.3.2.2 培養(yǎng)條件：22

℃±1

℃

暗培養(yǎng)。6.3.2.3 接種：誘導(dǎo)的不定根在接入含有培養(yǎng)基（6.3.2.1）的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，每

4

5

周繼代一次，培養(yǎng)

4

6

代后獲得高產(chǎn)組培不定根材料。7 生物反應(yīng)器培養(yǎng)組培不定根組培不定根增殖培養(yǎng)基6.3.2.1

中的培養(yǎng)基去掉植物凝膠。培養(yǎng)條件接種量

5

～7

g/L3

L～20

L）的

～80%

vvm～

，22

℃±1

℃

暗培養(yǎng)

7

vvm

繼代培養(yǎng)將

6.3.2.3

中高產(chǎn)組培不定根材料接入氣升式生物反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行增殖培養(yǎng)，7

周后的增殖材料切成

1

的不定根，按

的培