不穩(wěn)定心絞痛患者循環(huán)miR-223水平與抗血小板藥物治療期間血小板反應性的相關研究

不穩(wěn)定心絞痛患者循環(huán)miR-223水平與抗血小板藥物治療期間血小板反應性的相關研究研究目的：血小板活化與聚集是動脈粥樣硬化血栓形成的病理生理基礎之一。在臨床實踐,即使應用了標準的阿司匹林聯(lián)合氯吡格雷的雙聯(lián)抗血小板治療,仍有部分冠心病患者可發(fā)生血栓事件。此現(xiàn)象可能與治療后血小板高反應(highon-treatmentplateletreactivity,HTPR)有關。隨著氯吡格雷的廣泛應用,氯吡格雷低反應不斷被報道。目前,有許多實驗室方法可以檢測患者對抗血小板藥物的反應性。我們的前期工作證實冠心病患者血小板microRNA-223(miR-223)的表達水平與服用氯吡格雷后血小板的反應性存在負相關。本研究旨在探索循環(huán)miR-223與冠心病患者服用氯吡格雷后的反應性的關系。研究內(nèi)容與方法：連續(xù)納入2012年11月至2013年01月在武警后勤學院附屬醫(yī)院心臟中心就診的經(jīng)冠脈造影證實的不穩(wěn)定型心絞痛(unstableanginapectoris,UAP)患者。入選患者于采集血樣前24小時口服300mg阿司匹林和300mg氯吡格雷,或口服300mg阿司匹林和75mg氯吡格雷5天以上。記錄患者的一般臨床資料及用藥情況;進行各項血細胞參數(shù)、生化參數(shù)的檢驗、進行心臟超聲心動圖檢查以及冠脈造影檢查及必要的介入治療。對冠脈病變進行Gensini評分及Syntax評分。以二磷酸腺苷(adenosinediphosphate,ADP)誘導的血小板聚集率和通過流式細胞術測定的血小板血管舒張劑刺激磷蛋白(vasodilatorstimulatedphosphoprotein,VASP)磷酸化水平,判斷患者在服用氯吡格雷后血小板反應活性的情況。提取患者血漿中的總miRNA,對與血小板P2Y12受體mRNA3’非編碼區(qū)結(jié)合的miR-223表達進行實時定量聚合酶鏈反應(realtimepolymerasechainreaction,Real-timePCR)。提取基因組DNA,對CYP2C19*2/*3基因片段進行PCR擴增,并針對該基因突變位點進行限制性內(nèi)切酶酶切,通過瓊脂糖凝膠電泳進行限制性片段長度多態(tài)性分析。結(jié)果：1.共入選經(jīng)冠脈造影證實的冠心病,不穩(wěn)定心絞痛患者62例,根據(jù)流式細胞術測定的VASP磷酸化水平即血小板反應指數(shù)(plateletreactivityindex,PRI)的中位數(shù)水平(56.3%)將入選患者分成2組：正常反應組,即PRI≤56.3%,n=31,平均年齡60.52±8.88,男性14例,女性17例；低反應組,即PRI>56.3%,平均年齡57.68±10.60,男性19例,女12例。①兩組患者的年齡、性別構(gòu)成、平均體重、血壓、心率等基礎資料無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。②兩組患者的心血管疾病史、伴發(fā)疾病情況及臨床主要心血管用藥情況無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。③兩組患者的左室射血分數(shù)(LVEF)及左室舒末徑(1eftventriculardiastolicenddiameter,LVDED),各項血細胞參數(shù)及生化參數(shù)均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。④CYP2C19基因多態(tài)性分析顯示兩組患者CYP2C19*2/*3基因攜帶比例差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)⑤兩組患者冠脈Syntax評分及Gensim評分無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。⑥與正常反應組組比較,低反應組血漿miR-223相對表達水平下調(diào),有統(tǒng)計學差異(P=0.008)2.根據(jù)光比濁法測定的血小板聚集率(plateletaggregation,PAG)的中位數(shù)水平(74.5%)重新將入選患者分成2組：正常反應組(PAG≤<74.5%)和低反應組(PAG>74.5%)①兩組患者的年齡、性別構(gòu)成、平均體重、血壓、心率等基礎資料無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。②兩組患者的心血管疾病史、伴發(fā)疾病情況及臨床主要心血管用藥情況無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。③兩組患者的心臟功能及房室腔大小,各項血細胞參數(shù)及生化參數(shù)均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。④YP2C19基因多態(tài)性分析顯示兩組患者CYP2C19*2/*3基因攜帶比例差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)⑤兩組患者冠脈Syntax評分及Gensim評分無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。⑥與正常反應組組比較,低反應組血漿miR-223相對表達水平有降低,但差異無統(tǒng)計學差異(P>0.05)3.①相關分析顯示血漿miR-223相對表達水平與血小板反應性PRI呈負相關性(Spearmanr=-0.379,P=0.002)。②將可能影響氯吡格雷反應性的臨床因素包括：血漿miR-223相對表達水平、CYP2C19*2/*3基因多態(tài)性、年齡、性別、吸煙、合并糖尿病、應用質(zhì)子泵抑制劑、應用鈣拮抗等作為校正變量引入Logistic回歸模型后,顯示血漿miR-223相對表達水平是預測血小板對氯吡格雷低反應的獨立相關因素。③以PRI中位數(shù)為分界點定義氯吡格雷正常反應組和低反應組,ROC曲線分析顯示miR-223相對表達水平能夠有效鑒別血小板低反應和正常反應者。(AUC=0.700,P=0.00895%CI: