出生前DEHP暴露對大鼠下丘腦-垂體-甲狀腺軸的影響

出生前DEHP暴露對大鼠下丘腦—垂體—甲狀腺軸的影響目的:通過檢測出生前DEHP暴露對成年后大鼠甲狀腺形態(tài)學與甲狀腺功能的影響及下丘腦、腺垂體與HPT軸調(diào)控相關基因表達水平的影響,探討出生前DEHP暴露對成年后子代大鼠甲狀腺的干擾作用及可能的機制。方法:(1)將32只孕鼠按體重隨機分為四個劑量組:0mg/kg(玉米油溶劑對照組)、2mg/kg、10mg/kg和50mg/kgDEHP處理組,每個劑量組8只。按1mL/100g體重的灌胃體積,自大鼠孕14天至孕19天(G14至G19)進行灌胃染毒。子代大鼠出生后第一天記為PND0。新生大鼠PND21斷乳后按性別分籠飼養(yǎng)。(2)將子代大鼠飼養(yǎng)至成年時(PND70),從每窩隨機選取雌、雄大鼠各1只(每個劑量組雌、雄各8只),用4%多聚甲醛將雄性大鼠和處于動情間期的雌性大鼠進行心臟灌流固定,取大鼠甲狀腺組織,石蠟包埋后用Leica全自動輪轉(zhuǎn)式切片機上制備厚度為6μm的甲狀腺組織切片。HE染色后在顯微鏡下觀察甲狀腺組織形態(tài)學改變。(3)用相同的方法從每窩隨機選取雌、雄大鼠各1只(每個劑量組雌、雄各8只),將雄性大鼠和處于動情間期的雌性大鼠斷頭處死后取血,采用Luminex液相芯片技術對血清中TSH、總T4和總T3的濃度進行測定。(4)取大鼠腦組織,制備成1mm厚的腦切片,根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜,確定下丘腦室旁核(paraventricularnucleus,PVN)和弓狀核(Arcuatenucleus,ARC)的位置,用直徑為1.25mm的打孔針在兩個核區(qū)打孔取樣。采用EastepSuperRNA提取試劑盒提取下丘腦PVN核區(qū)、ARC核區(qū)及垂體的總RNA,使用cDNA第一鏈合成試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄,實時熒光定量PCR檢測Trh、Trh受體、Tsh、Npy和Npy-Y1受體的基因表達水平。結(jié)果:(1)DEHP處理組大鼠甲狀腺組織形態(tài)學發(fā)生改變,與對照組相比,濾泡排列稍紊亂,濾泡上皮細胞數(shù)量增加,細胞質(zhì)出現(xiàn)泡沫樣變,濾泡腔直徑縮小。(2)雌性大鼠血清TSH濃度在各處理組間無統(tǒng)計學差異。雄性大鼠血清TSH濃度在各處理組間存在統(tǒng)計學差異,與對照組比較,10mg/kg和50mg/kgDEHP處理組血清TSH濃度降低(P<0.05);雌性和雄性大鼠血清T4濃度在各處理組間無統(tǒng)計學差異;雌性大鼠血清中T3濃度在各處理組間存在統(tǒng)計學差異,與對照組相比,2mg/kgDEHP處理組血清T3濃度降低(P<0.05)。雄性大鼠血清T3濃度在各處理組間無統(tǒng)計學差異。(3)雌性和雄性大鼠PVN核區(qū)Trh基因表達水平在各處理組間無統(tǒng)計學差異;雌性大鼠垂體Trh受體基因表達水平在各處理組間無統(tǒng)計學差異。雄性大鼠垂體Trh受體基因表達水平在各處理組間存在統(tǒng)計學差異,與對照組相比,2mg/kg和10mg/kgDEHP處理組Trh受體基因表達水平升高(P<0.05)。(4)雌性和雄性大鼠垂體Tsh基因表達水平在各處理組間無統(tǒng)計學差異。(5)雌性大鼠ARC核區(qū)Npy基因表達水平在各處理組間無統(tǒng)計學差異。雄性大鼠Npy基因表達水平在各處理組間存在統(tǒng)計學差異,與對照組相比,50mg/kgDEHP處理組Npy基因表達水平降低(P<0.05);雌性和雄性大鼠PVN核區(qū)Npy-Y1受體基因表達水平在各處理組間無統(tǒng)計學差異。結(jié)論:(1)出生前DEHP暴露對成年后子代大鼠甲狀腺組織結(jié)構及功能具有干擾作用。(2)出生前DEHP暴露對成年大鼠甲狀腺的干擾作用機制可能與干擾HPT軸Trh受體及下丘腦ARC核區(qū)參與調(diào)