竇永起教授治療腫瘤學(xué)術(shù)思想總結(jié)及黃芪-莪術(shù)配伍抗腫瘤血管生成機(jī)制研究

竇永起教授治療腫瘤學(xué)術(shù)思想總結(jié)及黃芪—莪術(shù)配伍抗腫瘤血管生成機(jī)制研究目的:整理總結(jié)導(dǎo)師臨床辨病與辨證相結(jié)合診治腫瘤的學(xué)術(shù)思想,并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn),研究闡明導(dǎo)師常用益氣活血配伍黃芪-莪術(shù)的抗腫瘤效果及其抗腫瘤血管生成的作用機(jī)制。方法:1.學(xué)術(shù)思想總結(jié)方法:通過(guò)整理、總結(jié)導(dǎo)師的理論授課、臨證講解、學(xué)術(shù)論文、專題講座等資料,參考古今中醫(yī)相關(guān)文獻(xiàn),結(jié)合同學(xué)討論,分析歸納導(dǎo)師在治療腫瘤類疾病方面的臨床經(jīng)驗(yàn)和用藥規(guī)律,對(duì)導(dǎo)師辨病與辨證相結(jié)合診治腫瘤的學(xué)術(shù)思想進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié)。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究方法:皮下注射瘤細(xì)胞構(gòu)建C57BL/6小鼠Lewis肺癌荷瘤模型,隨機(jī)分為模型組、順鉑組(DDP)、黃芪及莪術(shù)單藥組、黃芪-莪術(shù)1:1,2:1,3:1配伍組。中藥組予相應(yīng)劑量藥物灌胃15d,DDP組在第1,3,5,7,9,11,13,15d腹腔注射順鉑(2mg/kg),給藥期間測(cè)量小鼠體重及腫瘤體積變化。第16d處死小鼠后,計(jì)算瘤重指數(shù)、抑瘤率、胸腺及脾臟指數(shù),計(jì)數(shù)肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié),H-E染色分析瘤組織病理學(xué)變化。選擇模型組、DDP組、黃芪-莪術(shù)1:1,2:1,3:1配伍組的瘤組織進(jìn)行抗腫瘤血管生成相關(guān)檢測(cè),免疫組化法檢測(cè)瘤組織微血管密度(MVD);WesternBlot檢測(cè)瘤組織TGF-β1/MAPKs/HIF-lα信號(hào)通路關(guān)鍵因子的表達(dá)。3.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究方法:采用均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)黃芪-莪術(shù)配伍中4種已知的有效成分黃芪多糖、黃芪總皂苷、姜黃素、β-欖香烯進(jìn)行最優(yōu)組分配伍篩選,并觀察最優(yōu)組分配伍(E)在不同濃度和時(shí)間條件下對(duì)A549細(xì)胞增殖抑制的干預(yù)效果。將A549細(xì)胞分為空白對(duì)照組、CoCl2對(duì)照組、DDP+CoC12組(DDP)、0.5E+CoC12組(0.5E)、E+CoC12組(E)、2E+C0Cl2組(2E)進(jìn)行干預(yù),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,應(yīng)用WesternBlot法檢測(cè)凋亡相關(guān)的Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白及血管生成相關(guān)的TGF-β1/MAPKs/HIF-lα信號(hào)通路關(guān)鍵因子表達(dá)水平。結(jié)果:1.學(xué)術(shù)思想總結(jié)結(jié)果:腫瘤具有共同的發(fā)病基礎(chǔ)及相似的病理機(jī)制,而現(xiàn)代治療手段在治療腫瘤的同時(shí)又可能成為損傷人體的病理因素;將腫瘤的不同發(fā)展階段、不同臨床特征、不同治療手段,均納入“辨病論治”范疇,并運(yùn)用中醫(yī)學(xué)相關(guān)理論對(duì)其進(jìn)行辨病、辨證相結(jié)合的診治,將個(gè)體化、動(dòng)態(tài)化的中醫(yī)治療優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在腫瘤綜合治療的全過(guò)程中。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果:各藥物組的瘤重明顯低于模型組(P<0.05);各中藥組在抑制瘤重和肺轉(zhuǎn)移方面不如DDP組,但3:1配伍組與DDP組的瘤重指數(shù)和肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目差異不顯著(P>0.05);各中藥組的胸腺和脾臟指數(shù)高于DDP組(P<0.01)。各藥物組MVD計(jì)數(shù)低于模型組(P<0.01);各配伍組的MVD計(jì)數(shù)多于DDP組(P<0.05)。DDP組、2:1和3:1配伍組的VEGF、TGF-βl表達(dá)低于模型組(P<0.01);3:1配伍組VEGF表達(dá)低于DDP組(P<0.01)。各藥物組的HIF-1表達(dá)低于模型組(P<0.01);3:1配伍組與DDP組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05),且低于其它配伍組(P<0.01)。各配伍組的p38MAPK、p-p38MAPK表達(dá)低于模型組及DDP組(P<0.01)。各藥物組的ERK1/2、p-ERKl/2和JNK、p-JNK表達(dá)較模型組顯著降低(P<0.01);3:1、2:1配伍組的ERK1/2、p-ERKl/2表達(dá)均低于DDP組(P<0.01);2:1配伍組p-JNK表達(dá)低于DDP組(P<0.01)。3.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果:黃芪-莪術(shù)配伍中4種已知有效成分的最佳配伍組合(E)為200mg/L黃芪多糖聯(lián)合32mg/L姜黃素,E以劑量和時(shí)間依賴性的方式抑制A549細(xì)胞增殖。在化學(xué)缺氧環(huán)境下,E、2E組的凋亡率與DDP組差異不顯著(P>0.05);2E組的Bax、Bcl-2表達(dá)與DDP組相比差異不顯著(P>0.05),各劑量E組的caspase-3表達(dá)均低于DDP組(P<0.01);2E組上調(diào)Bax、caspase-3及下調(diào)Bcl-2表達(dá)的作用優(yōu)于其它劑量組。2E組TGF-β1、HIF-1αVEGF表達(dá)低于DDP組(P<0.01)。E、2E組p38MAPK、p-p38MAPK表達(dá)均低于DDP組(P<0.01);0.5E、2E組的JNK和p-JNK表達(dá)低于DDP組(P<0.05);各劑量最優(yōu)配伍組的ERK1/2、p-ERK1/2表達(dá)均低于DDP組(P<0.01)。結(jié)論:1.導(dǎo)師認(rèn)為腫瘤共同的發(fā)病基礎(chǔ)是正虛邪實(shí)、氣血紊亂;共同的病理因素是氣滯、血瘀、痰凝、癌毒;在辨病基礎(chǔ)上結(jié)合中醫(yī)四診的辨證,給予因人而異的、動(dòng)態(tài)中醫(yī)治療,發(fā)揮對(duì)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療方法的增效減毒作用,能夠改善腫瘤患者的生活質(zhì)量,提高中西醫(yī)結(jié)合治療腫瘤的水平。2.不同比例黃芪-莪術(shù)配伍能夠抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠移植瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,降低瘤組織MVD,能夠不同程度的下調(diào)TGF-β1/MAPKs/HIF-1α信號(hào)通路關(guān)鍵因子TGF-β1、p38MAPK、p-p38MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、HIF-1α、VEGF的表達(dá),抑制腫瘤血管生成。3.黃芪多糖聯(lián)合姜黃素是黃芪-莪術(shù)配伍中4種已知有效成分抑制A549細(xì)胞增殖的最優(yōu)配伍組合,其通過(guò)調(diào)控Bax、Bcl-2與caspase-3的表達(dá)