DB22-T 3312-2021 柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)技術規(guī)程

ICS

65.020.01CCS

B

3922 DB

22/T

3312—2021柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)技術規(guī)程Code

of

practice

spawn

of

Antheraea

pernyi

發(fā)布

實施吉林省市場監(jiān)督管理廳 發(fā)

布DB

22/T

3312—2021 本文件按照

GB/T

1.1—《標準化工作導則 第1規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：吉林省蠶業(yè)科學研究院。本文件主要起草人：周影、李森、朱興友、祝長杰、王芹、劉娟。DB

22/T

3312—20211 范圍生產(chǎn)、包裝、貯存和運輸階段的操作指示，描述了生產(chǎn)記錄等追溯方法。本文件適用于柞蠶蛹蟲草母種和液體菌種（栽培種）的生產(chǎn)。2 規(guī)范性引用文件適用于本文件。GB/T

—

NY/T

528—20103術語和定義GB/T

—

界定的以及下列術語和定義適用于本文件。3.1柞蠶蛹蟲草 northcordyceps蛹蟲草菌（Cordyceps

militaris（L.ex

））寄生于柞蠶蛹上形成的子實體與蛹的復合體。3.2母種 stock

經(jīng)組織分離獲得的具有結實性的蛹蟲草菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物。[來源：

—，2.5.7，有修改]3.3出草 growing

fruiting

body菌絲在柞蠶蛹體內生長至表面形成原基，由原基發(fā)育成子實體的過程。3.4僵化 fossilization柞蠶蛹接種蛹蟲草菌種后，蛹體變僵硬的狀態(tài)。3.5液體菌種 liquid

spanw母種接種于液體培養(yǎng)基擴繁而來的純菌絲體栽培種。3.6菌絲轉色 mycelium

colour在有光條件下，菌絲由白色轉為橙黃或橙色。3.7氣生菌絲aerial

hypha生長在培養(yǎng)基表面空間的菌絲。DB

22/T

3312—2021[來源：

—，2.2.7]4 柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)程序的構成柞蠶蛹蟲草菌種的生產(chǎn)程序包括

5

個階段。程序流程圖如圖

1

圖1柞蠶蛹蟲草菌種生產(chǎn)程序5 生產(chǎn)技術5.1生產(chǎn)條件5.1.1場地環(huán)境要求場地環(huán)境應符合

NY/T

—2010

中

4.2

的規(guī)定。5.1.2 廠房設置出草試驗室等，并合理布局。5.1.3 設施設備設施設備應符合

NY/T

—2010

中

4.4

的規(guī)定。5.2 菌種來源5.2.1應使用種性清楚或者是經(jīng)過農(nóng)作物品種審定委員會登記的蛹蟲草菌種。5.2.2母種在擴繁之前應進行出草試驗，性狀穩(wěn)定的方可投入生產(chǎn)使用,出草試驗設

3

次重復，每次重復至少接種

2

kg

優(yōu)質柞蠶蛹。5.2.3 接種柞蠶蛹后，僵化率和出草率應在

70%

40

d～45

d

時，子實體長度應在

4

～8

cm

之間，且直立、整齊、多且密、橙黃。5.3 母種生產(chǎn)

cm

cm

24

DB

22/T

3312—20215.3.1 試管擴繁5.3.1.1 培養(yǎng)基配制配方及配制方法見附錄

。5.3.1.2 分裝配制好的培養(yǎng)基分裝至

mm×

mm

或

20

×200

mm

的玻璃試管中，分裝量為試管長度5.3.1.3 滅菌將分裝好的試管直立置于高壓蒸汽滅菌鍋，

121

℃

維持

min

80

℃～90

℃時，滅菌鍋放氣閥無蒸汽排出時，方可開啟鍋蓋，取出試管。5.3.1.4 冷卻趁熱將試管的一端斜放在

1

cm

面頂端距棉塞的距離為

4

cm～5

cm，進行冷卻、凝固。5.3.1.5 接種無菌條件下，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種耙切取

3

mm～5

mm×3

mm～5

mm

的一塊母種迅速5.3.1.6 培養(yǎng)在（22±2）℃

條件下避光培養(yǎng)

7

d～10

d

4

℃冰箱中。5.3.1.7 檢驗接種后第

3

d、第

6

d

和菌絲體長滿培養(yǎng)基后逐個進行檢驗，挑出未活、污染和生長不良的培養(yǎng)物，質量應符合表

1

的要求。表1 試管擴繁要求5.3.2 三角瓶擴繁40

mL

24

DB

22/T

3312—20215.3.2.1培養(yǎng)基配制配方及配制方法見附錄

。5.3.2.2 分裝將配制好的培養(yǎng)基分裝于

150

mL

無色耐高溫玻璃三角瓶中，每瓶分裝量為

40

mL干凈，塞好棉塞，并用牛皮紙包扎，培養(yǎng)基上表面距棉塞

5

cm～

cm。5.3.2.3 滅菌分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋，121

℃

30

℃～90

℃

氣閥無蒸汽排出時，方可開啟鍋蓋，取出三角瓶。5.3.2.4冷卻趁熱擺放于潔凈臺面上進行冷卻、凝固。5.3.2.5 接種無菌條件下，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種耙切取

3

mm～5

mm×3

mm～5

mm

大小的菌塊置于培養(yǎng)基上，每管試管擴接

40

瓶～

瓶三角瓶。5.3.2.6 培養(yǎng)在（22±2）℃

條件下避光培養(yǎng)

8

d～11

d

4

℃

冰箱中。5.3.2.7 檢驗接種后第

3

d、第

7

d

和菌絲體長滿培養(yǎng)基后逐個進行檢驗，挑出未活、污染和生長不良的培養(yǎng)物，質量應符合表

2

的要求。表2 三角瓶擴繁要求5.4 液體菌種生產(chǎn)5.4.1 液體培養(yǎng)基配制配方及配制方法見附錄

。200

14

cm15

96

0.5

DB

22/T

3312—20215.4.2分裝將液體培養(yǎng)基分裝至

500

mL

無色耐高溫玻璃三角瓶中，每瓶分裝量為

200

mL，并加入

20?！?5

粒玻璃珠，瓶口保持干凈，瓶塞選用無棉塑料蓋，培養(yǎng)基上表面距離瓶口

14

cm～

cm。5.4.3 滅菌分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋，121℃

維持

30

min，當溫度降至

80

℃～90

℃

時，滅菌鍋放氣閥無蒸汽排出時，方可開啟鍋蓋。5.4.4 冷卻將液體培養(yǎng)基擺放于潔凈臺面上，待冷卻至

30

℃

以下進行接種。5.4.5 接種

4

塊～6

塊大小為

3

～5

mm×3

mm～5

mm的母種接種于液體培養(yǎng)基中，每個三角瓶擴接

10

瓶～15

瓶的液體菌種。5.4.6 培養(yǎng)置于（±2）℃

條件下避光靜止培養(yǎng)

24

h

后，在

150

、±2）℃

條件下，避光震蕩培養(yǎng)

96

h，液體菌種應隨制隨用。5.4.7 檢驗

3的要求。表3 液體菌種要求6 包裝、貯存、運輸6.1 包裝6.1.1 每管或瓶均應有標識，注明廠名、級別、菌號、生產(chǎn)日期。6.1.2 每管或瓶用防震撞的材料進行包裝，注意間隔，以防破損，外包裝選用抗擠壓包裝材料。6.1.3 包裝箱應標明向上放置、防潮、防凍、防日曬、防震撞的圖案。6.2 貯存DB

3312—2021母種在

4

℃～10

℃

貯存不超過

60

d，液體菌種不宜貯存。6.3 運輸運輸不得擠壓，碰撞，在

4

℃～25

℃

7 記錄與檔案7.1 記錄母種、液體菌種生產(chǎn)過程中菌種來源、僵化率、出草率、生產(chǎn)時間、培養(yǎng)條件、數(shù)量、技術負責人、質量檢驗、出廠日期及菌種流向等內容。7.2 記錄應及時歸檔，檔案保存期限為

2

年，做到可追溯。DB

22/T

3312—2021

附 錄 A（規(guī)范性）培養(yǎng)基配方及配制方法A.1 母種培養(yǎng)基配制A.1.1 培養(yǎng)基配方馬鈴薯

g、葡萄糖

g、蛋白胨

10

g、磷酸二氫鈉

g

1.5

g0.7

g

20

g、水

mL，

A.1.2配制方法以配制

mL

培養(yǎng)基為例，將馬鈴薯洗凈去皮，稱取

g

1

×1

cm×1

cm

加蒸餾水

1000

mL，置于不銹鋼鍋內煮沸

15

，用

4

邊攪拌，直到瓊脂完全溶解，定容至

1000

mL。A.2液體菌種培養(yǎng)基配制A.2.1 培養(yǎng)基配方馬鈴薯

g