全國流感監(jiān)測技術(shù)指南

全國流感監(jiān)測技術(shù)指南

要點(diǎn)解析山東省疾病預(yù)防控制中心病毒病所82679461E-mail:crbfzs@vip.163.所有講課PPT都將放在我們公共郵箱里：郵箱名：crbfzs@163密碼：crbfzs.內(nèi)容監(jiān)測目的流感樣病例監(jiān)測流感樣病例爆發(fā)疫情監(jiān)測.一、監(jiān)測目的監(jiān)測流感活動水平和流行動態(tài)；及時發(fā)現(xiàn)流感病毒變異并做出預(yù)警；為全球及我國流感疫苗毒株的預(yù)測和推薦提供依據(jù)。.二、流感樣病例監(jiān)測.監(jiān)測對象和時間監(jiān)測對象：流感樣病例，即發(fā)熱〔體溫≥38℃〕，伴咳嗽或咽痛之一者。監(jiān)測時間：所有國家級流感樣病例監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院和流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室均全年開展流感樣病例監(jiān)測。

.監(jiān)測診室的設(shè)置城市綜合醫(yī)院在內(nèi)科門診、內(nèi)科急診、發(fā)熱門診和〔或〕兒內(nèi)科門診、兒內(nèi)科急診開展流感樣病例的監(jiān)測；內(nèi)科門診開展流感樣病例監(jiān)測的診室應(yīng)包括所有內(nèi)科診室和感染性疾病科。注：包括監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院設(shè)置的發(fā)熱門診和感染性疾病科。城市兒童醫(yī)院在兒內(nèi)科門診、兒內(nèi)科急診和〔或〕發(fā)熱門診開展流感樣病例的監(jiān)測。不能僅將發(fā)熱門診設(shè)為監(jiān)測診室.哨點(diǎn)醫(yī)院監(jiān)測診室的醫(yī)務(wù)人員，按照流感樣病例的定義，每天按科室登記各年齡組的流感樣病例數(shù)和門急診病例就診總數(shù)，由哨點(diǎn)醫(yī)院主管科室每日收集、匯總后，于每周一將本院各監(jiān)測診室上周數(shù)據(jù)錄入到“中國流感監(jiān)測信息系統(tǒng)〞。各市疾控中心每周一15時之前對本轄區(qū)監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院報告的數(shù)據(jù)進(jìn)行審核，并將數(shù)據(jù)匯總后至省疾控中心。流感樣病例數(shù)和門急診病例就診總數(shù)在每個監(jiān)測診室的產(chǎn)生來源必須一致。流感樣病例的報告..北方省份每家哨點(diǎn)醫(yī)院在4-9月份每月采集5-15份流感樣病例標(biāo)本，10月-次年3月每周采集10-15份流感樣病例標(biāo)本。應(yīng)防止集中、突擊采樣。采樣對象：發(fā)病3天內(nèi)的流感樣病例。標(biāo)本采集種類包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子。標(biāo)本采集后放入含3-4ml采樣液的采樣管中。流感樣病例標(biāo)本的采集.標(biāo)本采集后在保證生物平安條件下在48h內(nèi)運(yùn)送至相應(yīng)的流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室，保存溫度為4℃以下；如未能48h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室的，應(yīng)置-70℃或以下保存，并應(yīng)保證采集的標(biāo)本1周內(nèi)送到對應(yīng)的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本應(yīng)防止反復(fù)凍融。全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室的工作人員接到標(biāo)本后，48h內(nèi)將“流感樣病例標(biāo)本原始登記送檢表〞錄入到“中國流感監(jiān)測信息系統(tǒng)〞中。流感樣病例標(biāo)本運(yùn)送..生物平安：BSL-2級及以上實(shí)驗(yàn)室具備病毒別離能力的實(shí)驗(yàn)室：利用狀態(tài)良好的MDCK細(xì)胞進(jìn)行病毒別離。MDCK細(xì)胞病毒別離陽性再用雞胚進(jìn)行病毒別離。

不具備病毒別離能力的實(shí)驗(yàn)室：收到標(biāo)本后1周內(nèi)利用核酸檢測方法進(jìn)行流感病毒亞型鑒定。檢測結(jié)果在檢測完成后48h內(nèi)錄入“中國流感監(jiān)測信息系統(tǒng)〞。流感樣病例實(shí)驗(yàn)室檢測.核酸檢測的及時性

.目前多采用雞胚和MDCK細(xì)胞進(jìn)行流感病毒別離。通過雞胚別離的流感毒株與原始標(biāo)本的抗原性和基因特性可能會有所不同，而通過MDCK細(xì)胞所別離的流感病毒與原始標(biāo)本相似。且MDCK細(xì)胞對“O〞相毒株的敏感性遠(yuǎn)高于雞胚，故MDCK細(xì)胞已成為流感病毒別離不可缺少的一種宿主系統(tǒng)。但目前全球主要使用雞胚進(jìn)行流感疫苗生產(chǎn)，MDCK細(xì)胞別離的病毒在很多國家尚未批準(zhǔn)用于疫苗生產(chǎn)，因此雞胚別離仍然發(fā)揮著舉足輕重的作用。...流感樣病例實(shí)驗(yàn)室檢測標(biāo)本處理：收到標(biāo)本后，24小時內(nèi)進(jìn)行標(biāo)本處理和病毒別離，將原始標(biāo)本分為三份，一份接種MDCK細(xì)胞接種，一份雞胚接種，一份-70℃或以下溫度保存待復(fù)核；標(biāo)本集中、收獲和鑒定：培養(yǎng)1次的陰性標(biāo)本可不再進(jìn)行盲傳，對血凝滴度小于1:16的毒株，稀釋后進(jìn)行傳代。.流感樣病例實(shí)驗(yàn)室檢測各網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室將別離到的所有符合上送標(biāo)準(zhǔn)的流感毒株，同時上送國家流感中心和省級疾病預(yù)防控制中心

。標(biāo)本采集到送至國家流感中心的時間不超過1個月。注：上送標(biāo)準(zhǔn)：HA≥1:16,血凝抑制試驗(yàn)分型，量不低于5.5毫升〔國家3毫升，省疾控中心2.5毫升〕每個開展病毒別離的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室向國家流感中心上送流感毒株數(shù)量每年不低于30株，流行季節(jié)每月不少于5株。....省級參比中心評估方案要求省〔區(qū)、市〕內(nèi)2/3的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室開展流感病毒別離工作；全省〔區(qū)、市〕連續(xù)2年每家開展流感病毒別離的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室每年送國家流感中心的毒株不少于30株；全省〔區(qū)、市〕連續(xù)2年送國家流感中心的毒株復(fù)核一致率在90%以上。.流感樣病例實(shí)驗(yàn)室檢測毒株保存：液體毒株可在-70℃或以下溫度保存3年，凍干保存毒株可在4℃及以下溫度條件長期保存，各網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室對別離出病毒株的原始標(biāo)本應(yīng)在-70℃及以下溫度保存至少6個月。各網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室對HA陽性不能區(qū)分型別或亞型的毒株和陽性標(biāo)本務(wù)必在48小時內(nèi)送至國家流感中心。...三、流感樣病例爆發(fā)疫情監(jiān)測.爆發(fā)疫情定義指一個地區(qū)或單位短時間出現(xiàn)異常增多的流感樣病例。報告標(biāo)準(zhǔn)：〔1〕1周內(nèi)，在同一學(xué)校、幼兒園或其他集體單位發(fā)生30例及以上流感樣病例；或發(fā)生5例及以上因流感樣病癥住院病例〔不包括門診留觀病例〕；或發(fā)生2例及以上有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)的死亡病例?！?〕在某一社區(qū)內(nèi)〔如同一村莊或街道辦事處〕一周內(nèi)出現(xiàn)流感樣病例異常增多。可根據(jù)本地疫情特點(diǎn)及防控工作需要，制定更為敏感的爆發(fā)疫情報告標(biāo)準(zhǔn)。.我省流感監(jiān)測方案〔2021版〕對流感樣病例聚集疫情和爆發(fā)疫情報告要求：⒈流感樣病例聚集疫情監(jiān)測⑴學(xué)校、托幼機(jī)構(gòu)在同一班級或集體單位同一部門一周內(nèi)出現(xiàn)流感樣病例5例以上〔含5例〕，或同一宿舍超過3例以上〔含3例〕，應(yīng)立即報告屬地縣〔市、區(qū)〕疾病預(yù)防控制中心報告?？h〔市、區(qū)〕疾病預(yù)防控制中心接到報告后，應(yīng)立即趕赴現(xiàn)場進(jìn)行疫情核實(shí)、開展流行病學(xué)調(diào)查，并采集標(biāo)本。調(diào)查報告應(yīng)盡快逐級上報給省疾病預(yù)防控制中心，采集標(biāo)本應(yīng)在24小時內(nèi)送達(dá)流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。⑵學(xué)校、托幼機(jī)構(gòu)在同一年級或集體單位一周內(nèi)出現(xiàn)流感樣病例10例以上〔含10例〕、30例以下〔不含30例〕，應(yīng)立即報告所在地縣〔市、區(qū)〕疾病預(yù)防控制中心?？h〔市、區(qū)〕疾病預(yù)防控制中心接到報告后立即報告市級疾控機(jī)構(gòu)，并及時趕赴現(xiàn)場開展流行病學(xué)調(diào)查、采集標(biāo)本。核實(shí)疫情后，2小時內(nèi)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報，調(diào)查報告及時逐級上報省疾病預(yù)防控制中心，同時報告當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門和通報教育行政部門。采集標(biāo)本應(yīng)在24小時內(nèi)送達(dá)流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。在聚集性疫情調(diào)查處理的過程中，根據(jù)疫情進(jìn)展情況，及時對首次報告、進(jìn)程報告和結(jié)案報告進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報。.⒉流感樣病例爆發(fā)疫情監(jiān)測⑴流感樣病例爆發(fā)是指一個地區(qū)或單位短時間出現(xiàn)異常增多的流感樣病例：1周內(nèi)，在同一學(xué)校、幼兒園或其他集體單位發(fā)生30例及以上流感樣病例；或發(fā)生5例及以上因流感樣病癥住院病例〔不包括門診留觀病例〕；在某一社區(qū)內(nèi)〔如同一村莊或街道辦事處〕一周內(nèi)出現(xiàn)流感樣病例異常增多。.各疫情單位發(fā)現(xiàn)流感樣病例聚集性病例或爆發(fā)疫情后，應(yīng)在2小時內(nèi)以或等方式向?qū)俚乜h級疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)〔農(nóng)村學(xué)校向當(dāng)?shù)剜l(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院防保組〕報告?？h級疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)或鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院防保組及時核實(shí)疫情，如到達(dá)報告標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)在2小時內(nèi)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報。

爆發(fā)疫情的發(fā)現(xiàn)與報告.〔1〕首例發(fā)病時間填寫本次爆發(fā)疫情中第一例流感樣病例的發(fā)病時間，末例發(fā)病時間填寫本次爆發(fā)疫情中最后一例流感樣病例的發(fā)病時間?！?〕爆發(fā)疫情事件中確實(shí)診病例要與“疾病監(jiān)測信息報告管理系統(tǒng)〞中的病例個案進(jìn)行關(guān)聯(lián)，未在“疾病監(jiān)測信息報告管理系統(tǒng)〞報告確實(shí)診病例要進(jìn)行補(bǔ)報。〔3〕承擔(dān)檢測工作的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室，要在“中國流感監(jiān)測信息系統(tǒng)〞中錄入標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果。報告該起疫情的疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)將標(biāo)本信息和“疾病監(jiān)測信息報告管理系統(tǒng)〞中病例個案進(jìn)行關(guān)聯(lián)。〔4〕在爆發(fā)疫情調(diào)查處理的進(jìn)程中，各級疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)要及時對?流感樣病例爆發(fā)疫情報告表?首次報告并進(jìn)行更新，并做好進(jìn)程報告和結(jié)案報告。...采集發(fā)病3天內(nèi)流感樣病例的鼻、咽、咽鼻拭子標(biāo)本，必要時可采集急性期〔發(fā)病7天內(nèi)〕和恢復(fù)期〔發(fā)病2-4周〕雙份血清標(biāo)本。每一起爆發(fā)疫情至少采集10份咽、鼻拭子標(biāo)本〔如果現(xiàn)癥病例在10例以下的，應(yīng)全部采樣〕。不能明確病原的可增加采樣批次和數(shù)量。標(biāo)本運(yùn)輸：4℃條件下，于24小時內(nèi)運(yùn)送至流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。爆發(fā)疫情標(biāo)本采集.所有網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室收到爆發(fā)疫情標(biāo)本后，24h內(nèi)利用核酸檢測方法進(jìn)行流感病毒亞型鑒定，檢測結(jié)果在檢測完成后24h內(nèi)上報“中國流感監(jiān)測信息系統(tǒng)〞。具備流感病毒別離能力的流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室：對核酸檢測流感病毒陽性的標(biāo)本進(jìn)行病毒別離。每起爆發(fā)疫情至少對5份核酸檢測陽性的標(biāo)本開展病毒別離，如采集標(biāo)本數(shù)或核酸檢測陽性的標(biāo)本數(shù)小于5份，那么對全部標(biāo)本均進(jìn)行病毒別離。

爆發(fā)疫情標(biāo)本實(shí)驗(yàn)室檢測.2021年4月1日至今，山東省共報告8起流感樣病例聚集性疫情和爆發(fā)疫情，其中濟(jì)南市報告2起，濟(jì)寧市報告6起，共報告流感樣病例病419例，6起發(fā)生在中小學(xué)，2起發(fā)生在村莊；經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測，3起為B型流感，2起為甲型H3N2流感，2起為腺病毒感染，1起未確定性質(zhì)。8起疫情共采集標(biāo)本92份，對其中11份進(jìn)行了病毒別離，1份H3N2陽性，對73份標(biāo)本進(jìn)行了核酸檢測，27份B型陽性，11份H3N2陽性。.........四、流感樣病例標(biāo)本采集.標(biāo)本種類臨床標(biāo)本鼻拭子、咽拭子、鼻咽吸取物等血清標(biāo)本病人的急性期和恢復(fù)期雙份血清流感病毒標(biāo)本采集.臨床樣本收集的本卷須知要做好自我保護(hù)，操作要細(xì)心，嚴(yán)防標(biāo)本間交叉污染采集禽流感疑似病人的標(biāo)本，最好采集下呼吸道吸取物采集標(biāo)本要有一定力度標(biāo)本采集后應(yīng)迅速至于冰上或者4℃以下保存，因?yàn)榱鞲胁《緦岷苊舾?..臨床標(biāo)本處理鼻、咽拭子：為帶有聚丙烯纖維的拭子標(biāo)本，應(yīng)先將帶有聚丙烯纖維的拭子在管壁反復(fù)擠壓后取出。鼻咽抽取液：用干凈滅菌的毛細(xì)吸管在無菌條件下反復(fù)吹打收集的溶液，以便打碎粘液，置4℃待其自然沉淀5～10min，取上清。上清液可直接接種或低溫保存。組織標(biāo)本的處理：取肺組織標(biāo)本放至平皿中，用滅菌生理鹽水清洗肺組織2～3遍，研磨成組織懸液，配置成10％～20％的組織懸液，2000rpm離心10min，參加抗菌素，取上清直接接種。如原始采樣液中未參加抗菌素，應(yīng)在標(biāo)本接種前補(bǔ)加，慶大霉素終濃度為10mg/mL，青/鏈霉素〔終濃度:青霉素G100U/mL,硫酸鏈霉素100μg/mL〕，混勻后置4℃過夜或作用2h后進(jìn)行接種。.血清學(xué)標(biāo)本本卷須知應(yīng)采集急性期和恢復(fù)期的雙份血清采集空腹血.標(biāo)本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里，擰緊；將密閉后的標(biāo)本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標(biāo)本；在采樣管上用油性記號筆做好標(biāo)記用塑料袋密封。同時填寫“流感/人禽流感監(jiān)測病例標(biāo)本原始登記表〞，用另一塑料袋密封；將裝標(biāo)本的密封袋放入專用運(yùn)輸箱內(nèi)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料。同一患者2份以上的密封標(biāo)本，可以放在同一個塑料袋內(nèi)再次做密封。所有容器必須有生物危險標(biāo)識。臨床標(biāo)本的包裝

.五、實(shí)驗(yàn)室檢測.1/2/202455

樣本采集

鼻咽拭子

雙份血清

快速診斷

血凝抑制試驗(yàn)或中和試驗(yàn)

分型鑒定

病毒別離.常采用雞胚和MDCK細(xì)胞別離方法流感病毒別離：生物平安二級實(shí)驗(yàn)室禽流感病毒別離：生物平安三級實(shí)驗(yàn)室病毒別離方法正常細(xì)胞病變細(xì)胞.病毒別離本卷須知細(xì)胞別離流感病毒選擇敏感MDCK細(xì)胞細(xì)胞70～90％成片

雞胚別離流感病毒9日齡SPF雞胚季節(jié)型流感病毒尿囊腔和羊膜腔接種別離病毒人禽流感病毒尿囊腔別離病毒

.流感病毒操作要求生物平安規(guī)程禁止在同一實(shí)驗(yàn)室，同一時間處理接種未知臨床標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)病毒禁止在同一實(shí)驗(yàn)室，同一時間處理接種采自不同動物的標(biāo)本動物標(biāo)本〔如豬、禽等〕必須與人的標(biāo)本分別保存流感病