2023屆新高考生物沖刺復(fù)習(xí)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

2023屆新高考生物沖刺精品復(fù)習(xí)

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

課標(biāo)要求

1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是發(fā)酵工程的基礎(chǔ)。

2.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的基礎(chǔ)。

3.闡明無(wú)菌技術(shù)是在操作過(guò)程中，保持無(wú)菌物品和無(wú)菌區(qū)域不被微生物污染的

技術(shù)。

4.舉例說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的的培養(yǎng)某種微生物。

5.概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和純化的常用

方法。

6.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。

考點(diǎn)一微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

考點(diǎn)二微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

重溫高考真題演練

考點(diǎn)一

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用

L培養(yǎng)基的配制

⑴概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其牛長(zhǎng)繁殖

的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。

⑵用途：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。

(3)類型：按物理狀態(tài)分類

培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途

液體培養(yǎng)基不含凝固劑,呈液體狀態(tài)工業(yè)生產(chǎn)

含凝固劑(如瓊脂),呈固微生物的分離、鑒定，活菌

固體培養(yǎng)基

拴狀態(tài)計(jì)數(shù)，菌種保藏

(4)成分

成分含義作用來(lái)源

構(gòu)成生物體的細(xì)胞的物質(zhì)無(wú)機(jī)碳源：co

提供碳元素2

碳源和一些代謝產(chǎn)物，有些也NaHCOs等；有機(jī)碳源：

的物質(zhì)

是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)糖類、牛肉膏等

無(wú)機(jī)氮源：N>NH3、

提供氮元素2

氮源合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)鍍鹽、硝酸鹽等；有機(jī)

的物質(zhì)

氮源：蛋白豚等

為微生物提供除碳、無(wú)機(jī)化合物：

氮之外的各種重要為微生物提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，KH2Po仆

無(wú)機(jī)鹽

兀素，包括大量兀

調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH等K2HPO4>

素和微量元素NaCl等

生物體含量最高的良好的溶劑，參與化學(xué)培養(yǎng)基、代

水

無(wú)機(jī)化合物反應(yīng)等謝產(chǎn)物

除了上述主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

以及氧氣的需求。例如，在培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)，需要在培養(yǎng)基中添加維生.

素；在培養(yǎng)霉菌時(shí)，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至酸性;在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，一般

需要將培養(yǎng)基調(diào)至生性或弱堿性;在培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)，需要提供三氧_

的條件。

2.無(wú)菌技術(shù)

(1)目的：獲得純凈的培養(yǎng)物。

(2)關(guān)鍵：防止雜菌污染。

(3)區(qū)別：消毒與滅菌的比較

比較項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍

煮沸消毒法日常用品

較為溫和僅殺死物巴氏消毒法不耐高溫的液體

的物理、一體表面或操作空間、操作者的衣

消毒化學(xué)藥物消毒法

化學(xué)或生內(nèi)部一部物和手等

物等方法分微生物接種室、接種箱或超凈

紫外線消毒法

工作臺(tái)

濕熱滅菌法培養(yǎng)基、容器等

殺死物體內(nèi)

強(qiáng)烈的理化外所有的微玻璃器皿、

滅菌干熱滅菌法

方法生物，包括金屬用具等

芽泡和范子

灼燒滅菌法接種工具等

選擇無(wú)菌技術(shù)的原則：一要考慮無(wú)菌技術(shù)的效果，滅菌的效果比消毒要

好；二要考慮操作對(duì)象的承受能力，活體生物材料、操作者的手等只能

采用消毒，而不能用滅菌。

(4)其他操作

①做好消毒和滅菌工作后，要注意避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與晅圍_

的物品接觸。

②為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染，接下來(lái)的許多操作都應(yīng)在超凈工

作臺(tái)上并在酒精紅火焰附近進(jìn)行。

源于選擇性必修3Pi。“相關(guān)信息”：生物消毒法是指利用生

物或其代謝物除去環(huán)境中的部分微生物的方法。

3.微生物的純培養(yǎng)

(1)概念辨析

「一」接種于培養(yǎng)基內(nèi),在合適條件下形成

〔受弛一戶的含特定種類微生物的群體

〃純培養(yǎng)物卜由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體

分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表

’菌落］面或內(nèi)部繁殖形成的肉眼可見(jiàn)的、有

一I-一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體

’純培養(yǎng)「獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程

V_________________________J

⑵酵母菌純培養(yǎng)的操作步驟

配制培養(yǎng)基：稱取去皮的馬鈴薯200g、切塊一

加水1000mL、加熱煮沸一紗布過(guò)濾一

加20g葡萄糖~加15?20g瓊脂，用蒸鐳

I水定容至1000mL

「a.培養(yǎng)基滅菌：濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）法

滅菌J..............................

lb.培養(yǎng)皿滅菌：干熱滅菌法

a.條件：待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在

酒精燈火焰附近倒平板

b.操作步驟:

Inmiv

c.I、U、HI中的滅菌方法是灼燒滅菌

d.N中的操作需要等待平板冷卻凝固

、后才能進(jìn)行

接種和［方法：平板劃線法

分離1原理：通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)

I劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋

分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后

培養(yǎng)，可以分離得到單菌落

r方法：將接種后的平板和一個(gè)未接種的平

板倒置，放入恒溫培養(yǎng)箱中中培養(yǎng)

培養(yǎng)酵＜

母菌,

條件：28七左右

I時(shí)間：24~48h

請(qǐng)思考以下問(wèn)題：

①平板冷凝后，要將平板倒置的原因是什么？

提示因?yàn)槠桨謇淠?，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，平板倒置后，既可避免培

養(yǎng)基表面的水分過(guò)快地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成

污染。

②在接種前隨機(jī)取若干個(gè)滅菌后的未接種的平板，先行培養(yǎng)了一段時(shí)間,

這樣做的目的是.檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格

⑶平板劃線法操作步驟

①將接種環(huán)放在火焰②在火焰旁冷卻接種環(huán).

上灼燒，直到接種環(huán)同時(shí)，拔出裝有障母菌

的金屬絲燒紅培養(yǎng)液的試管的棉塞

⑤將試管口通⑥在火焰附近將皿蓋打開(kāi)

過(guò)火焰，并塞一條縫隙，用接種環(huán)在培

上棉塞養(yǎng)基表面迅速劃三至五條

平行線，蓋上皿蓋

⑦均燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一_

次劃線的末端開(kāi)始作第二次劃線。$^

復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。足魂

注意不要將最后一次的劃線與第一次

的劃線相連。

據(jù)圖思考以下問(wèn)題：

a.第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開(kāi)始，這樣做的目

的是什么？

提示能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由

單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。

b.操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進(jìn)行火焰灼燒滅菌,

劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒的目的填寫(xiě)下表：

項(xiàng)目第一次操作每次劃線之前劃線結(jié)束

殺死上次劃線后接種

環(huán)上殘留的菌種，使

殺死接種環(huán)上殘存的

殺死接種環(huán)上原下次劃線的菌種直接

目的菌種，避免微生物污

有的微生物來(lái)源于上次劃線的末

染環(huán)境和感染操作者

遛，使每次劃線菌種

數(shù)目減少

C.平板劃線時(shí)最后一次劃線為何不能與第一次劃線相連？

提示最后一次劃線已經(jīng)將酵母菌稀釋成單個(gè)細(xì)胞，如果與第一次劃線

相連，則增加了酵母菌數(shù)目，得不到純化的效果。

考向突破強(qiáng)化關(guān)鍵能力

考向一培養(yǎng)基與無(wú)菌技術(shù)

1.無(wú)菌技術(shù)包括以下幾個(gè)方面的敘述，其中正確的是

e紫外線照射前，適量噴灑石炭酸等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果

B.牛奶的消毒常用紫外線消毒法

C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落

D.在微生物接種的實(shí)驗(yàn)中，用95%酒精對(duì)實(shí)驗(yàn)者的雙手和超凈工作臺(tái)進(jìn)

行消毒

2.請(qǐng)回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問(wèn)題：

⑴下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方。

顯色劑

成分蛋白陳乳糖蔗糖K2HPO4瓊脂

含量10.0g5.0g5.0g2.0g0.2g12.0g

將上述物質(zhì)溶解后，用蒸儲(chǔ)水定容到1000mL

該培養(yǎng)基屬于固體（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的氮源

是蛋向陳。

⑵在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿

進(jìn)行滅菌（填“消毒”或“滅菌”）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒。

⑶將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干支試管扎成一捆，

包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌,溫度為121℃,

時(shí)間為15?30min。滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力自然降到大氣壓時(shí),

將試管取出。

(4)從一支試管向另一支試管接種時(shí)應(yīng)注意，接種環(huán)要在酒精燈_火焰的.

一充分燃燒層工填“火焰的不充分燃燒層”或“火焰的充分燃燒層”)滅

菌，并且待接種環(huán)冷卻后蘸取菌種。

考向二微生物的純培養(yǎng)

3.如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?—2—3—4—5,下列說(shuō)

法正確的是

A.操作前要將接種環(huán)用酒精消毒

由戊」線操作須在酒精燈火焰附近進(jìn)行

C.只有在5區(qū)才可以得到所需菌落

D.在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都不需要對(duì)接種環(huán)滅菌

解析

在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)

的滅菌方法應(yīng)是在酒精燈火焰上灼燒，不能用酒

精消毒；在5個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過(guò)

培養(yǎng)即可獲得所需菌落；每次劃線前都要灼燒接種環(huán)，目的是殺死

接種環(huán)上原有的微生物（第一次劃線前）和上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘

留的菌種，使每次劃線的菌種都來(lái)自上一次劃線的末端，劃線結(jié)束

后灼燒接種環(huán)以防止污染環(huán)境和感染操作者。

4.（2022.山西高三適應(yīng)考試）自然界里有多種微生物，將其進(jìn)行合理的篩

選、培養(yǎng)和應(yīng)用，能給醫(yī)藥和化工等生產(chǎn)領(lǐng)域帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)效益。回答

下列問(wèn)題：

⑴對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，多采取高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）法,而對(duì)接種

環(huán)或涂布器滅菌時(shí)則用灼燒滅菌法,若要將微生物采用平板劃線法進(jìn)行

分離操作，在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)進(jìn)行了5次劃線，則需要對(duì)接種環(huán)灼燒

6次。平板劃線在做第二次及其以后的劃線操作時(shí)，要從上次劃線的

末端開(kāi)始劃線,最后一次劃的線不能與第一次劃的線把連。

⑵將接種后的固體培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的固體培養(yǎng)基放入恒溫箱中倒置

培養(yǎng)，以減少培養(yǎng)基中水分的揮發(fā)。其中，培養(yǎng)未接種的固體培養(yǎng)基是

為了作為對(duì)照組，檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否被雜菌污染.

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考點(diǎn)二

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

梳理歸納I夯實(shí)必備知識(shí)

1.區(qū)分選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基

種類特點(diǎn)用途舉例

允許特審種類的微牛物牛.從眾多微生

選擇加入青霉素分離得

長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他物中分離所

培養(yǎng)基到酵母菌和霉菌

種類微生物生長(zhǎng)需的微生物

根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)在

鑒別培養(yǎng)基中加入某種指示劑鑒別不同種用伊紅一亞甲藍(lán)培

培養(yǎng)基或化學(xué)藥品，進(jìn)而產(chǎn)生特類的微生物養(yǎng)基鑒別大腸桿菌

定的顏色或其他變化

常見(jiàn)選擇培養(yǎng)基舉例：①缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的

微生物。②含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細(xì)菌，篩選出真菌。③無(wú)有機(jī)碳源

的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。

2彳微生物的選擇培養(yǎng)和數(shù)量測(cè)定

⑴稀釋涂布平板法步驟

①系列稀釋操作：該操作常用在將細(xì)胞接種到培養(yǎng)基之前，通過(guò)液體稀

釋的方法分散細(xì)胞，隨著稀釋程度的增大，單位體積中的微生物細(xì)胞數(shù)

量減少，細(xì)胞得以分散。

操作步驟:

無(wú)菌水

②涂布平板操作步驟

涂布器

取0.1mL菌液滴加到涂布器浸在盛有

培養(yǎng)基表面酒精的燒杯中

將涂布器在火焰上用涂布器將菌液均勻地涂

灼燒，待酒精燃盡、布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)

涂布器冷卻后，再可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻

進(jìn)行涂布

⑵微生物的數(shù)量測(cè)定方法

①顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,

原理）一在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定容積的樣品中微生

物的數(shù)量

（方法用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)

缺點(diǎn)）一不能區(qū)分死菌與活菌而使計(jì)數(shù)結(jié)果偏大

②間接計(jì)數(shù)法活菌計(jì)數(shù)法（即稀釋涂布平板法）

原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源

于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣

品中大約含有多少活菌。

計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（C：V）xM

C代表某一稀釋’V代表涂布平板'

用代表稀

度下平板上生長(zhǎng)時(shí)所用的稀釋液

釋倍數(shù)

的平均菌落數(shù)的體積（mL）

根據(jù)圖示問(wèn)答以下問(wèn)題：

I.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30?300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

II.為什么用此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低？

提示因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。

III.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為234個(gè)

（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL）,那么稀釋倍數(shù)為106的試管中細(xì)

菌的濃度是一2.34*103個(gè)/mL,稀釋倍數(shù)為10的錐形瓶中細(xì)菌的濃度為

2.34408個(gè)/mL,所以每克樣品中的細(xì)菌數(shù)是2.34”。9個(gè)。

3.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)操作

(1)實(shí)驗(yàn)原理

①土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因

為它們能合成脈酶；

分離②配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠

原理

I在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素

丘勺細(xì)菌_________________

(2)實(shí)驗(yàn)流程

①土壤取樣:從酸堿度接近中性的潮濕土壤中，鏟去表

層土，取距地表3?8cm的土壤層

②樣品的稀釋:通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行

培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30?300的

平板適于計(jì)數(shù)

ra.接種：用稀釋涂布平板法接種;

③微生b.培養(yǎng)條件：30?37"培養(yǎng)一點(diǎn);

物的培(c.觀察：根據(jù)菌落的特征區(qū)分微生物；

養(yǎng)與觀d.計(jì)數(shù):每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取

察菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果

④計(jì)算：計(jì)算單位體積中的菌體數(shù)

(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)對(duì)照的培養(yǎng)皿

,中無(wú)菌落生長(zhǎng)一未被雜菌污染

有無(wú)雜

菌污染,對(duì)照的培養(yǎng)皿

［的判斷)

、中有菌落生長(zhǎng)一被雜菌污染

「培養(yǎng)基］

.選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)選擇培養(yǎng)

是否具

＜目遠(yuǎn)少于牛肉膏蛋白陳一基具篩選

篩選作

、培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目作用

,樣品稀,得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落_操作

釋評(píng)價(jià)數(shù)目在30?300的平板一成功

V_____/

‘重復(fù)組、r比較各一若選取同一種土樣，統(tǒng)

重復(fù)組一計(jì)結(jié)果應(yīng)接近

的結(jié)果I

\_______/

選擇性必修3P19“探究?實(shí)踐”：本活動(dòng)初步篩選了能分解尿

素的細(xì)菌，請(qǐng)進(jìn)一步借助于生物化學(xué)的方法來(lái)鑒定所分離的菌種:

分解尿素的細(xì)菌合成的服酶可以將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基

的堿性增強(qiáng)，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變

紅“何田菌能夠分解尿菽。

考向一微生物的選擇培養(yǎng)

5.（2021.江蘇1月適應(yīng)性考試，14）稀釋涂布平板法是分離菌種常用的方法,

下列相關(guān)敘述不恰當(dāng)?shù)氖?/p>

A.固體培養(yǎng)基滅菌后，應(yīng)冷卻至50c左右時(shí)倒平板

學(xué)到好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長(zhǎng)

C.稀釋涂布平板分離到的單菌落需進(jìn)一步劃線純化

D.稀釋涂布平板法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計(jì)數(shù)

解析

培養(yǎng)基滅菌后需要冷卻至50°C左右時(shí)才能用來(lái)倒平板，避免溫度過(guò)

同，A正確；

倒好的平板需要放置一段時(shí)間，用以觀察培養(yǎng)基是否被雜菌污染，B

錯(cuò)誤；

稀釋涂布平板法分離的單菌落需要用平板劃線法進(jìn)行純化培養(yǎng)，C正確；

稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，也可觀察菌落特征進(jìn)行菌種分離，D正確。

___________________________________________________________J

6.營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株是野生型菌株經(jīng)過(guò)人工誘變或自發(fā)突變失去合成某種

成長(zhǎng)因子的能力，只能在補(bǔ)充了相應(yīng)的生長(zhǎng)因子的基本培養(yǎng)基中才能正常

生長(zhǎng)的變異菌株。某研究小組對(duì)酵母菌用紫外線照射后將其接種到甲培養(yǎng)

皿的培養(yǎng)基上，一段時(shí)間后將甲培養(yǎng)皿的菌落影印接種（不改變菌落位置）到

乙、丙兩培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基中，進(jìn)一步培養(yǎng)得到如下圖所示結(jié)果。

?酵母菌菌落。無(wú)菌落生長(zhǎng)

■酵母菌菌落。無(wú)菌落生長(zhǎng)

下列分析正確的是

A.接種到甲培養(yǎng)皿采用的是平板劃線法

B.甲、丙兩培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基

g年培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少

D.甲、乙、丙三個(gè)培養(yǎng)皿都可能存在營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌落

解析

甲培養(yǎng)皿的菌落均勻分布，接種方法應(yīng)為稀釋涂布平板法，A項(xiàng)錯(cuò)誤;

甲、丙培養(yǎng)基菌落數(shù)目多，包括野生型酵母菌菌株和某種營(yíng)養(yǎng)缺陷型

酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿沒(méi)有生長(zhǎng)的菌株是某種營(yíng)養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株,

故乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，甲和丙生長(zhǎng)了同樣的菌株，則甲

和丙是加入了同種生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基，B項(xiàng)錯(cuò)誤；

甲乙丙

■酵母菌菌落。無(wú)菌落生長(zhǎng)

解析

由于基因突變具有不定向性，接種到甲培養(yǎng)皿的酵母菌可能還有其他

營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株，且有些菌落不一定由一個(gè)酵母菌形成，所以，甲培

養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少，C項(xiàng)正確；

乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基,形成的菌落只可能是野生型菌落,

D項(xiàng)錯(cuò)誤。

影印接種、

甲乙丙

?酵母菌菌落仁，無(wú)菌落生長(zhǎng)

兩種純化方法的比較

項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法

分離國(guó)

結(jié)果

關(guān)鍵接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連①一系列的梯度稀釋；②涂

操作續(xù)劃線布平板操作

接種

接種環(huán)涂布器

用具

兩種純化方法的比較

可以觀察菌落特征，對(duì)混

優(yōu)點(diǎn)可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征

合菌進(jìn)行分離

缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板

都要用到固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無(wú)菌操作；都會(huì)在培養(yǎng)

共同點(diǎn)

基表面形成單個(gè)的菌落；都可用于觀察菌落特征

考向二微生物的分離和計(jì)數(shù)

7.（2020.全國(guó)I,37）某種物質(zhì)S（一種含有C、H、N的有機(jī)物）難以降解，

會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染，只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程

從淤泥中分離得到能高效降解S的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要甲、乙兩種

培養(yǎng)基，甲的組分為無(wú)機(jī)鹽、水和S,乙的組分為無(wú)機(jī)鹽、水、S和Y。

稀釋涂挑單菌多次

高效降

解S的

菌株

無(wú)菌水甲乙甲

回答下列問(wèn)題：

⑴實(shí)驗(yàn)時(shí)，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）的

方法進(jìn)行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是瓊脂。甲、乙培養(yǎng)基均屬于詵擇

培養(yǎng)基。

稀釋涂挑單菌多次

警高效降

人二解S的

菌株

解肺

乙培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中加入的是可使液體培養(yǎng)基凝固

的瓊脂。甲、乙兩種培養(yǎng)基都是為了分離出可降解S的細(xì)菌，因此是

選擇培養(yǎng)基。

⑵實(shí)驗(yàn)中初步估測(cè)搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2"。7個(gè)/mL,若要在每個(gè)平板上

涂布100pL稀釋后的菌液，且保證每個(gè)平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)不超過(guò)200個(gè)，

則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋1。4倍。

多次

臂高效降

三解S的

菌株

解析

設(shè)稀釋倍數(shù)為41mL=1000比，套用計(jì)算式：A*言咚

0.1mL

2M07（個(gè)/mL）,計(jì)算出A=10、

⑶在步驟⑤的篩選過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過(guò)某一濃度時(shí)，某菌

株對(duì)s的降解量反而下降，其原因可能是S的濃度超過(guò)某二值.時(shí)會(huì)抑制直

榛的生長(zhǎng)一（答出1點(diǎn)即可）。

高效降

解s的

菌株

解析

在篩選降解S物質(zhì)的細(xì)菌的過(guò)程中，如果培養(yǎng)基中的s濃度過(guò)高，會(huì)

導(dǎo)致細(xì)菌培養(yǎng)基的滲透壓增大，細(xì)菌失水而代謝活性降低，對(duì)S的降

解量反而下降（或者S改變了培養(yǎng)基的pH,導(dǎo)致細(xì)菌代謝活性降低）。

(4)若要測(cè)定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)，請(qǐng)寫(xiě)出主要實(shí)驗(yàn)步驟：取淤

泥加入無(wú)菌水中，涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)。

稀釋涂挑單菌多次

贊高效降

旦解S的

菌株

無(wú)菌水甲乙甲

解析

測(cè)定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)的主要步驟是①淤泥取樣，即取少

量的淤泥加入無(wú)菌水中；②用稀釋涂布平板法涂布到乙培養(yǎng)基上；③

微生物培養(yǎng)與觀察計(jì)數(shù)。

⑸上述實(shí)驗(yàn)中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細(xì)

菌的生長(zhǎng)提供4類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，即一水二碳遮二氮源和無(wú)機(jī)鹽。

稀釋涂挑單菌多次

警高效降

一f解S的

無(wú)菌水甲乙甲菌株

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1.（2021?山東,14）解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪

酸并吸收利用。脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸

收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌

落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是

A.甲菌屬于解脂菌

中實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源

C.可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比

D.該平板可用來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力

O??(1

----------------------------------------------------------------------------------------------x

根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色”，說(shuō)明甲可以分泌脂肪

酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯?/p>

藍(lán)色，因此甲菌屬于解脂菌，A項(xiàng)正確；

乙菌菌落周圍沒(méi)有出現(xiàn)深藍(lán)色，說(shuō)明乙菌不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利

用脂肪為其供能，但乙菌也可以在培養(yǎng)基上生存，說(shuō)明該培養(yǎng)基不

是以脂肪為唯一碳源，B項(xiàng)錯(cuò)誤；

\)

O②③④

解析

可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比，更加直觀，C

項(xiàng)正確；

可以利用該平板來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標(biāo)可以是

菌落周圍深藍(lán)色圈的大小，D項(xiàng)正確。

O②③④

2.（2021.山東，20）含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生

活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵鏤結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭

水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運(yùn)動(dòng)能力，用穿刺接種的方

法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵鏤的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如圖所

示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是

A.乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)

好不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用液體培養(yǎng)基

C.該實(shí)驗(yàn)不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量

D.穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染

D?(Dg

從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌,

說(shuō)明了乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)，A正確；

為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用半固體培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；

該實(shí)驗(yàn)可以根據(jù)黑色沉淀的多少初步比較細(xì)菌產(chǎn)

生硫化氫的能力，但不能測(cè)定產(chǎn)生硫化氫的量，C正確;

微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。

D?③g

3.（2020.江蘇，19）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)

菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是［區(qū)

A.倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整夕

電圖中I、II區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從ni區(qū)挑取單菌落至J

c.該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的\--y

、一/n區(qū)

D.菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色

12O4

解析

溫度降低后，培養(yǎng)基易凝固，因此倒平板后要及時(shí)區(qū)

輕輕晃動(dòng)，以保持均一性，A項(xiàng)錯(cuò)誤；涔

由題圖可見(jiàn)，隨著劃線次數(shù)增多，細(xì)菌密度減小，:

ni區(qū)開(kāi)始出現(xiàn)單菌落，應(yīng)從ni區(qū)挑取單菌落，B項(xiàng)正確;區(qū)

菌落是由單個(gè)微生物細(xì)胞或多個(gè)同種細(xì)胞繁殖到一定程度后形成的，

能得到單菌落即可以達(dá)到菌種純化的目的，c項(xiàng)錯(cuò)誤；

剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，菌落周圍的纖維素被降解后紅色

消失，出現(xiàn)透明圈，D項(xiàng)錯(cuò)誤。

?）（2）?（4

4.（2020?江蘇，31）產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵

母菌株，科研人員開(kāi)展了相關(guān)研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

⑴常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)中，下列物品及其滅菌方法錯(cuò)誤的是金（填編號(hào)）。

編號(hào)①②③

物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器

滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧

D@@O

⑵稱取1.0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無(wú)菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)才弟度_

稀釋_后，獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液。分別取0」mL菌懸液涂布在固體

培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長(zhǎng)出了46個(gè)酵母菌落，則

該樣本中每克土壤約含酵母菌4.6，105（或460000）個(gè)。

123

解所

利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，需要將制備的菌懸液進(jìn)行梯

度稀釋，以獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液，一般來(lái)說(shuō)，菌落數(shù)在30?

300個(gè)的平板最適于計(jì)數(shù)。0.1mL菌懸液中含有46個(gè)酵母菌落，貝”mL

菌懸液中含有460個(gè)酵母菌落；1.0g土壤樣品首先稀釋100倍，然后

稀釋10倍，共稀釋了1000倍，因此樣本中每克土壤約含酵母菌

460，1000=4.6*1。5（個(gè)）。

①②叵

⑶為了進(jìn)一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對(duì)分離所得的菌株，采用射線輻照

進(jìn)行誘變育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以噩位為唯一碳源的固體

培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，按照菌落直徑大小進(jìn)行初篩，選擇直徑較大

的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。

123

解析

采用射線輻照引起酵母菌基因突變，此種方法屬于誘變育種。檢查

誘變酵母菌產(chǎn)脂肪酶的能力，需要把酵母菌接種到以脂肪為唯一碳

源的培養(yǎng)基上，按照產(chǎn)生菌落直徑大小進(jìn)行初步篩選，直徑大的說(shuō)

明產(chǎn)酶能力強(qiáng)，利用的脂肪（碳源）多，直徑小的說(shuō)明產(chǎn)酶能力弱，

利用的脂肪（碳源）少。

（T）（2）（3

(4)在處理含油廢水的同時(shí)，可獲得單細(xì)胞蛋白，實(shí)現(xiàn)污染物資源化。為

評(píng)價(jià)A、B兩菌株的相關(guān)性能，進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，

應(yīng)選擇菌株』進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是_該菌株增殖速度快，一單細(xì)胞

蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強(qiáng)，凈化效果好。

菌株A-脂菌株B-細(xì)

(肪剩余胞密度

O

QO2.5-+---+-■100

O

)2。-80

W

菌株-細(xì)

拚A

-60

是胞密度

每1.0