基于血小板活化生物標(biāo)志物檢測的中藥注射劑活血化瘀活性評價方法操作規(guī)程-征求意見稿_第1頁
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1基于血小板活化生物標(biāo)志物檢測的中藥注射劑活血化瘀活性評價方法操作規(guī)程本文件規(guī)定了體外血小板活化生物標(biāo)志物評價中藥注射劑活血化瘀活性的實(shí)驗(yàn)方4檢測原理2強(qiáng)的相關(guān)性。二磷酸腺苷（ADP）為一種較為溫和的血小板活化誘導(dǎo)劑，可適度活化血小板，引發(fā)后續(xù)5材料與設(shè)備5.1材料生產(chǎn)許可證資質(zhì)的單位購進(jìn)。在實(shí)驗(yàn)期間應(yīng)按國家對實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)條件要求進(jìn)行飼養(yǎng)。動物飼養(yǎng)符合a）anti-mouse/ratCD62pPE/Cy7、Anti-Mouse/RatCD61PE、RatIgG2aP;ADP激活血樣的制備：分別取上述基礎(chǔ)血樣和加藥血樣，各加入100ul濃度為20uM的ADP激活，使得ADP的終濃度為10uM，渦旋混勻1s，反應(yīng)2min。上述各血樣加入不同抗體后，4℃±1℃避光孵育20min。分別取固定后的各組血樣50ul,加入1ml稀釋液稀釋（稀釋約250倍），可根據(jù)情況適當(dāng)調(diào)整稀釋倍數(shù)，防止?jié)舛冗^大，分離不佳。加入稀釋液4），c）上樣速度控制細(xì)胞獲取速度在每秒200-400個細(xì)胞，一般a）R1門的劃定確定靶細(xì)胞群（單一的血小板），同時去除細(xì)胞碎片和細(xì)胞聚集體對試驗(yàn)的干擾。采用488nm氬離子激光（BLUE488nm在以CD61-PE-小的細(xì)胞團(tuán)為單一的血小板。將血小板圈定為R1門，門內(nèi)收集5000-1

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