細(xì)胞培養(yǎng)概述課件

細(xì)胞培養(yǎng)概述

體外培養(yǎng)

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從動(dòng)物活體體內(nèi)取出組織，

于模擬體內(nèi)生理環(huán)境等特定的條件下，

進(jìn)行孵育培養(yǎng)，使之生存并增殖細(xì)胞培養(yǎng)把取得組織用機(jī)械或消化方法分散成單亇細(xì)胞

懸液，然后進(jìn)行培養(yǎng)、增殖。組織[塊]培養(yǎng)把活體的小片組織置于底物上孵育，

細(xì)胞自其周圍移出并增殖器官培養(yǎng)將活體的器官或器官的一部分取出，置于體外,在

適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，氣相條件和生長(zhǎng)基質(zhì)等條件下，

生存、生長(zhǎng)并同時(shí)保持其一定的結(jié)構(gòu)和功能持征。

器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)中的小塊組織塊包含了不止一種基本組織。是由幾種組織共同構(gòu)成的具有器官的結(jié)構(gòu)和功能特征的組織塊。培養(yǎng)時(shí),其內(nèi)部的細(xì)胞能按照在體內(nèi)器官的正常生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律繼續(xù)生長(zhǎng)，培養(yǎng)的器官內(nèi)部結(jié)構(gòu)與體內(nèi)相似，保持與在體內(nèi)時(shí)相似的解剖關(guān)系和功能特征。器官培養(yǎng)的目的在體外環(huán)境下維持器官內(nèi)部的發(fā)育分化以及結(jié)構(gòu)與功能特征，以便直接觀察和研究器官的發(fā)育分化過程、功能表現(xiàn)及其影響因素。。細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)

1.活細(xì)胞：

能長(zhǎng)時(shí)間、直接觀察、研究

活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)

優(yōu)點(diǎn)

3.應(yīng)用廣：

學(xué)科多：

對(duì)象廣：

各種動(dòng)物：低等動(dòng)物--高等動(dòng)物--人類

一種動(dòng)物：不同年齡--

不同組織--

正常或異常（腫瘤--）

優(yōu)點(diǎn)4.較經(jīng)濟(jì)：

可提供大量、同時(shí)、重復(fù)性好的、

生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象細(xì)胞培養(yǎng)的缺點(diǎn)

現(xiàn)人工模擬體內(nèi)環(huán)境的技術(shù)已經(jīng)很高,

但,人工所模擬的條件與體內(nèi)實(shí)際情況

仍不完全相同.

當(dāng)細(xì)胞被置于體外培養(yǎng)后,

生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡的環(huán)境中,

久了，發(fā)生變化.與體內(nèi)主要不同

缺乏體內(nèi)的系統(tǒng)作用、

失去神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)

和細(xì)胞相互間的影響

缺點(diǎn)

因此，相對(duì)孤立、相對(duì)單一失去原有組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)分化減弱或不顯

細(xì)胞趨向單一化

3.提示

要正確認(rèn)識(shí)體外培養(yǎng)細(xì)胞

是一種特定條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞群體。生長(zhǎng)類型按生長(zhǎng)方式:2型

粘附型細(xì)胞:能附著在某一固相支持物表面

生長(zhǎng)的細(xì)胞。

懸浮型細(xì)胞:不必附著于固相支持物表面，而

在懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)的細(xì)胞。

絕大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞屬粘附型細(xì)胞，

只有少數(shù)細(xì)胞類型，如某些腫瘤細(xì)胞和白細(xì)胞

可在懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)貼附(粘附)型細(xì)胞

粘附:是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞在體內(nèi)

生存和生長(zhǎng)發(fā)育的基本存在方式含義兩方面結(jié)果基于粘附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織，

有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須

粘附于一固相表面

才能生存和生長(zhǎng)。

培養(yǎng)時(shí)：細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要粘附于某一固相表面才能生存和生長(zhǎng)，因而

屬于粘附型細(xì)胞。粘附(錨定或錨著)依賴型性細(xì)胞：

唯有粘附于固相表面才能生存的細(xì)胞

類型

細(xì)胞在體內(nèi)、外的粘附方式：存在差異

體內(nèi)：粘附是全方位-

外形具有復(fù)雜的立體特征

體外：多數(shù)情況，細(xì)胞只有一個(gè)附著平面

外形一般與體內(nèi)時(shí)明顯不同

按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型

分類

根據(jù)形態(tài)大致的不同，主要2類：

上皮樣成纖維細(xì)胞樣

其它，不定型上皮樣細(xì)胞型

名稱：僅形態(tài)上似體內(nèi)，實(shí)際上不完全等于--來源：來源于外胚層

如：皮膚及其衍生物消化道，乳腺，肺泡上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細(xì)胞

扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核

生長(zhǎng)特點(diǎn)

易相連成片

相靠—緊密相連—成薄層—

鋪石狀

生長(zhǎng)時(shí)呈膜狀移動(dòng)

很少脫離細(xì)胞群而單個(gè)活動(dòng)

成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞

名稱：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細(xì)胞類似的來源：由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織

如：真正的成纖維細(xì)胞心肌，平滑肌，成骨細(xì)胞，形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài)

胞體梭形或不規(guī)則三角形

胞質(zhì)向外伸出2—3個(gè)長(zhǎng)短不等的突起

中有卵圓形核生長(zhǎng)特點(diǎn)

排列成放射狀，漩渦狀

并不緊靠連成片，

細(xì)胞—細(xì)胞接觸易斷開而

單獨(dú)行動(dòng)

游離的單獨(dú)的成纖維樣細(xì)胞，

常有幾個(gè)伸長(zhǎng)的細(xì)胞突起

注意：貼附生長(zhǎng)型--類型1.與體內(nèi)同名的細(xì)胞不完全相同

如：形態(tài)相似的成纖維細(xì)胞，可不同來源

自同一動(dòng)物不同組織的成纖維樣細(xì)胞相似但

發(fā)展趨向不同2.培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)不穩(wěn)定

條件改變，細(xì)胞形態(tài)可有變化培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)不穩(wěn)定

血清

Hela高血清低血清

成纖維細(xì)胞樣上皮樣細(xì)胞

pH

Hela太酸或太堿標(biāo)準(zhǔn)pH

成纖維細(xì)胞樣上皮樣細(xì)胞

細(xì)胞密度

3T3低密度高密度

成纖維細(xì)胞樣上皮樣細(xì)胞

生長(zhǎng)狀態(tài)改變

懸浮或貼附

懸浮貼附

圓形成纖維或上皮樣

轉(zhuǎn)化與否

未轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化后

成纖維樣可成上皮樣

注意細(xì)胞鑒定懸浮生長(zhǎng)型

概念

培養(yǎng)時(shí)不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)

或以機(jī)械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)來源

自血，脾或骨髓，尤以血中白細(xì)胞

癌腫細(xì)胞也可能特點(diǎn)

在懸浮中生長(zhǎng)良好細(xì)胞圓形，單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán)優(yōu)點(diǎn)

生存空間大，提供數(shù)量大