微生物綜合實驗報告

微生物綜合實驗報告姓名：楊延景班級：食品1101學號：32指導老師：郭永目錄項目一食品中菌落總數的測定前言…………3實驗目的…………………….3實驗原理………………….3實驗器材……………………3實驗步驟……………………4實驗結果以及分析………7國標中微生物菌落總數標注......................7項目二大腸菌群的測定實驗目的……………………9實驗原理………………9實驗器材……………………9實驗步驟……………………10實驗結果以及分析…………15項目三革蘭氏染色實驗器材……………………18實驗步驟……………………18實驗結果……………………18 四實驗感想項目一食品中菌落總數的測定前言隨著生活人們生活水平的提高，和社會的發(fā)展與進步食品安全問題越來越受到人們的關注，然而食品方面的問題這幾年也越來越突出，食品安全問題屢見不鮮。由前幾年的“蘇丹紅紅心鴨蛋”再到這幾年的“三聚氰胺奶粉事件”和“瘦肉精事件”還有“地溝油”等等一系列的事件都不得不讓人們對食品安全問題高度關注。然而食品中微生物的菌落總數是用來判定食品被細菌污染的程度即清潔狀態(tài)及其安全質量，它反映食品在生產過程中是否符合國家食品安全標準要求，以便對被檢樣品做出適當的食品安全評價。然而微生物的檢測主要依靠菌落總數(colonycount)的測定，菌落總數的測定是指食品檢樣經過處理，在一定的條件下(樣品處理、培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度和時間、pH、需氧條件)培養(yǎng)后，所得到的每單位食品(1g、1mL或1cm2)中所含細菌菌落的總數。所以說通過這些實驗讓我們更好的掌握菌落總數的測定一方面要求和配置；.掌握我國食品安全標準中微生物檢驗指標及意義；.掌握常見各類食品微生物檢驗采樣方法；.掌握食品微生物檢驗各項指標檢驗方法和技能；在我們以后的日常工作和學習中更好的為人們服務。實訓一食品中菌落總數的測定一、實驗目的1.學習并掌握食品中菌落總數的原理和基本方法，以判別食品的質量；2.體會食品菌落總數檢驗的目的和意義。二、實驗說明菌落總數是指食品檢樣經過處理，在一定條件下培養(yǎng)后，所得1g或1mL檢樣中所含細菌菌落總數。菌落總數主要作為判別食品被污染程度的標志，也可以應用這一方法觀察細菌在食品中繁殖的動態(tài)，以便對被檢樣品進行食品安全與質量評價時提供依據。三、實驗器材1．培養(yǎng)基：平板計數瓊脂培養(yǎng)基，磷酸鹽緩沖液，無菌生理鹽水。2．儀器用具：恒溫培養(yǎng)箱（36℃）、恒溫水浴鍋、酒精燈、試管架、無菌培養(yǎng)皿、無菌移液管（10mL和1mL）、無菌不銹鋼勺、酒精燈。四、操作步驟圖9-1食品中菌落總數的測定1．取樣、稀釋（1）以無菌操作，取檢樣25g（或25mL）剪碎放于含有225mL滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液的滅菌玻璃瓶內（瓶內預置適量的玻璃珠）或滅菌乳缽內，經充分振搖或研磨制成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣在加入稀釋液后，最好置滅菌均質器中以8000～10000r/min的速度處理1min，制成1:10的均勻稀釋液。（2）用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液的試管內，振搖試管混合均勻，制成1:100的稀釋液。（3）另取1mL滅菌吸管，按上項操作順序，制10倍遞增稀釋液，如此再遞增稀釋一次。（4）根據對樣品污染情況的估計選擇2～3個適宜稀釋度，分別在制作10倍遞增稀釋的同時，以吸取該稀釋度的吸管移取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。（5）及時將15～20mL冷卻至46℃的平板計數瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46±1℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。2．培養(yǎng)（1）待瓊脂凝固后，翻轉平板，置36±1℃溫箱內培養(yǎng)48±2h，水產品30±1℃培養(yǎng)72±3h。（2）如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4mL），凝固后翻轉平板，按上述條件進行培養(yǎng)。3.菌落計數可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位（colony-formingunits，cfu）表示。3．菌落計數（1）選取菌落數在30～300cfu之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30cfu的平板記錄具體菌落數，大于300cfu的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。（2）其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數。（3）當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數。4．菌落總數的計算方法（1）若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每g（mL）樣品中菌落總數結果。（2）若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時，按以下公式計算：式中：N——樣品中菌落數ΣC——平板（含適宜范圍菌落數的平板）菌落數之和；n1——第一稀釋度（低稀釋倍數）平板個數；n2——第二稀釋度（高稀釋倍數）平板個數；d——稀釋因子（第一稀釋度）。示例：稀釋度1:100（第一稀釋度）1:1000（第二稀釋度）菌落數（cfu）232,24433,35上述數據修約后，表示為25000或×104。（3）若所有稀釋度的平板上菌落數均大于300cfu，則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。（4）若所有稀釋度的平板菌落數均小于30cfu，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。（5）若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。（6）若所有稀釋度的平板菌落數均不在30～300cfu之間，其中一部分小于30cfu或大于300cfu時，則以最接近30cfu或300cfu的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。5．菌落總數的報告（1）菌落數小于100cfu時，按“四舍五入”原則修約，以整數報告。（2）菌落數大于或等于100cfu時，第3位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數字，后面用0代替位數；也可用10的指數形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數字。（3）若所有平板上為蔓延菌落而無法計數，則報告菌落蔓延。（4）若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結果無效。（5）稱重取樣以cfu/g為單位報告，體積取樣以cfu/mL為單位報告。五、實驗結果示例稀釋度1:100（第一稀釋度）1:1000（第二稀釋度）菌落數（cfu）232,24433,35上述數據修約后，表示為25000或×104。國標中的菌落總數1、膨化食品的落菌總數標準依據國家強制性標準GB17401-2003《膨化食品衛(wèi)生標準》規(guī)定，膨化食品的菌落總數應為≤10000cfu/g、大腸菌群應為≤90MPN/100g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格膨化食品。2、固體飲料的落菌總數標準依據國家強制性標準GB7101-2003《固體飲料衛(wèi)生標準》規(guī)定，固體飲料產品的菌落總數應≤1000cfu/g；大腸菌群應≤90MPN/100g；霉菌應≤50cfu/g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格固體飲料。3、糕點、面包、月餅的落菌總數標準糕點、面包、依據國家強制性標準GB7099-2003《糕點、面包衛(wèi)生標準》規(guī)定，月餅產品中菌落總數不得超過1500cfu/g，大腸菌群不得超過30MPN/100g，霉菌計數不得超過100cfu/g；蛋糕生產的標準要求：菌落總數≤10000cfu/g，大腸菌群≤300MPN/100g，霉菌≤150cfu/g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格糕點類產品。4、食醋的落菌總數標準依據國家強制性標準GB2719-2003《食醋衛(wèi)生標準》規(guī)定，食醋中菌落總數不得超過10000cfu/mL，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格食醋。5、冷凍飲品的落菌總數標準依據國家強制性標準《冷凍飲品衛(wèi)生標準》規(guī)定，含淀粉或果類的冷凍飲品菌落總數應≤3000cfu/g,大腸菌群應≤100MPN/100g；含乳蛋的冷凍飲品的菌落總數應≤25000cfu/g,大腸菌群應≤450MPN/100g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格雪糕或冷飲。6、餅干的落菌總數標準依據國家強制性標準GB7100-2003《餅干衛(wèi)生標準》規(guī)定，非夾心餅干的菌落總數不得超過750cfu/g，夾心餅干菌落總數不得超過2000cfu/g；餅干產品的霉菌計數不得超過50cfu/g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格餅干。7、巴氏殺菌、滅菌乳的落菌總數標準巴氏殺菌、依據國家強制性標準GB19645-2005《巴氏殺菌、滅菌乳衛(wèi)生標準》規(guī)定，滅菌乳菌落總數不得超過10cfu/g，大腸菌群不得超過3MPN/100g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格乳制品。8、蜜餞的落菌總數標準依據國家強制性標準GB14884-2003《蜜餞衛(wèi)生標準》規(guī)定，蜜餞食品中菌落總數不得超過1000cfu/g；霉菌不得超過50cfu/g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格乳蜜餞產品。9、調味品的落菌總數標準調味品的落菌總數標準依據SB／T10371-2003《雞精調味料》標準規(guī)定，雞精調味料中大腸菌群不得超過90MPN／100g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格雞精產品。10、瓶裝水的落菌總數標準依據國家強制性標準GB17324-2003《瓶裝飲用純凈水衛(wèi)生標準》規(guī)定，飲用純凈水的菌落總數應≤20cfu/ml，大腸菌群≤3MPN/100ml；強制性國家標準GB19298-2003《瓶（桶）裝飲用水衛(wèi)生標準》規(guī)定，飲用水的菌落總數應≤50cfu/ml，大腸菌群應≤3MPN/100ml；強制性國家標準GB8537-1995《飲用天然礦泉水》規(guī)定，天然礦泉水的菌落總數為<50cfu/ml，大腸菌群為0。若超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格純凈水或礦泉水。11、醬腌菜的落菌總數標準依據國家強制性標準GB2714-2003《醬腌菜衛(wèi)生標準》規(guī)定，醬腌菜產品的大腸菌群不得超過30MPN/100g，若超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格醬腌12、食糖的落菌總數標準依據國家強制性標準GB13104-2005《食糖衛(wèi)生標準》規(guī)定，白砂糖、綿白糖的菌落總數不得超過100cfu/g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格糖制品。13、肉干、肉鋪的落菌總數標準肉干、依據強制性國家標準GB2726-2005《熟肉制品衛(wèi)生標準》規(guī)定，肉制品中大腸菌群不得超過30MPN/100g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格肉制品。14、油炸小食品的落菌總數標準依據國家強制性標準GB16565-2003《油炸小食品衛(wèi)生標準》規(guī)定，油炸類炒貨大腸菌群為≤30MPN/100g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格炒貨制品。15、果、蔬汁飲料的落菌總數標準15、依據國家強制性標準GB19297-2003《果、蔬汁飲料衛(wèi)生標準》規(guī)定，果(蔬)汁及果(蔬)汁飲料產品的菌落總數不得超過100cfu/mL，酵母不得超過20cfu/mL，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格果、蔬汁飲料。16、果凍的落菌總數標準依據國家強制性標準GB19299-2003《果凍衛(wèi)生標準》規(guī)定，果凍中菌落總數≤100cfu/g、大腸菌群≤30MPN/100g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格果凍產品。17、黃酒的菌落總數標準依據國家強制性標準GB2758-2005《發(fā)酵酒衛(wèi)生標準》規(guī)定，黃酒產品的菌落總數應≤50cfu/ml，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格黃酒。18、芝麻醬的菌落總數標準依據國家標準規(guī)定芝麻醬產品的大腸菌群應≤90個/100g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格芝麻醬。19、碳酸飲料的菌落總數標準依據國家強制性標準《碳酸飲料衛(wèi)生標準》規(guī)定，碳酸飲料產品的酵母應≤10cfu/mL，菌落總數應≤100cfu/mL，大腸菌群應≤6MPN/100mL；超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格碳酸飲料。20、熟肉制品的菌落總數標準強制性國家標準GB2726-2005《熟肉制品衛(wèi)生標準》規(guī)定，菌落總數標準限量值為≤30000cfu/g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格熟肉制品。21、豆制品及面筋的菌落總數標準依據國家強制性標準GB2711-2003《非發(fā)酵性豆制品及面筋衛(wèi)生標準》規(guī)定，定型包裝非發(fā)酵豆制品的菌落總數為≤750cfu/g；依據國家強制性標準GB2712-2003《發(fā)酵性豆制品衛(wèi)生標準》規(guī)定，定型包裝發(fā)酵性豆制品的大腸菌群為≤30MPN/100g。若超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格豆制品或面筋。22、方便面的菌落總數標準依據國家強制性標準GB17400-2003《方便面衛(wèi)生標準》規(guī)定，方便面的面塊+調料菌落總數為≤50000cfu/g，大腸菌群為≤150MPN/100g，超過國家標準規(guī)定可判斷為不合格方便面。實訓二食品中大腸菌群的測定一、實驗目的1．學習和掌握食品中大腸菌群的檢測原理和方法，以判別食品的安全與質量優(yōu)劣；2．體會大腸均群在食品安全與質量檢驗中的意義。二、實驗說明大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的，經37℃24～48h培養(yǎng)能產酸產氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛(wèi)生質量，同時可以推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。三、實驗器材1．儀器和材料恒溫培養(yǎng)箱（36℃）、恒溫水?。?6℃）、冰箱（2～5℃）、天平、顯微鏡、溫度計、500mL無菌錐形瓶1個（內裝225mL無菌水和適量玻璃珠）、無菌培養(yǎng)皿（90mm）10套、1mL無菌吸管10支、10mL無菌吸管10支、50mL試管10支、無菌生理鹽水200mL；火柴、載玻片、接種針、試管架、杜氏管10支。圖放好倒置杜氏管的試管2．培養(yǎng)基及試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉湯、煌綠乳糖膽鹽（BrilliantGreenLactoseBile，BGLB）肉湯、結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VioletRedBileAgar，VRBA）、磷酸鹽緩沖液、無菌生理鹽水、無菌1mol/LNaOH、無菌1mol/LHCl、9mL乳糖膽鹽發(fā)酵管12支、乳糖發(fā)酵管12支、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基（EMB）150mL、革蘭氏染色液1套。四、操作步驟方法1：大腸菌群LST肉湯培養(yǎng)基MPN計數法圖食品中大腸菌群MPN計數法檢驗程序1．采樣及稀釋（1）固體和半固體樣品：稱取25g樣品,放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000r/min～10000r/min均質1min～2min，或放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。（2）液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。（3）樣品勻液的pH值應在～之間，必要時分別用1mol/LNaOH或1mol/LHCl調節(jié)。（4）用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩緩注入9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1mL無菌吸管反復吹打，使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。（5）根據對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15min。2.乳糖初發(fā)酵試驗每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯，每管接種1mL（如接種量超過1mL，則用雙料LST肉湯），36±1℃培養(yǎng)24±2h，觀察倒管內是否有氣泡產生，24±2h產氣者進行復發(fā)酵試驗，如未產氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48±2h，產氣者進行復發(fā)酵試驗。未產氣者為大腸菌群陰性。3.復發(fā)酵試驗用接種環(huán)從產氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管中，36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察產氣情況。產氣者，為大腸菌群陽性管。4.大腸菌群最可能數（MPN）的報告根據大腸菌群LST陽性管數，檢索MPN表（如表9-1所示），報告每g（mL）樣品中大腸菌群的MPN值。表9-1大腸菌群最可能數（MPN）檢索表陽性管數MPN95%置信區(qū)間陽性管數MPN95%置信區(qū)間下限上限下限上限000<--2202142001221289401011222359401118230299402018231369403038300239410118302641718010211383104391801102031175172001111138312120374201201142313160404201211542320931842013016423211503742020038322210404302011442323290901000202204233024042100021015423314609020002112042332110018041002122794333>1100420--注1.本表采用3個稀釋度[(mL)、(mL)和(mL)]、每個稀釋度接種3管。2.表內所列檢樣量如改用lg(mL)、(mL)和(mL)時，表內數字應相應降低10倍；如改用(mL)、(mL)、(mL)時，則表內數字應相應增高10倍，其余類推。方法2：大腸菌群平板計數法1.大腸菌群平板計數法檢驗程序圖大腸菌群平板計數法的檢驗程序2.操作步驟（1）樣品的稀釋。同大腸菌群MPN計數法。（2）平板計數a.選取2～3個適宜的連續(xù)稀釋度，每個稀釋度接種2個無菌平皿，每皿1mL。同時取1mL生理鹽水加入無菌平皿作空白對照。b.及時將15～20mL冷至46℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）傾注于每個平皿中。小心旋轉平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3～4mLVRBA覆蓋平板表層。翻轉平板，置于36±1℃培養(yǎng)18～24h。(3)平板菌落數的選擇選取菌落數在15～150cfu之間的平板，分別計數平板上出現的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為或更大。(4)證實試驗從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于BGLB肉湯管內，36±1℃培養(yǎng)24～48ｈ，觀察產氣情況。凡BGLB肉湯管產氣，即可報告為大腸菌群陽性。3.大腸菌群平板計數的報告經最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以（3）中計數的平板菌落數，再乘以稀釋倍數，即為每g（mL）樣品中大腸菌群數。例：10-4樣品稀釋液1mL，在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落，挑取其中10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數為：100×6/10×104/g（mL）＝×105cfu/g（mL）。方法3：生活飲用水中大腸菌群乳糖膽鹽培養(yǎng)基MPN計數法引自GB/T《生活飲用水標準檢驗法》中大腸菌群的檢驗，為我國大多數衛(wèi)生單位和水廠所使用，食品企業(yè)檢驗所用水一般也采用此法。它包括初發(fā)酵試驗、平板分離和復發(fā)酵試驗三個部分。1.方法與步驟（1）采樣：取100mL磨口帶塞玻璃瓶，包扎后，干熱滅菌備用。取自來水樣時，至少應先放水5min，以沖去龍頭口所帶的微生物，獲得主流管中有代表性的水樣。取樣時，用右手握瓶，左手啟開瓶塞，用覆蓋瓶口的紙托住瓶塞，收集樣品后，連同覆蓋紙一起將瓶口塞好，并用線繩在原處扎好。注意手指不得觸及瓶口內部。在靜水中取樣時，先用右手揭去塞子，瓶口朝下浸入水下約30cm處，然后將瓶子反轉過來，待水注滿后，取出塞好瓶口。如果水在流動，瓶口必須迎著水流，以免手上的細菌被水沖進瓶子。水樣放置過程中，內含的細菌數目和類型會發(fā)生變化，所以要求水樣品應于6～10℃貯存，并不超過6h。圖9-5生活飲用水中大腸菌群的檢驗程序（2）初發(fā)酵試驗：吸取待檢樣品接種于乳糖蛋白胨發(fā)酵管內，10mL接種量采用雙料發(fā)酵管，而lmL及l(fā)mL以下接種量采用單料管。如取10mL雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，取1mL水樣接種到10mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，另取1mL水樣注入到9mL滅菌生理鹽水中，混勻后吸取1mL注入到10mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，每一稀釋度接種5管。對于已經處理過的出廠自來水，需經常檢驗或每天檢驗一次的，可直接接種5份10mL水樣雙料培養(yǎng)基，每份接種10mL水樣。檢驗水源水時，如污染較嚴重，應加大稀釋度，可接種甚至，每個稀釋度接種5管，每個水樣共接種15管。接種1mL以下水樣時，必須作10倍遞增稀釋后，取1mL接種，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌刻度吸管。將接種管置于36士1℃培養(yǎng)24士2h。如所用乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產氣產酸，則可報告為總大腸菌群陰性，如有產酸、產氣的發(fā)酵管，按下列程序繼續(xù)進行檢驗。（3）分離培養(yǎng)在指示性培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)：將產氣的發(fā)酵管中的發(fā)酵液分別接種在EMB（伊紅美藍瓊脂）平板上劃線分離，置于36士1℃培養(yǎng)18～24h，觀察菌落形態(tài)，挑取符合下列特征的菌落作為革蘭氏染色、鏡檢和證實試驗。深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色，中心較深的菌落。（4）證實試驗革蘭氏染色及鏡檢：于上述平板上長出的菌落中挑取1～2個大腸菌群可疑菌落進行鏡檢和革蘭氏染色。復發(fā)酵試驗：將上述鏡檢之菌落同時接種于乳糖蛋白胨發(fā)酵管，置于36士1℃培養(yǎng)18～24h，觀察產氣情況，有產酸產氣者即證實有大腸菌群存在。（5）結果報告凡是在乳糖膽鹽發(fā)酵管產酸、產氣，在指示性培養(yǎng)基上能生長的，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，在復發(fā)酵管中產酸、產氣的，即說明有大腸菌群的細菌存在—大腸菌群陽性；有一項不符的，即說明無大腸菌群的細菌存在大腸菌群陰性。根據證實為大腸桿菌群陽性的管數，查相應的大腸桿菌MPN檢索表，報告每100毫升待檢樣品中大腸菌群細菌的最近似數。5管法結果如表9-2所示,15管法結果如表9-3所示。稀釋樣品查表后所得結果應乘以稀釋倍數。如所有乳糖發(fā)酵管均陰性時，可報告總大腸菌群未檢出。表9-2用5份10mL水樣時各種陽性和陰性結果組合時的最可能數（MPN）5個10mL管中陽性管數最可能數（MPN）0<12345>16實驗結果在純樣品發(fā)酵管中，觀察到了產氣、產酸現象。說明培養(yǎng)出了大腸菌群落。查MPN表，發(fā)現我們小組測的樣品中每100ml大腸桿菌群最可能數為200個。項目三革蘭氏染色實驗原理：通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由