化學品 麗斑麻蜥急性經(jīng)口毒性試驗 征求意見稿

1化學品麗斑麻蜥急性經(jīng)口毒性試驗本文件規(guī)定了化學品對麗斑麻蜥急性經(jīng)口毒性試驗的測定方法，包括試驗的材料、條件、操作、質(zhì)量控制、數(shù)據(jù)處理、試驗報告等的基本要求。2術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。2.1半數(shù)致死劑量medianlethaldose在急性經(jīng)口毒性試驗中，引起50%的供試生物死亡時的供試物劑量，用LD50（mg/kg體重）表示。2.2急性毒性acutetoxicity是指生物體短時間（天）暴露于某種化學物質(zhì)中產(chǎn)生的明顯不良反應。在本試驗中，麗斑麻蜥急性經(jīng)口毒性用半數(shù)致死劑量(LD50)來表示，即在特定時間內(nèi)（7d）導致50%數(shù)量的供試蜥蜴死亡的供試物濃度。2.3供試物testsubstances試驗中需要測試的物質(zhì)。2.4化學品chemicals化學品是指各種元素組成的純凈物和混合物，無論是天然的還是人造的。3方法原理將不同濃度的供試物以一次經(jīng)口灌注的方法暴露給麗斑麻蜥，以7d為一試驗周期，記錄麗斑麻蜥的死亡情況，確定50%試驗麗斑麻蜥死亡時的供試物劑量，用LD50（mg/kg體重）表示。4試劑和材料4.1供試生物試驗應選擇同一種群、體長、體重和年齡相似的麗斑麻蜥（Eremiasargus）成年蜥蜴。試驗用麗斑麻蜥體重變異系數(shù)不超過平均體重的20%。試驗前至少需要馴養(yǎng)7d，馴養(yǎng)條件和照明條件與試驗時的條件一致。馴養(yǎng)期間死亡率小于5%，且生長狀態(tài)符合物種生長規(guī)律2配置不同濃度供試物溶液過程中的溶劑一般選擇水(GB/T6682-2008規(guī)定的實驗室一級用水)或者食用油(例如玉米油)。試驗用水的pH值應為6.5-8.5。試驗期間水質(zhì)保持恒醇，二甲基亞砜等，其中有機溶劑用量一般不得超過0.1mL/L(0.1%),選擇合適的容器進行試驗，每個容器應容納10只蜥蜴，可選擇在30cm×30cm×20可使用超聲波分散混勻，也可使用少量有機助溶劑(助溶劑用量一般不超過0.1mL/L)。貯備液的配制推薦使用機械方式(如攪拌或超聲),使供試物在溶劑中進行簡單的混合或攪動。試驗溫度控制在26℃—30℃,濕度控制在50%—70%,光暗比為14h:10h的環(huán)境中進3飼養(yǎng)：試驗開始24h前停止喂食，僅供清水，實驗開始后正常飼喂面包蟲。7.2預試驗正式試驗前先進行預實驗，按正式試驗的條件，以較大的間距設置4～5個濃度組，求根據(jù)預試驗確定的濃度范圍按一定間距設置5～7個劑量組，使死亡率分布在0%-100%之間。每劑量組10只蜥蜴(雌雄各半),并設空白對照組，使用助溶劑的還需增設溶劑對照組。對照組和各劑量組均不設重復，各濃度組間的濃度級差不得超過2倍。試驗用蜥蜴以記錄各處理組供試蜥蜴的死亡數(shù)，對試驗數(shù)據(jù)進行數(shù)理統(tǒng)計，求出LD值及95%置信限。7.4限度試驗也可應用有關(guān)毒性數(shù)據(jù)計算軟件進行分析和計算(如SPSS、USEPA—ProbitAnalysis等)。9.1試驗結(jié)束時，對照組死亡率不得超過10%。9.2試驗期間，溫度控制在26℃-30℃,濕度控制在50%-70%,光暗比為14h:10h。4——供試生物名稱、來源、大小及馴養(yǎng)條件等。10.3試驗條件 貯備液的制備方法，如果供試物難溶于水，則記錄配制貯備液的方法，參見附錄C——試驗設計(如試驗容器數(shù)量、試驗濃度等); 試驗條件：室溫、濕度、光周期等。 如果進行了限度試驗，報告結(jié)果： 在試驗期間，蜥蜴的中毒癥狀，行為反應異常狀況的以及死亡數(shù)； 式驗開始后7d的LDsa值和95%的置信限；——試驗過程中死亡率為0的最大試驗濃度(LDo);試驗過程中死亡率為100%的最小——對麗斑麻蜥毒性等級劃分參見附錄B。5(資料性)麗斑麻蜥體型較小，體長(吻端至肛門)50mm±10mm,體重3.5g±1.0g。頂鱗后緣齊平，略成方形；頰鱗2枚，前小后大；有兩枚大的眶上鱗食百余種動物，包括昆蟲綱、蛛形綱、甲殼綱、多足綱等，其中以昆蟲月是麗斑麻蜥的繁殖期。每次產(chǎn)卵6～8枚在11月份進入冬眠狀態(tài)。使用5m×1.2m×0.4m室內(nèi)玻璃缸進行麗斑麻蜥的飼養(yǎng)，缸內(nèi)鋪蓋10cm的軟土。溫度和相對濕度控制在26℃—30℃,使用六盞100W的白熾燈提供光照并維持光照時較高的溫度，光暗比控制在14h:10h。每天分兩次飼喂黃粉蟲幼蟲(TenebriomolitorL.),每兩天在麗斑麻蜥繁殖季節(jié)定期觸摸判斷雌體的懷卵狀態(tài)，懷卵雌體單獨養(yǎng)在有潮濕沙質(zhì)基質(zhì)的產(chǎn)卵缸(30cm×30cm×20cm)內(nèi)。所有產(chǎn)出的卵均可在產(chǎn)后2h內(nèi)被收集。轉(zhuǎn)移入設置為干蛭石(vermiculite):水=1:2的孵化基質(zhì)的塑料盆中，卵的1/3埋于基質(zhì)中。孵化度保持在26℃—30℃,孵化期一般為2個月左右。6(資料性)根據(jù)化學品對麗斑麻蜥急性經(jīng)口半數(shù)致死劑量LDso,將化學品對麗斑麻蜥的急性急性經(jīng)口LDo(mg/kg體重)高毒中毒7附錄C純度：準確稱量(移取)樣品g(mL),置于燒杯中，用蒸餾水或助溶劑溶解稀釋，定容至mL容量瓶中，充分搖勻，得貯備液濃度為mg/L,編號為溶液體積(mL)定容體積(mL)濃度(mg/L)溶液編號組別空白對照溶劑對照試驗1濃度(mg/L)死亡數(shù)(只)中毒癥狀8[1]Suski,J.G.,Salice,C.,Houpt,J.T.,Bazar,M.A.,Talent,L[2]Weir,S.M.,Yu,S.,Talent,L.G.,Maul,J.D2015.Improvingreptileecologicalriskassessment:Opesticidestoacommonlizardspecie[3]UsEnvironmentalProtectionAgency,2006.Reregistradecisionforpropyleneglycolanddipropyleneglycol.EPA739/R-06/002.Washi[4]USEnvironmentalProtection