++2.1植物細(xì)胞工程++第2課時+探究-實踐+菊花的組織培養(yǎng)課件-【知識精講精研】高二下學(xué)期生物人教版（2019）選擇性必修3

第2章

細(xì)胞工程第1節(jié)

植物細(xì)胞工程第2課時

探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)幼苗愈傷組織脫分化IAA/CTK比例適合再分化IAA/CTK比例先減小再增大植物組織培養(yǎng)過程示意圖完整植株外植體課題背景——植物的組織培養(yǎng)課題背景——細(xì)胞表現(xiàn)全能性的條件（1）離體狀態(tài)（2）無菌操作（防止雜菌污染）（3）種類齊全、比例適合的營養(yǎng)物質(zhì)（4）植物激素（主要是生長素和細(xì)胞分裂素）誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)（5）適宜的外界條件（溫度、pH、光照等）1、原理：外植體愈傷組織試管苗完整植株脫分化芽、根等再分化生長發(fā)育植物細(xì)胞一般具有

。全能性生長素/細(xì)胞分裂素

結(jié)果比值高(＞1)比值低(＜1)比值適中(=1)有利于根的分化，抑制芽的形成有利于芽的分化，抑制根的形成促進(jìn)愈傷組織的形成簡記為：“高”根，“低”芽，“中”愈傷探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)2、目的：（1）了解植物組織培養(yǎng)的基本原理；（2）了解生長素和細(xì)胞分裂素的濃度、用量比例對菊花愈傷組織形成和分化的影響；（3）嘗試進(jìn)行植物組織培養(yǎng)。3、材料用具：（1）材料：幼嫩的菊花莖段、培養(yǎng)基、體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%左右的次氯酸鈉溶液和無菌水等。探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)（2）用具：50mL錐形瓶（或植物組織培養(yǎng)瓶）、燒杯、酒精燈、超凈工作臺（或接種箱）、高壓蒸汽滅菌鍋、培養(yǎng)箱、封口膜、濾紙、標(biāo)簽、消毒用酒精棉球、培養(yǎng)皿、解剖刀和鑷子等。4、步驟：接種培養(yǎng)試管苗正常植株用酒精擦拭雙手和超凈工作臺臺面。流水充分沖洗外植體。②方法：①材料：幼嫩的菊花莖段30S酒精2-3次立即無菌水洗30min次氯酸鈉溶液2-3次立即無菌水洗（1）消毒：既要考慮消毒效果，又要考慮植物的耐受力兩次用無菌水清洗的目的：將酒精和次氯酸鈉溶液清洗干凈探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)消毒消毒接種培養(yǎng)試管苗正常植株在酒精燈火焰旁，將外植體的1/3~1/2插入誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基中；③封蓋和標(biāo)記（2）接種：注意：接種時注意外植體的方向，不要倒插！（將“形態(tài)學(xué)上端”朝上，下端朝下）①切分外植體：無菌操作將消過毒的外植體置于無菌的培養(yǎng)皿中，用無菌濾紙吸去表面的水分。用解剖刀將外植體切成0.5~1cm長的小段；外植體切塊②接種

用封口膜或瓶蓋封蓋瓶口，并在培養(yǎng)瓶上作好標(biāo)記。探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)接種培養(yǎng)試管苗正常植株脫分化脫分化形成愈傷組織有光時，往往容易形成維管組織，而不易形成愈傷組織。將接種了外植體的錐形瓶或植物組織培養(yǎng)瓶置于18~22℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，定期觀察和記錄愈傷組織的生長情況。避光（3）培養(yǎng)愈傷組織：①接種到誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件：激素比例1：1、置于黑暗、提供有機碳源（蔗糖）

探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)消毒接種培養(yǎng)試管苗正常植株②接種到誘導(dǎo)生芽培養(yǎng)基③接種到誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)15~20d后，將生長良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)生芽的培養(yǎng)基上。若先生根后面就不易生芽，所以要注意順序，該過程每日需要給予適當(dāng)時間和強度的光照！（3）培養(yǎng)：長出芽后，再將其轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基上，進(jìn)一步誘導(dǎo)形成試管苗。探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)消毒接種培養(yǎng)試管苗正常植株（4）移栽：移栽前先打開封口膜或瓶蓋，讓試管苗在培養(yǎng)箱內(nèi)生長幾日用流水清洗掉根部的培養(yǎng)基將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中，待其長壯后再移栽入土。每天觀察并記錄幼苗的生長情況，適時澆水、施肥，直至開花。探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)消毒5、注意事項：探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)（1）實驗中使用的培養(yǎng)基和所有的器械都要滅菌。接種操作必須在酒精燈火焰旁進(jìn)行，并且每次使用后的器械都要滅菌。（2）接種時注意外植體的方向，不要倒插。（3）誘導(dǎo)愈傷組織期間一般不需要光照；在后續(xù)的培養(yǎng)過程中，每日需要給予適當(dāng)時間和強度的光照。（4）培養(yǎng)離體植物組織常用的培養(yǎng)基——MS培養(yǎng)基水（去離子水）、無機營養(yǎng)（大量元素、微量元素）、有機營養(yǎng)（蔗糖、維生素、氨基酸）、天然附加物、植物激素（生長素、細(xì)胞分裂素等）誘導(dǎo)愈傷組織、誘導(dǎo)生芽和誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基成分有差別。6、結(jié)果分析與評價：用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合某些微生物的生長，如一些細(xì)菌、真菌等的生長。培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會導(dǎo)致實驗前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。（1）在植物組培過程中，為什么要進(jìn)行一系列的消毒，滅菌，并且要求無菌操作？探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)培養(yǎng)基、接種工具滅菌不徹底；外植體消毒不徹底；操作過程不符合無菌操作要求等。被污染的培養(yǎng)基6、結(jié)果分析與評價：（2）接種3~4d后，檢查外植體的生長情況，統(tǒng)計有多少外植體被污染，試分析它們被污染的可能原因。（3）從剛接種的外植體到長出愈傷組織需經(jīng)歷多少天？2周左右探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)固體基質(zhì)型，含水量高、蓄水性強、透性好，適合栽培珍珠巖

,珍珠巖是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖。蛭石是一種天然、無毒的礦物質(zhì)，在高溫作用下會膨脹的礦物。它是一種比較少見的礦物，屬于硅酸鹽。探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)進(jìn)一步探究：若想探究生長素與細(xì)胞分裂素的使用比例對植物組織培養(yǎng)的影響，則應(yīng)如何設(shè)計對照實驗。③

實驗組2：生長素/細(xì)胞分裂素＜1②

實驗組1：生長素/細(xì)胞分裂素=1③實驗組3：生長素/細(xì)胞分裂素＞1產(chǎn)生愈傷組織誘導(dǎo)生芽誘導(dǎo)生根①空白對照：不加任何激素探究?實踐菊花的組織培養(yǎng)外植體愈傷組織試管苗完整植株脫分化芽、根等再分化生長發(fā)育黑暗光照離體無菌培養(yǎng)基適宜的外界條件(溫度、光照、氣體等)水瓊脂有機物無機物植物激素蔗糖：提供能量、調(diào)節(jié)滲透壓。植物激素：主要是生長素和細(xì)胞分裂素。課堂小結(jié)1、某課外活動小組獲得了一株性狀優(yōu)良的結(jié)球生菜，并利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對其進(jìn)行快速繁殖。下列敘述正確的是（

）A.外植體消毒的過程為：酒精消毒30s→次氯酸鈉溶液處理30min→無菌水清洗2~3次B.愈傷組織是一種不定形的薄壁組織團塊，誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織時每日應(yīng)給予適時光照C.與誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基相比，誘導(dǎo)生芽培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素所占的比例更高D.移栽時，打開封口膜后直接用流水沖洗掉幼苗根部的培養(yǎng)基，再將幼苗移植到消過毒的蛭石環(huán)境中C課堂練習(xí)2、如圖為煙草植物組織培養(yǎng)過程的流程圖，下列有關(guān)敘述錯誤的是（

）A.過程③為脫分化，其實質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)B.過程②應(yīng)根據(jù)要求使用適宜的培養(yǎng)基，且在避光的環(huán)境中進(jìn)行C.對過程①獲取的根組織塊應(yīng)作消毒處理D.植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)是植物細(xì)胞的全能性課堂練習(xí)A3、有關(guān)菊花組織培養(yǎng)的說法，正確的是（

）A.需要有三種培養(yǎng)基，其營養(yǎng)成分中的碳源應(yīng)該是無機碳源B.要用高壓蒸汽滅菌法對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，即在100℃下保持15～30minC.在培養(yǎng)過程中要先讓愈傷組織生根后再使其生芽D.用酒精對外植體